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Techniques et méthodes de recherche sur les organoïdes de la prostate : culture tridimensionnelle (3D), centrifugation, Parafilm gaufré et méthode de fusion
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Sanghee Lee

Sanghee Lee

University of California San Diego

Le Dr Sanghee Lee a obtenu son doctorat du Département d'urologie et du Programme de biologie cellulaire et moléculaire de l'Université du Wisconsin-Madison en 2015. Son directeur de thèse était le Dr Wade Bushman, et elle a décrit les interactions nerveuses entre la vessie et la prostate ainsi que les modifications fonctionnelles induites par l'inflammation prostatique dans la vessie urinaire de souris adultes. En tant que chercheuse postdoctorale, le Dr Lee a étudié le dysfonctionnement vésical neurogène dans un modèle murin de sclérose en plaques au laboratoire du Dr Anna Malykhina à l'Université du Colorado Anschutz Medical Campus. En 2017, le Dr Lee a rejoint l'Université de Californie à San Diego (UCSD) en tant que première boursière en neuro-urologie avec un poste conjoint au Département d'urologie de l'UCSD et à l'Hôpital pour enfants Rady de San Diego. Les membres de son comité de recherche sont le Dr Christina Jamieson (PI), le Dr George Chiang, le Dr Yahir Santiago-Lastra, le Dr Todd Coleman et le Dr Tony Yaksh. Ses intérêts de recherche actuels portent sur les mécanismes de métastase et de douleur dans le cancer de la prostate métastatique osseuse.  

Christina Jamieson

Christina Jamieson

University of California San Diego

La Dre Jamieson est une scientifique translationnelle en oncologie urologique au sein du Département d'urologie de l'Université de Californie à San Diego (UCSD). Elle étudie les causes des métastases osseuses et a mis au point de nouveaux modèles dérivés d'échantillons de patients afin de tester de nouvelles thérapies et offrir de l'espoir aux patients atteints d'un cancer de la prostate avancé et résistant à la castration.  Elle a obtenu son doctorat en immunologie moléculaire à l'Université Brandeis sous la direction du Dr Ranjan Sen, où elle a démontré que la stimulation du récepteur des cellules T (TCR) induisait elle-même l'activation de NF-kB et de NF-AT. La Dre Jamieson s'est rendue à l'Université de Californie à San Francisco (UCSF) pour son stage postdoctoral, d'abord avec le Dr Dan R. Littman, puis avec le Dr Keith R. Yamamoto. Elle a mis au jour des mécanismes de communication croisée des signaux entre le TCR et les glucocorticoïdes qui régulent la survie des progéniteurs des cellules T, façonnant ainsi le répertoire immunitaire. Ces voies peuvent également être altérées dans les cancers induits par les hormones stéroïdiennes.  La Dre Jamieson a commencé comme professeure adjointe dans les départements d'urologie et de génétique humaine à l'UCLA afin d'étudier les mécanismes de résistance aux thérapies basées sur les hormones stéroïdiennes dans le cancer, puis elle a rejoint l'UCSD pour se concentrer sur la manière de surmonter la résistance thérapeutique dans le cancer de la prostate métastatique osseux, en utilisant des modèles basés sur des échantillons de patients et de nouvelles thérapies.

Collection Overview

Les organoïdes sont des structures cellulaires tridimensionnelles (3D) cultivées ex vivo qui sont censées recréer et maintenir les conditions in vivo de viabilité cellulaire et de réponse aux médicaments thérapeutiques. Le Matrigel ou le collagène ont été utilisés comme matrice extracellulaire afin de permettre aux cellules provenant de patients de former des structures tridimensionnelles ou organoïdes, notamment des structures kystiques et des sphéroïdes. Les organoïdes cultivés en 3D sont considérés comme d'excellents modèles pour comprendre les mécanismes de la tumorigenèse et évaluer les effets des agents anticancéreux. Des méthodes ont donc été développées pour divers types de cancers, tels que ceux du cerveau, du sein, du poumon et de la prostate, entre autres. La prostate présente toutefois une particularité : les méthodes actuelles de culture d’organoïdes ont un taux de réussite inférieur à celui observé pour d'autres cancers. La difficulté à établir des cultures d’organoïdes prostatiques pourrait être en partie due à l’hétérogénéité tumorigénique. La plupart des organoïdes prostatiques proviennent de xénogreffes dérivées de patients (PDX) et sont génomiquement représentatifs du cancer de la prostate du patient. Les modèles d’organoïdes PDX sont donc inestimables pour l’étude de la signalisation en aval des molécules cibles et des effets du traitement par des agents anticancéreux. Plusieurs équipes ont mis au point des protocoles modifiés optimisés selon leurs objectifs expérimentaux. L’objectif de cette collection est de (1) fournir plusieurs exemples de conditions de culture optimisées pour des organoïdes 3D de cancer de la prostate dérivés de patients, (2) présenter des méthodologies complémentaires pour des techniques à cellule unique telles que l’hybridation in situ en ARN (RNA-FISH) et la cytométrie en flux, (3) partager des détails minutieux relatifs à la technique d’immunohistochimie (IHC) et d’immunofluorescence (IF) spécifiques aux organoïdes, et (4) proposer des critères différentiels permettant d’évaluer les effets du traitement médicamenteux sur les organoïdes. 

Articles

Les cultures organoïdes de la prostate comme outils pour traduire les génotypes et les profils mutationnels en réponses pharmacologiques
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2019

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