Utilisation de l'extracteur de Soxhlet pour isoler des biomarqueurs lipidiques à partir de sédiments

1. le programme d’installation et préparation du matériel

1. Prélever un échantillon de sédiments marins congelés, lyophilisées, broyées et homogénéisé. Un exemple comme celui-ci contient plusieurs des composés nécessaires pour les normes.
   1. Des normes sont souvent faites de sédiments qui restent après une expédition Carottage ou analyse. Par exemple, dans cette expérience, les sédiments qui proviennent de la « Patch de boue », situé juste au sud de Cape Cod sont extraite. Ces sédiments a été prise dans le cadre d’une expédition Carottage mais ne servira pas à répondre à des questions scientifiques. Nous pouvons donc l’utiliser pour faire une norme.
   2. Placez un morceau de ~ 100 g des sédiments dans le congélateur pendant la nuit afin qu’il gèle à travers.
   3. Une fois que le sédiment est complètement gelé, allumez le gel sèche (disponible auprès de nombreux détaillants de matériel scientifique comme Fisher) et attendez que le condensateur atteint sa valeur de consigne (souvent ~-30 ° C).
   4. Charger l’échantillon de sédiments dans le gel sèche et fermer la purge pour commencer en tirant un vide sur l’échantillon.
   5. Selon la quantité d’eau dans les sédiments et la taille de l’échantillon, il peut prendre plusieurs jours pour sécher l’échantillon.
   6. Une fois que l’échantillon est sec, éteindre l’évent de sécheuse, gel il et supprimer l’exemple.
   7. Placer l’échantillon dans un mortier rincé au solvant et les moudre en poudre à l’aide d’un pilon. Pour ce faire à l’ensemble de l’échantillon et le magasin dans un bocal en verre dans le congélateur jusqu’au moment de l’extraire.
2. Selon la taille de l’échantillon, utiliser des flacons avec des volumes allant de 4 à 60 mL. Pour cette expérience, utiliser les flacons en verre de borosilicate (40 mL) et solvants sécuritaires caps. Brûler les flacons, pipettes en verre borosilicate et pesage tins à 550 ° C pendant 6 h avant d’assurer l’élimination des contaminants organiques possibles.
3. Obtenir le dichlorométhane et le méthanol (les deux sont courantes dans les laboratoires de géochimie organiques plus), puis les utiliser individuellement pour rincer les outils de laboratoire et de la verrerie avant utilisation. Un mélange de dichlorométhane (DCM) de méthanol (MeOH ; 9:1) est utilisé dans nombreux laboratoires d’extraire efficacement des biomarqueurs avec un large éventail de polarités. Solvants doivent être exempts de contaminants organiques.
4. Acquérir un appareil de soxhlet à utiliser dans cette expérience (ceux-ci peuvent être achetés de Fisher Scientific ou autre détaillant de science), puis lavage et brûlée à 550 ° C pendant 6 h avant son utilisation.
5. Obtenir des cosses de fibre de verre (peut être acheté de Whatman) et la combustion eux à 550 ° C pendant 6 h avant son utilisation.

2. préparation de l’échantillon

1. Placez une tible pesant étain sur l’échelle du laboratoire, puis tare.
2. Rincer la spatule de laboratoire avec le solvant, puis utilisez-la pour transférer une masse appropriée de l’échantillon dans l’étain pesage et enregistrer la masse.
   1. La masse de l’échantillon varie en fonction de sa teneur en matière organique. Matière organique relativement maigre matériel (boue marine) peut exiger plusieurs grammes, tandis que la matière organique riche matériel (tissus foliaires) peut-être nécessiter beaucoup moins.
3. Transférer la totalité du matériel dans l’étain pesage dans un dé de fibre de verre de consommé.

3. extraction

1. ~ 400 mL du mélange (9:1) DCM:MeOH de transfert dans le ballon à fond rond (le ballon doit être à moitié plein) et mettre en chauffage du manteau. Ajouter plusieurs puces bouillante (5-10) solvant rincée.
2. Placer la cartouche de l’échantillon, plate vers le haut, dans la pièce maîtresse de l’appareil de Soxhlet.
3. Placez la pièce maîtresse sur le ballon à fond rond et fixer avec une pince de verrerie.
4. Installer le condenseur sur le dessus de la pièce maîtresse de la Soxhlet et fixer avec un collier de verrerie.
5. Joindre une des conduites d’eau froides du condenseur à la canalisation d’eau froide dans la hotte à l’aide d’un collier de serrage. L’autre itinéraire dans le drain.
6. Faire couler l’eau pour assurer le drainage et circulation appropriée.
7. Le chauffe-ballon et régler la température jusqu'à ce que le solvant dans le ballon à fond rond est en légère ébullition.
8. Surveiller l’extraction quelques fois au cours de la prochaine heure.
   1. Vérifiez que la température est réglée correctement à l’ébullition, le solvant est condensation dans le condenseur et dégoulinant en pièce maîtresse, la pièce est de remplissage et vidange correctement et l’eau est correctement qui s’écoulent dans l’évacuation de la hotte.
9. Surveiller l’extraction sur les 36 h suivant.
   1. S’assurer que la température est réglée correctement à ébullition, le solvant est condensation dans le condenseur et dégoulinant en pièce maîtresse, la pièce se remplit et vidange correctement, l’eau est correctement qui s’écoulent dans l’évacuation de la hotte et le niveau de solvant dans le ballon à fond rond est toujours environ à moitié plein.
10. Après 36 h, arrêter l’extraction en désactivant le chauffe-ballon.
11. Étiqueter le flacon « TLE ».