Purification d'un extrait lipidique par chromatographie sur colonne

1. le programme d’installation et préparation du matériel

1. Obtenir un lipide total extrait (TLE) en utilisant une méthode d’extraction par solvant (Sonication, Soxhlet ou Accelerated Solvent Extraction (ASE)).
2. Rassembler ce qui suit : en verre borosilicaté tible pipettes et ampoules, gel de silice, hexane, le dichlorométhane (DCM) et du méthanol.
   1. Ces matériaux peut être achetés à partir de n’importe quel détaillant de produits chimique. Les réactifs doivent être pure et libre à partir d’hydrocarbures.
3. Également obtenir la laine de verre de consommé et flacons en verre de borosilicate de 4 mL.
4. Assurez vous d’avoir un moyen de soutenir la colonne et les flacons de collection au cours de la procédure. Par exemple, un stand avec pinces et un rack de vil. Plusieurs laboratoires ont conçu des grilles sur mesure qui contiennent plusieurs colonnes et des flacons de collection (Figure 2). Cela permet à nombre de colonnes à être exécuté en même temps.

2. méthodes

1. Commencez par l’échantillon sec dans un flacon de 4 mL. Si l’échantillon pèse plus de ~ 10 mg une fois sec, il peut avoir besoin de se diviser avant d’effectuer les étapes suivantes, comme le gel de silice peut seulement réagir avec une masse finie de la matière organique.
2. Suspendre l’échantillon dans une petite quantité d’hexane. Il s’agit de la première et la moins polaire des trois solvants utilisés dans cette expérience.
3. S’il y a échantillon collé à l’intérieur de la cuvette, laisser agir les échantillons pendant 5 min.
4. Charger une petite quantité de laine de verre dans la partie supérieure de la pipette à l’aide d’un ensemble de pince à épiler propre. Poussez doucement la laine de verre vers le bas de la pipette, l’aide d’une autre pipette, pour former un bouchon.
5. Transvaser avec soin le gel de silice dans la pipette jusqu'à ce qu’il est environ à moitié pleine.
6. Placez un flacon de 4 mL de collecte des déchets dans la colonne.
7. Faire tremper le gel de silice dans la pipette et 3 volumes d’hexane. Cela la colonne des conditions, supprime les bulles d’air et rince les éventuelles impuretés hors du gel de silice.
8. Une fois le lavage final est terminé, retirer la cuvette de la collecte des déchets et le remplacer par un flacon pour recueillir la fraction apolaire.
9. Transvaser avec soin l’ensemble de l’échantillon dans l’hexane dans la colonne à l’aide d’une pipette. Rincer le flacon d’échantillon deux fois plus petits volumes d’hexane et transvaser dans la colonne. Permettre à l’hexane, que l’échantillon a été transféré à se pour imbiber complètement le gel de silice. À aucun moment au cours de la procédure devrait le silicagel dessécher.
10. Continuez à ajouter hexane à la partie supérieure de l’échantillon jusqu'à ce que le flacon de collection sous la colonne est presque plein (~ 4 mL).
    1. Permettre à tous de l’hexane pour entrer dans le gel de silice avant de commencer avec le solvant prochain.
11. Placer le flacon de collection de polarité moyenne sous la colonne.
12. Ajouter DCM vers le haut de la colonne jusqu'à ce que le flacon est presque plein. Encore une fois, permettre à tous de la DCM pour entrer dans le flacon de collection avant de commencer le prochain solvant.
13. Placer le flacon de collection polar au titre de la colonne.
14. Ajouter méthanol vers le haut de la colonne jusqu'à ce que la collection vile est presque pleine.