Techniques d'identification des rongeurs II

La capacité d’identifier les animaux de recherche est un aspect essentiel de la tenue de registres scientifiques et de la collecte de données. La distinction entre les animaux permet de s’assurer que le bon sujet est utilisé pour la procédure expérimentale prévue.

Il existe plusieurs méthodes permanentes et temporaires que les scientifiques utilisent pour identifier les animaux de laboratoire. Dans cette vidéo, nous aborderons les méthodes de tatouage de la queue de rongeur adulte, des orteils nouveau-nés et des orteils adultes. Ensuite, nous aborderons la technique de placement de micropuces couramment utilisée chez les rats adultes, suivie de la méthode d’identification temporaire universelle qui utilise des colorants non toxiques.

Avant de nous plonger dans les protocoles de ces méthodes, passons en revue les considérations, les avantages et les inconvénients de chacune de ces techniques. Le tatouage de la queue est bénéfique dans de nombreux protocoles de recherche, tels que les expériences impliquant l’imagerie IRM ou ceux où les animaux sont génétiquement prédisposés à des affections cutanées, y compris la dermatite ulcéreuse. Un autre avantage des tatouages de queue est qu’ils sont facilement visualisés sans avoir à retenir manuellement l’animal.

Certains protocoles expérimentaux exigent le génotypage des nouveau-nés dès le premier jour, ce qui rend indispensable l’identification permanente de ces petits. L’utilisation du tatouage des orteils permet d’identifier ces animaux jusqu’à ce qu’ils soient assez grands pour être marqués ou poinçonnés. C’est une bonne idée d’appliquer un tatouage d’orteil similaire sur la mère adulte pour l’empêcher de réagir de manière excessive et de toiletter excessivement le nouveau tatouage de son chiot. Bien qu’il y ait plusieurs avantages à utiliser cette méthode, l’inconvénient est que la procédure nécessite des compétences, de la pratique, une main ferme et un équipement spécialisé.

La prochaine méthode d’identification permanente à l’étude est la micropuce. Bien que l’implantation de micropuces soit un processus relativement facile, plusieurs facteurs limitent son utilité. Tout d’abord, ces puces ont à peu près la taille d’un gros grain de riz et nécessitent une aiguille de calibre 10-12 pour l’implantation, ce qui est trop gros pour une souris, limitant ainsi la méthode aux rats adultes. Deuxièmement, les micropuces sont coûteuses et ne sont donc pas idéales pour identifier un grand nombre d’animaux. Enfin, les micropuces ne peuvent pas être utilisées dans les expériences impliquant l’IRM. Cependant, s’il existe un groupe d’animaux de valeur comme les animaux reproducteurs avec une génétique unique qui doit être identifié en permanence, des micropuces peuvent être utilisées.

La dernière méthode dont nous parlerons est l’identification temporaire à l’aide de marqueurs non toxiques. Les marqueurs non toxiques sont conçus pour colorer la fourrure des animaux de recherche. Cette méthode est idéale pour les études à court terme qui nécessitent que les animaux ne soient identifiés que pendant quelques heures ou quelques jours, bien que les colorants puissent rester visibles pendant plusieurs semaines. Certains chercheurs utilisent ces marqueurs en conjonction avec d’autres méthodes d’identification pour repérer facilement des animaux spécifiques dans un groupe.

Maintenant que nous avons discuté du contexte, apprenons les procédures, en commençant par le tatouage de la queue. Ici, nous allons démontrer la procédure sur des souris adultes, mais la même chose peut être appliquée pour les rats sevrés et adultes.

Pour minimiser l’appréhension ou la détresse des animaux, le tatouage de la queue doit être effectué dans la salle d’intervention plutôt que dans la zone d’hébergement des animaux. Avant d’appliquer le tatouage, retenez la souris à l’aide d’une ventouse, la queue tendue de l’ouverture. La bride de la coupelle est maintenue en place par une plate-forme en verre spécialisée. Ensuite, nettoyez la queue avec une petite quantité de nettoyant pour mouchoirs dilué sur un coton-tige. Cette étape est importante pour éliminer toute accumulation de tartre et de débris qui pourraient interférer avec le tatouage. Ensuite, appliquez de l’huile sur la peau de la queue avec un autre écouvillon. Cela minimise les dommages aux tissus en adoucissant la peau et en fournissant une lubrification à l’aiguille de tatouage. De plus, l’huile dissout la saleté non éliminée par le processus de nettoyage et empêche les taches d’encre sur la peau non tatouée. Vous êtes maintenant prêt à appliquer le tatouage.

Pendant que la machine est éteinte, trempez la pointe de l’aiguille de tatouage, qui est soit une lancette, soit une aiguille hypodermique, dans le pigment. Ensuite, activez le pistolet à l’aide de la pédale, placez l’outil de tatouage sur la queue et amenez la pointe de l’aiguille sur le site du tatouage. Approcher la peau avec l’aiguille à un 90 ? inclinent et pénètrent suffisamment profondément dans le derme pour que le pigment se dépose de façon permanente. Un changement de son de l’aiguille activée peut aider à discerner la profondeur. Faites des traits courts et réguliers dans une direction, en formant des chiffres et des lettres. Essayez d’utiliser des courbes et des angles minimaux lors de l’application du tatouage.

Pour ajouter du pigment supplémentaire, trempez la pointe de l’aiguille dans le réservoir de colorant pour chaque caractère pour les souris et chaque caractère pour les rats. Épongez le tatouage terminé avec une serviette en papier pour enlever l’excès de pigment. La présence de sang sur le tatouage ou l’essuie-tout indique que le tatouage a été fait trop profondément, et qu’il est donc peu probable qu’il soit permanent. Renforcez les caractères minces avec un pigment supplémentaire en plaçant l’aiguille parallèlement au pigment déjà déposé, et non sur le dessus. Nettoyez soigneusement le matériel de tatouage après chaque utilisation, et une aiguille neuve ou stérilisée et une nouvelle réserve d’encre doivent être utilisées entre les cages pour éviter la transmission de maladies.

Ensuite, nous apprendrons à appliquer des tatouages aux orteils aux nouveau-nés et aux adultes. Ici, nous allons démontrer la procédure chez la souris, mais les mêmes étapes sont applicables aux rats.

Les nouveau-nés sont tatoués sur les orteils car les coccyx ne sont pas ossifiés et la longueur de la queue est trop petite. De plus, à mesure que la queue grandit, la peau s’étire et les chiffres peuvent devenir déformés, faibles et illisibles. Commencez par placer une tache de pâte de tatouage verte sur une surface non poreuse telle que du papier d’aluminium. Ensuite, placez le chiot pré-sevré dans votre main à l’aide d’un tampon de gaze. Positionnez le pied entre votre pouce et le creux de votre index pour exposer les orteils choisis pour le tatouage. Tenez le pied près des orteils de sorte que l’orteil sélectionné ait une surface solide derrière lui pour l’empêcher de se plier.

Maintenant, trempez la pointe d’une lancette de 4,5 mm dans la pâte à tatouer. Ensuite, piquez l’orteil souhaité selon le code prédéterminé. Pour assurer une bonne perméation, piquez trois fois le même endroit. Pénètre suffisamment dans la peau pour que la pâte laisse une marque, mais évitez de piquer si profondément que l’orteil saigne. Épongez doucement le nouveau tatouage avec la gaze pour enlever tout excès de pâte de tatouage et remettez l’animal dans sa cage. Utilisez une nouvelle lancette pour la prochaine portée. Un jour après l’intervention, vérifiez que le tatouage est visible.

Lorsque les chiots allaités sont tatoués, il est conseillé de tatouer également la mère. Cela peut l’empêcher de réagir de manière excessive et de toiletter excessivement les tatouages de son chiot. Pour appliquer un tatouage d’orteil à un adulte, encore une fois, placez d’abord une petite tache de pâte de tatouage verte sur une feuille d’aluminium. Ensuite, immobilisez l’animal à l’aide d’un cône en plastique ou d’une contention en plexiglas qui permet d’accéder aux pattes arrière. Étendez le pied à partir du dispositif de retenue et positionnez le pied entre votre pouce et le creux de votre index pour exposer les orteils choisis pour le tatouage.

Maintenant, trempez la pointe d’une lancette de 5 mm dans la pâte à tatouer. Et, comme précédemment, appliquez le tatouage en piquant et en perforant la peau de l’orteil souhaité au moins trois fois pour assurer une bonne pénétration. Ensuite, épongez doucement le tatouage pour enlever tout excès de pâte et remettez l’animal dans sa cage. Comme pour les nouveau-nés, vérifiez le tatouage un jour après la procédure. Si la marque est visible le lendemain du tatouage, elle doit rester visible toute la vie de l’animal. S’il est faible ou non visible, refaites le tatouage comme décrit précédemment.

La prochaine méthode d’identification dont nous parlerons consiste à implanter des micropuces dans des rongeurs. La puce couramment utilisée pour l’étiquetage des animaux de laboratoire est une puce d’identification par radiofréquence, ou RFID. Habituellement, la puce est préchargée dans des aiguilles, qui peuvent ensuite être placées dans l’applicateur. Pour l’insertion de la puce, utilisez un tube en plexiglas pour retenir l’animal en vous assurant que vous pouvez toujours saisir la peau par-dessus les épaules. Tout d’abord, tentez la peau pour créer une poche. Placez ensuite l’aiguille à travers la peau, biseautez vers le haut, parallèlement à la colonne vertébrale et dirigez-la vers la queue. Éjectez la micropuce par voie sous-cutanée et retirez l’aiguille. Pincez la peau fermée au site d’injection pour empêcher la puce de suivre l’aiguille hors de la peau. Continuez à appliquer une pression pour assurer l’hémostase de tout saignement cutané. Retirer l’animal du dispositif de contention et balayer la puce à l’aide du lecteur fourni par le fabricant pour confirmer le code d’identification.

Enfin, apprenons à appliquer des colorants temporaires sur les rongeurs pour l’identification. Commençons par les souris. Tout d’abord, immobilisez l’animal de manière à ce que la zone entre les omoplates soit accessible. Cette partie du corps est à l’abri de l’auto-toilettage. Placez une tache ou une traînée de colorant sur la fourrure dans cette zone et remettez l’animal dans sa cage.

Pour les rats, retenez l’animal manuellement en saisissant la queue et en la tenant tendue. Cela garantit que la zone d’application du colorant est facilement accessible, ce qui peut être la tête, les épaules ou la croupe. Placez une tache ou une traînée de colorant sur la fourrure. Il est parfois possible d’appliquer un colorant non toxique sans retenir l’animal. Vérifiez périodiquement les marques de ces animaux, surtout si vous les utilisez comme seul identificateur pendant plus de quelques jours.

Maintenant que nous avons passé en revue les procédures de ces différentes méthodes d’identification, voyons comment les scientifiques les utilisent aujourd’hui dans différentes études de recherche.

L’utilisation de rongeurs dans les expériences comportementales est assez courante. Ici, les chercheurs ont utilisé le tatouage de la queue pour marquer les animaux de façon permanente, puis les ont observés pendant plusieurs jours dans un environnement de cage domestique construit artificiellement. Les données recueillies ont révélé des différences de comportement, comme la distance parcourue, entre le contrôle et les animaux de laboratoire, sur une période de 10 jours après l’opération.

Dans une autre expérience de comportement, les chercheurs ont effectué un tatouage des orteils chez des nouveau-nés et les ont placés dans une boîte d’enregistrement avec des microphones spéciaux pour enregistrer les vocalisations ultrasonores. Le but de cette expérience était d’examiner les différences de taux d’appel, c’est-à-dire le nombre de vocalisations par minute, chez les souris de type sauvage et les souris déficientes en Shank2 - un modèle d’autisme - sur une période néonatale de 12 jours et à l’âge adulte.

Enfin, comme nous l’avons vu précédemment, l’utilisation d’un colorant non toxique est un moyen efficace de marquer les animaux pour des expériences à court terme. Ici, les scientifiques se sont intéressés à l’expression transitoire d’une protéine plasmatique. Ils ont donc marqué les animaux avec des marqueurs temporaires, injecté l’ADN plasmidique par voie intraveineuse et prélevé l’échantillon de sang deux jours plus tard pour déterminer l’expression des protéines à l’aide de la technique du western blot.

Vous venez de regarder l’introduction de JoVE au tatouage, à la mise en place de micropuces et aux méthodes d’identification temporaire pour les souris et les rats de laboratoire. L’identification des animaux est un élément essentiel de la tenue de registres dans la recherche. Par conséquent, lors du choix de la méthode d’identification appropriée, de nombreux facteurs doivent être pris en compte. Cela inclut le niveau d’inconfort pour l’animal, la facilité de la technique, les besoins expérimentaux et enfin le coût associé à la méthode. Comme toujours, merci d’avoir regardé !