Techniques d'identification des rongeurs I

L’identification correcte des animaux de laboratoire est une exigence fondamentale de la recherche biomédicale. Il est essentiel que les chercheurs soient capables de faire la distinction entre les animaux individuels afin que le bon animal soit utilisé pour les procédures expérimentales et la collecte de données. Les scientifiques ont mis au point plusieurs méthodes permanentes et temporaires pour identifier les animaux de laboratoire. Ici, nous allons aborder les deux méthodes les plus couramment utilisées : le marquage d’oreille et le poinçonnage d’oreille.

Avant d’entrer dans le vif du sujet, présentons le code de poinçonnage d’oreille, les types de poinçons disponibles et discutons des avantages et des inconvénients de cette méthode. Comme vous l’avez peut-être deviné, le poinçonnage d’oreille consiste à percer un trou ou une encoche dans l’oreille externe ou le pavillon de l’animal. Afin de normaliser cette méthode, des codes universels de poinçonnage d’oreille ont été développés.

Selon la position, les encoches sur l’oreille droite représentent des chiffres uniques, comme 1, 3 et 5, et une encoche double représente 2. En utilisant différentes combinaisons de ces encoches, et en additionnant la valeur de chaque encoche, vous pouvez étiqueter l’animal de 1 à 9. De même, sur l’oreille gauche, les mêmes encoches représentent les dizaines. Et encore une fois, différentes combinaisons couvriront la plage de 10 à 90. Les trous au centre des pavillons droit et gauche représentent respectivement 100 et 200. Et les trous dans les deux indiquent 300. Par conséquent, par exemple, si vous voulez étiqueter l’animal 173, vous devez percer un trou au centre de l’oreille droite pour 100, trois encoches dans l’année gauche pour additionner le total à 70, et une seule encoche dans l’oreille supérieure droite représentant la place de l’unité « trois ».

Voyons maintenant les trois styles de poinçons d’oreille disponibles dans le commerce : le poinçon à ciseaux, le poinçon au pouce et le poinçon à levier. Chacun d’entre eux a ses avantages et ses inconvénients.

Le poinçon du pouce nécessite un mouvement de pincement, mais il est suffisamment petit pour s’adapter à un tube Eppendorf afin que le tissu de l’oreille puisse être plus facilement collecté. Sur le plan ergonomique, le poinçon à levier est plus facile à utiliser que le poinçon au pouce, en particulier pour les oreilles plus épaisses des rats plus âgés. Le poinçon ciseaux ne nécessite pas de mouvement de pincement, évitant ainsi la fatigue et les blessures du canal carpien.

Bien qu’il s’agisse d’une méthode d’identification simple et rapide, le poinçonnage des oreilles a certaines limites. Tout d’abord, le code de poinçonnage d’oreille discuté ci-dessus a une limite supérieure de 399, ce qui peut limiter l’utilisation de cette méthode dans certaines études à grande échelle. Une autre limitation est que la plupart des animaux doivent être saisis par la peau pour lire le code, ce qui augmente le temps qu’ils sont manipulés. À mesure que les rats vieillissent, la peau de leurs oreilles s’épaissit et il est difficile d’effectuer des coups de poing dans les oreilles sans causer une détresse importante à l’animal. Par conséquent, il est préférable d’effectuer les coups d’oreille sur les jeunes rats au moment du sevrage. Pour les rats adultes qui doivent être identifiés, l’utilisation d’un anesthésique par inhalation doit être envisagée lors de l’exécution des coups de poing à l’oreille.

Maintenant que vous avez quelques informations de base sur le code du poinçon d’oreille et les types d’outils disponibles, apprenons à effectuer cette technique chez la souris.

Avant de commencer la procédure, il est recommandé de nettoyer les outils de poinçonnage avec une solution désinfectante, de les rincer à l’alcool et de les sécher soigneusement. Évitez d’autoclaver les poinçons d’oreille, car cela finirait par les émousser.

Pour commencer, décidez du code expérimental de l’animal et du poinçon à utiliser. Utilisons le code 173 et le poinçon à ciseaux comme exemples ici. La même procédure s’applique à tout autre code ou poinçon. Lorsque vous êtes prêt, immobilisez l’animal en le saisissant par la peau afin que les oreilles soient facilement accessibles. Commencez par le trou pour 100. Placez l’oreille droite dans le poinçon de manière à ce que le trou du poinçon soit positionné à l’écart de la marge du pavillon. Ensuite, appliquez une pression pour fermer les ciseaux rapidement et fermement afin de couper la peau. Ensuite, relâchez le poinçon et retirez-le de l’oreille. Évitez de tirer ou de tordre le poinçon pour éviter de déchirer l’oreille. Pour faire une encoche, placez le poinçon sur le bord du pavillon de l’oreille au bon endroit, dans ce cas en haut de l’oreille droite pour le « trois » à la place de l’unité du code, et faites de même - appliquez une pression rapide et ferme, puis ouvrez les ciseaux pour le retirer. Répétez la même procédure sur l’autre oreille pour percer trois encoches - deux pour « 20 » près du coin extérieur et une pour « 50 » près du coin intérieur, totalisant le code à « 70 ».

Confirmez que le bon code a été poinçonné avant de remettre l’animal dans la cage. Encore une fois, nettoyez le punch avec un désinfectant, rincez-le à l’alcool et séchez-le soigneusement pour éviter la rouille.

Passons maintenant au marquage auriculaire, qui est une autre méthode peu coûteuse et facile à réaliser pour l’identification individuelle des souris et des rats. Il existe une variété d’étiquettes d’oreille disponibles dans le commerce. Il s’agit notamment d’étiquettes métalliques sur lesquelles sont gravés une série de chiffres et/ou de lettres, et d’étiquettes en plastique avec des caractères ou des codes-barres sur des arrière-plans de couleurs vives.

L’un des inconvénients des étiquettes métalliques est qu’il est souvent nécessaire de prendre l’animal pour lire le code. En revanche, les étiquettes en plastique sont faciles à lire sans avoir à manipuler les animaux. Un autre avantage des étiquettes en plastique est leur compatibilité avec l’imagerie IRM. Bien que les balises fournissent un identifiant individuel pour une souris ou un rat, elles ne sont pas infaillibles. Les étiquettes peuvent être perdues en raison d’un toilettage excessif, d’une dermatite ou d’une infection, d’un auto-traumatisme infligé en essayant de retirer les étiquettes en raison d’une intolérance, de bagarres et d’un comportement reproducteur agressif. Si plusieurs animaux sont logés dans la même cage, la perte d’une étiquette d’oreille peut être gênante. Pour contourner ce problème, il faut utiliser une forme d’identification secondaire, comme un code poinçonné sur l’oreille opposée à l’étiquette. Une installation devrait normaliser à la fois le choix de l’oreille à étiqueter et le code à utiliser sur l’autre oreille, et tous les codes devraient être indiqués sur la carte de la cage.

Apprenons maintenant à bien appliquer une étiquette d’oreille, car un mauvais positionnement peut avoir plusieurs conséquences fâcheuses. Après l’application, nous aborderons également le retrait de l’étiquette d’oreille, qui est généralement effectué en cas d’infection due à l’application de l’étiquette.

La première étape consiste à sélectionner une étiquette appropriée pour les animaux à identifier. Ici, nous utiliserons une étiquette métallique pour démontrer la procédure sur des souris. Assurez-vous de commander l’applicateur qui convient à la taille et au style spécifiques des étiquettes d’oreille utilisées. Retirez délicatement l’étiquette du support en carton et orientez-la dans l’applicateur de manière à ce que l’extrémité avec le trou soit positionnée sur la zone crantée de l’applicateur. L’extrémité pointue de l’étiquette doit être opposée à l’encoche.

Lorsque vous êtes prêt à appliquer l’acrochordon, immobilisez l’animal de manière à ce que les oreilles soient facilement accessibles. Les animaux peuvent être moins susceptibles de se débattre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface telle que le dessus de la cage ou un comptoir. Une fois que l’animal est attaché, placez la pointe de l’étiquette profondément dans la conque de l’oreille de sorte que les numéros de l’étiquette soient orientés vers le dos de l’animal. Ensuite, fermez fermement l’applicateur ; L’étiquette d’oreille percera l’oreille et se verrouillera. Lorsque vous relâchez, l’oreille étiquetée tombera de l’applicateur. Vérifiez que la balise a été correctement positionnée et appliquée. Si vous préférez que les numéros de l’étiquette d’oreille soient orientés vers le nez de l’animal, placez la pointe de l’étiquette à la base du pavillon à l’arrière de l’oreille, puis appuyez pour verrouiller l’étiquette en place.

Les étiquettes doivent être placées de manière à ne pas causer de courbure de l’oreille, à n’interférer pas avec la mobilité de l’animal ou à ne pas s’accrocher à une partie de la cage. Si l’étiquette est placée trop près du bord de l’oreille, elle peut facilement être déchirée. S’il est positionné trop près de la tête, la peau de la région du cou peut se coincer dans l’étiquette, créant une irritation, une douleur et une restriction des mouvements, ce qui peut ensuite entraîner un auto-traumatisme. Parfois, les étiquettes métalliques peuvent provoquer une irritation et un gonflement de l’oreille. Cela conduit souvent à des infections du pavillon, et le traitement immédiat doit inclure le retrait de l’étiquette.

Afin de retirer l’étiquette, humidifiez un applicateur à bout de coton avec une solution antiseptique et utilisez-le pour enlever tous les débris autour de l’étiquette. Dans les cas graves d’infection, l’animal peut avoir besoin d’être anesthésié. Ensuite, à l’aide d’une pince coupante, coupez le haut de la boucle de l’étiquette d’un bord à l’autre. Il est important de ne pas couper la surface plane car cela comprimerait l’étiquette, pincerait l’oreille et endommagerait l’oreille. À l’aide d’hémostats, guidez doucement l’étiquette d’oreille à travers et hors de l’oreille. Glissez l’étiquette pour que l’extrémité sertie ne passe pas à travers, ne provoquant pas de traumatisme et d’élargissement du trou de piercing. Une fois l’étiquette partie, essuyez l’oreille avec un bâtonnet applicateur de coton imbibé d’antiseptique et remettez l’animal dans sa cage. S’il y a un écoulement purulent de l’oreille, un traitement de suivi peut être nécessaire et une consultation avec le personnel vétérinaire pour une évaluation est recommandée.

Maintenant que vous savez comment marquer les animaux de laboratoire à l’aide d’étiquettes d’oreille et de poinçons, passons en revue quelques expériences dans lesquelles ces méthodes peuvent être utiles. L’un des principaux avantages de l’utilisation du code de poinçon d’oreille est que les poinçons peuvent servir d’échantillons de tissus pour le génotypage, réduisant ainsi le stress causé aux animaux par les manipulations répétées. Cependant, si vous prévoyez d’utiliser les poinçons pour collecter des échantillons PCR, n’oubliez pas de faire tremper l’appareil dans une solution décontaminante de surface pendant au moins 3 minutes pour éliminer l’ADN ou l’ARN résiduel, puis de rincer à l’alcool avant utilisation.

L’importance de la technique d’identification augmente encore si l’expérience dure plusieurs jours. Par exemple, dans cette expérience, les scientifiques ont d’abord étiqueté les animaux à l’aide d’une étiquette métallique, puis ils ont injecté dans le nerf sciatique une suspension de cellules tumorales transgéniques exprimant la protéine luciférase. Ensuite, afin de quantifier la progression du cancer, ils ont imagé les animaux en utilisant la bioluminescence un, dix et dix-huit jours après l’injection.

Vous venez d’assister à la présentation de JoVE démontrant les deux méthodes d’identification couramment utilisées chez les rongeurs : les étiquettes d’oreille et les poinçons d’oreille. Vous devriez maintenant comprendre le code des poinçons d’oreille, connaître les différents types d’étiquettes d’oreille de rongeurs disponibles dans le commerce et être en mesure d’effectuer ces procédures avec précision sans causer d’inconfort important aux animaux.

N’oubliez pas que chaque technique a ses avantages et ses inconvénients, qui doivent être considérés par rapport à vos besoins expérimentaux. En plus de tenir compte du coût, la facilité de la technique et le niveau de douleur pour les animaux devraient être quelques-uns des principaux facteurs à prendre en compte lors du choix de la méthode d’identification appropriée. Comme toujours, merci d’avoir regardé !