Spectroscopie ultraviolet-visible (UV-Vis)

1. calibrer le spectromètre

1. Allumez le spectromètre UV-Vis et laisser les feux pour se réchauffer pendant une période appropriée de temps (environ 20 min) pour stabiliser.
2. Remplir une cuvette avec le solvant pour l’échantillon et assurez-vous que l’extérieur est propre. Ceci servira comme blanc et aider à tenir compte de légères pertes en raison de la diffusion ou absorption par le solvant.
3. Placez la cuve dans le spectromètre. Veillez à aligner la cuve correctement, car souvent la cuvette a deux parties, qui sont destinés à la manutention (peuvent être rainurés) et ne sont pas censés briller la lumière à travers.
4. Faire une lecture pour l’essai à blanc. L’absorbance devrait être minime, mais toute absorption devrait être déduite sur de futurs échantillons. Certains instruments peuvent stocker les données vides et effectuer la soustraction automatiquement.

2. effectuer un spectre d’Absorbance

1. Remplir la cuvette avec l’échantillon. Pour s’assurer que le transfert est quantitatif, rincer la cuvette deux fois avec l’échantillon et puis remplissez-le sur ¾ plein. Assurez-vous que l’extérieur est propre des empreintes digitales, etc..
2. Placez la cuve dans le spectromètre dans le bon sens.
3. Couvrir la cuve afin d’éviter toute lumière ambiante.
4. Recueillir un spectre d’absorbance en permettant à l’instrument parcourir les différentes longueurs d’onde et recueillir l’absorbance. La gamme de longueur d’onde peut être définie avec des informations sur l’exemple spécifique, mais une gamme de 200 à 800 nm est standard. Un instrument de diodes est en mesure de recueillir un spectre d’absorbance ensemble en une seule frappe.
5. À partir du spectre d’absorbance collectées, déterminer le maximum d’absorbance (λ_max). Répétez la collection des spectres pour obtenir une estimation de l’erreur en λ_max.
6. Pour faire une courbe d’étalonnage, percevoir le spectre UV-Vis d’une variété d’échantillons de concentration différente. Spectromètres sont souvent limitées à une gamme de linéarité et ne sera pas capables de mesurer une valeur d’absorbance supérieure à 1,5. Si les valeurs d’absorbance de l’échantillon sont en dehors de la gamme de linéarité de l’instrument, diluer l’échantillon pour obtenir les valeurs dans la plage linéaire.

3. cinétique des expériences avec la spectroscopie UV-visible

1. UV-visible peut être utilisé pour des expériences de cinétique en examinant la différence d’absorption au fil du temps. Pour une expérience de cinétique, prendre une lecture initiale de l’échantillon.
2. Ajouter rapidement le réactif pour lancer la réaction chimique.
3. Remuez bien pour mélanger avec l’échantillon. Si on ajoute une petite quantité, cela pourrait se faire dans une cuvette. Vous pouvez également mélanger le réactif avec l’échantillon et versez rapidement certains dans une cuvette pour une mesure.
4. Mesurer l’absorbance à la λ_max pour les analytes d’intérêt au fil du temps. Si en utilisant le réactif de mesure étant (c.-à-d. l’absorbance est de monter parce qu’il est moins réactif à absorber), puis la désintégration indiquera l’ordre de la réaction.
5. À l’aide d’une courbe d’étalonnage, faire un terrain de temps de vs concentration d’analyte, convertir la valeur d’absorbance en concentration. A partir de là, ce graphique peut être adapté avec les formules appropriées pour déterminer les constantes de vitesse de réaction.