Prélèvement d'échantillons de sang I

1. rétro-orbitaire saigner

1. Matériel
   1. Préparer une cloche de verre, ou chambre de l’induction anesthésique, d’administrer un gaz anesthésique comme l’isoflurane. Lorsque vous utilisez une cloche de verre, il est impératif que l’anesthésie liquide n’entre pas en contact avec l’animal, pour éviter l’absorption par la peau. Une plate-forme avec de petits trous peut être utilisée.
   2. Microhematocrit tubes contenant de 50 à 75 microlitres sont préférés. Mylar enveloppé de tubes sont moins susceptibles de rompre entre les doigts de l’opérateur et doivent être considérés comme une mesure de sécurité.
   3. Plusieurs épaisseurs de serviette de papier ou d’autres matériaux isolants, est placés sur la surface de travail pour maintenir la chaleur du corps de l’animal au cours de la procédure.
2. Préparation et positionnement de l’animal
   1. L’animal est anesthésié avec une anesthésique, comme l’isoflurane, dans une chambre d’induction anesthésie cloche de verre ou de gaz à effet d’inhalation.
   2. Une fois que l’animal est complètement anesthésié, il est enlevé et placé en décubitus latéral.
   3. Le œil est dépassait en plaçant un doigt sur le dessus de la tête et le long de la mâchoire et en tirant la peau en arrière et vers le bas.
   4. Évitez exerçant une pression sur la trachée, car qui peut s’effondrer ou occlure les voies respiratoires causant la mort par asphyxie.
3. Prélèvement de sang
   1. Le microhematocrit est placé dans le canthus médial de le œil et dirigé en direction caudale à un angle de 30-45° de l’avion du nez.
   2. Appliquer une pression tout en tournant doucement le tube de l’hématocrite. Cela coupera à travers les membranes conjonctivales et rompent le plexus oculaire.
   3. Le sang s’écoule dans le tube de l’hématocrite par capillarité.
   4. Évitez de pousser si profond que vous frappez l’os à l’arrière de la cavité oculaire.
   5. Une fois que le sang commence à couler, maintenir la pression pour garder l’oeil dépassait.
   6. Pour collecter plusieurs tubes de sang, il n’est pas nécessaire de placer le prochain tube dans le plexus oculaire, car le sang continuera à couler et peuvent être collectées comme il vient du canthus médial.
   7. Pour arrêter l’hémorragie, relâcher la peau et laisser l’oeil revenir à la position normale. Appliquer une pression à l’orbite afin d’assurer l’hémostase.

La figure 1. Retrait de sang orbitale rétro chez la souris.

2. procédures de purge queue : snip queue et nick de queue

1. Matériel
   1. Une lame de bistouri stériles, de préférence une lame numéro 11 ou une lame de rasoir simple face, est utilisé pour faire l’amputation initiale pour la méthode de capture de queue. Ciseaux ne doit pas être utilisé parce que la coupe faite par ciseaux est écrasant, ce qui favorise la coagulation et en réduisant la circulation sanguine. Pour la procédure de nick de queue, une lame de bistouri n° 11 ou 15 est utilisée pour faire la coupe.
   2. Un tube de retenue qui permet d’accéder à la queue de la souris est prête.
   3. Serviettes en papier absorbant ou une gaze sont utilisés comme substrat pour l’exécution de la capture de la queue.
   4. Tubes de prélèvement ou de tubes de l’hématocrite sont également requis.
   5. Poudre styptique devrait bénéficier de l’aide dans l’hémostase.
2. Dispositif de retenue pour
   1. L’animal est placé dans le tube, telle que la queue soit accessible. Pour Broome retardateurs de type, l’animal est tiré croupion tout d’abord dans le tube. Pour les autres tubes, l’animal est placé tête première.
   2. Animaux est sécurisés dans le tube, tels qu’ils ne peuvent pas faire demi-tour ou retirer la queue.
   3. Certaines souris permettra la collecte de snip et le sang de queue avec un minimum de retenue manuelle s’ils sont autorisés à saisir une surface rugueuse.
   4. Certains rats nécessitera l’anesthésie par inhalation pour cette méthode de collecte de sang.
3. Prélèvement de sang
   1. La queue est frottée avec l’eau tiède pour enlever les débris et provoquer une légère vasodilatation. N’utilisez pas d’eau chaude.
   2. Pour la capture de la queue, la queue est étendue, et la fin de la queue (0,5 à 1 mm pour souris et jusqu'à 2 mm pour les rats) est coupée avec la lame de bistouri.
   3. Pour le Pseudo de queue, la queue est étendue, et une incision est faite avec la lame de bistouri Swann-Morton environ 2/3 la distance de la croupe, directement au-dessus de la veine caudale latéral.
   4. La queue peut être tracée de rumsteck à la pointe pour favoriser la circulation sanguine ; Cependant, cela va diminuer la qualité de l’échantillon.
   5. Le sang est prélevé de la pointe ou le nick utilisant des tubes à hématocrite ou autorisé au goutte à goutte dans un flacon de collection.

3. collecte de sang cardiaque

1. Matériel
   1. Pour une souris, une seringue de 3 cc avec un calibre 22-25 x 1" aiguille est préféré. Seringues plus petites n’ont pas la même pression arrière et peuvent rendre plus difficile les prélèvement de sang. Aiguilles à moins de 25 gauge restreint la circulation du sang, conduisant à une augmentation de la coagulation et endommagent les cellules sanguines. Aiguilles plus courts que 1" peuvent ne pas atteindre le niveau du cœur lorsque vous approchez du diaphragme.
   2. Pour un rat, une seringue de cc 10-12 avec un calibre 18 x 1.5" aiguille est préférée. Selon la taille du rat, une seringue plus petite ne peut-être pas avoir le volume de sang entier à percevoir, et donc la seringue devra être modifiée au cours de la procédure. Aiguilles à moins de 20 gauge restreignent la circulation du sang, conduisant à une augmentation de la coagulation. Aiguilles plus courtes que 1.5" peuvent ne pas atteindre le niveau du cœur lorsque vous approchez du diaphragme.
   3. Un tube de prélèvement de sang de taille suffisante est utilisé pour tenir le sang recueilli.
2. Dispositif de retenue pour
   1. La restriction appropriée est essentielle à la réussite de cette méthode. L’animal est détenu par la peau du cou avec le corps suspendu verticalement. Il est important que le corps soit directement à empêcher la déviation du cœur ou une torsion de la poitrine.
   2. Une autre position est le décubitus dorsal lorsque vous placez l’aiguille entre les côtes du côté gauche de l’animal. Ceci est particulièrement utile pour les très gros rats ou lorsque plusieurs animaux doivent être saignés.

La figure 2. Prélèvement de sang cardiaque avec souris maintenu verticalement.

3. Prélèvement de sang
   1. L’approche de la face postérieure, la perforation de la membrane est plus facilement réalisable lorsque la souris ou le rat est maintenu verticalement par la peau du cou.
      1. L’aiguille est avancée dans l’encoche située juste à gauche de la pointe de l’animal.
      2. L’aiguille doit être parallèle à la colonne vertébrale et placé juste sous les côtes.
      3. Le cœur est situé approximativement au niveau du coude.
      4. Placer l’aiguille, biseau vers le haut, dans la poitrine et percer le cœur.
      5. Appliquez une légère pression arrière avec la seringue. Si l’aiguille est dans le cœur, le sang coulera dans la seringue.
      6. Attendez que le sang a rempli la seringue avant d’ajouter la contre-pression supplémentaire sur la seringue.
   2. L’approche latérale du côté gauche de l’animal nécessite l’animal de positionnement en décubitus dorsal.
      1. Le point d’entrée est mesuré sur la pointe du coude sur la paroi thoracique. Le cœur est situé approximativement au niveau du coude.
      2. L’aiguille est insérée perpendiculaire au plan de la table à un point situé à mi-chemin sur la paroi thoracique mesurée dorsoventralement.
      3. Placer l’aiguille, biseau vers le haut, dans la poitrine et percer le cœur.
      4. Appliquez une légère pression arrière avec la seringue. Si l’aiguille est dans le cœur, le sang coulera dans la seringue.
      5. Attendez que le sang a rempli la seringue avant d’ajouter la contre-pression supplémentaire sur la seringue.

La figure 3. Prélèvement de sang cardiaque avec la souris en position de décubitus dorsal.

4. Conseils techniques
   1. Le coeur normal se trouve avec l’apex pointant vers la gauche. Dans de rares cas, le cœur peut être inversé, résultant en difficulté en perforant le coeur.
   2. Contre-pression excessive sur la seringue peut-être s’effondrer au cœur, obstruant le biseau de l’aiguille et l’arrêt de la circulation sanguine dans la seringue.
   3. Appliquant la contre-pression et relâchez-le à plusieurs reprises amorcera la coagulation dans la seringue.
   4. Doucement exerçant une pression sur le foie peut forcer le volume de sang supplémentaire dans le système circulatoire, ce qui en fait disponible pour le retrait.

4. prélèvement de sang postérieure de la veine cave supérieure

4. Matériel
   1. Une seringue de TB avec une aiguille de calibre 25-29 est utilisée pour la collecte de sang chez la souris. Pour les rats, il faut une seringue cc de 10-12 avec un calibre 22-25 x 1" aiguille.
   2. Une plate-forme chirurgicale, plateau de dissection ou toute autre surface pour garantir l’animal est nécessaire, ainsi que des liens, une bande ou épingles pour fixer les branches en position.
   3. Injectable anesthésie ou anesthésie par inhalation n’est nécessaire. Si vous utilisez l’anesthésie par inhalation, il est souhaitable que l’anesthésique livrés via un vaporisateur de précision avec un cône de nez. La longueur de la procédure est telle qu’à l’aide d’une chambre à induction sans livraison supplémentaire gaz anesthésique ne fournira pas suffisamment de temps pour achever le retrait de sang avant que l’animal fait revivre.
   4. Ciseaux d’iris pour la souris, ou ciseaux pointue-arrondie de salle d’opération pour le rat, est tenus, au long avec pince pouce petit atraumatique et un 2 "x 2 » de gaze.
5. Dispositif de retenue pour
   1. Lorsque l’animal est complètement anesthésié, tel que déterminé par le pincement de l’orteil ou le pincement de la queue, l’animal est placé en décubitus dorsal.
   2. Les branches sont fixés à la plate-forme avec du sparadrap ou des épingles. Les membres devraient être étendues loin du corps.
6. Retrait
   1. La peau se soulève et une petite coupe transversale est faite à travers la peau juste au-dessus du bassin chez les femelles, ou juste au dessus du prépuce chez les hommes.
   2. Le point des ciseaux est placé dans la coupe, et une incision médiane est faite à travers la peau du prépuce/bassin de la xiphoïde.
   3. La peau est reflétée latéralement de chaque côté. Par dissection par clivage peut être nécessaire de desserrer le muscle sous-jacent.
   4. Le muscle est levé, et une petite coupe transversale est faite à travers le muscle juste au-dessus de la coupe de la peau.
   5. Le point des ciseaux est placé dans l’abdomen et une incision médiane est faite à travers le muscle à la xiphoïde. N’oubliez pas de point le scissors' vers le haut pour éviter de couper les organes d’angle.
   6. Couper transversalement le long de la courbe des côtes de chaque côté. Faire preuve de prudence supplémentaire ne pas à percer le foie.
   7. Déplacez doucement les intestins à gauche de l’animal afin d’exposer la veine cave postérieure.
   8. Placez une compresse sur le foie et l’index et le médius de repos sur le foie.
   9. Avec l’autre main, introduire l’aiguille, biseau vers le haut, dans la veine cave supérieure, à mi-chemin entre la jonction des vaisseaux rénaux et de la bifurcation iliaque.
   10. Retirer lentement le sang tout en exerçant une pression sur le foie.

La figure 4. Prélèvement de sang de la veine cave postérieure.