5.14: Autopsie et prélèvement des tissus

1. examen extérieur

un brut examen externe du corps, qui comprend une inspection visuelle de l’organe de lésions et de masses, doit être exécuté dans l’étape initiale à une autopsie. Le pelage doit être examiné pour les zones de perte de cheveux. Les dents et les ongles sont évalués pour une croissance excessive ou d’usure. Convient de noter une coloration de la fourrure dans le bouche, les narines, les yeux, anal et ouvertures génitales. Tests de bande, grattage de la peau et fourrure examens devraient être effectuées pour détecter les parasites externes (voir procédure ci-dessous).

1. Essai au ruban adhésif
   1. équipement requis pour un test de bande comprend les gants, une bande de ruban de cellophane clair, une lame de microscope de verre et ciseaux.
   2. Sont toujours porter des gants lors de manipulation de la bande, comme la colle soulèvera les huiles et les doigts, les cellules de la peau obscurcissant les conclusions ou créer une confusion lors de l’évaluation de la diapositive.
   3. Couper un morceau de ruban qui est légèrement plus étroite que la largeur et plus courte que la longueur de la lame de microscope.
   4. Enfoncez doucement le côté collant de la bande à l’anus et la région environnante et de supprimer rapidement les it.
   5. À l’aide de l’extrémité opposée de la cassette, appuyez dessus entre les omoplates et supprimer rapidement les it.
   6. Appliquer le ruban sur la lame de microscope.
   7. Le test de la bande est prêt pour l’examen microscopique. Œufs de parasites sont visibles à un grossissement de 4 X mais devraient ensuite être examinées à un grossissement de 10 X pour identifier correctement l’espèce.
   8. Il est important de ne pas toucher le côté adhésif du ruban. La bande va soulever les débris des mains gantées et rendre la lecture de la diapositive difficile.
2. Raclage de la peau
   1. l’essai de raclage de la peau est effectué sur des zones d’alopécie, lésions cutanées ou excoriation.
   2. L’équipement requis pour le raclage de la peau est une lame de microscope de verre propre, huile minérale et d’une lame de métal spatule ou scalpel.
   3. Verser quelques gouttes d’huile minérale sur la lame de microscope.
   4. Pincer la peau dans un pli sur le bord de la lésion ou domaine d’intérêt.
   5. Placer une petite quantité d’huile minérale sur la peau.
   6. Placer le bord de la lame de la spatule ou le scalpel sur la peau et frottent contre la direction de la croissance des cheveux.
   7. Continuer à gratter jusqu'à ce qu’un peu de rougeur est visible sur la peau.
   8. Placer les cheveux et le tissu gratté de la surface de la peau dans l’huile sur la lame de microscope. Le cas échéant, diffuser le matériel afin qu’il soit distribué uniformément dans l’huile.
   9. La diapositive est maintenant prête à être examiné au microscope. Si vous le souhaitez, un lamelle couvre-objet peut être appliqué à la goutte d’huile sur la lame. Examiner la lame à 4 X et un grossissement de 10 X.
3. Examen pelt
   1. l’examen de la peau est le dernier examen externe effectué ; cependant, il est fait après l’examen interne est terminé.
   2. L’animal est placé dans un verre ou de plastique Pétri après que tous les échantillons d’organes internes ont été collectés.
   3. Le plat est placé dans un réfrigérateur pendant 15 minutes.
   4. Après 15 minutes, le plat est placé sous un microscope à dissection et la peau est examinée pour les parasites externes. La plupart des acariens fourrure se déplacera vers les extrémités des poils et on observe facilement.

2. Examen brut intérieur de la cavité abdominale

1. exciser la peau
   1. une petite incision est faite juste en avant du bassin chez les femelles et surtout le prépuce chez les hommes.
   2. La coupe de la peau s’étend à la Chin.
   3. Par dissection par clivage est utilisé pour détacher la peau de l’aponévrose et le muscle.
   4. Coupes transversales sont faites avant les membres postérieurs et postérieur aux membres avant. Il faut ne pas de rompre les vaisseaux sanguins dans la région axillaire.
   5. Utilisation dissection par clivage pour exposer la zone cervicale et thoracique. Redoublez de prudence devrait être exercé pour eviter une rupture de la jugulaire et carotide vaisseaux du cou.
2. Glandes mammaires
   1. chez les femelles, examiner le tissu mammaire à chercher des masses, décoloration ou anomalies.
   2. Les femelles allaitantes ou enceintes passera volume de tissu mammaire, et lait peut-être être présent.
   3. Tissu mammaire se trouve de la partie supérieure du sternum à la manubrium à l’ouverture génitale sur la face ventrale et s’étend latéralement sur les deux côtés presque toucher sur la surface dorsale sur les hanches et les épaules.
   4. L’excision des glandes mammaires nécessite agrippant le bord de la glande avec une pince pouce et par dissection pour desserrer des pièces jointes à la peau. Une fois que la glande a été séparée de la peau, ciseaux iris peut être utilisé pour couper toutes les pièces jointes restantes avant de mettre le gland dans une solution de fixation.
3. Glandes sous-cutanées
   1. glandes préputiales sont jumelés et situés juste en avant du prépuce chez le rat mâle. Elles apparaissent en grands et sont d’un gris de couleur jaunâtre avec un aspect spumeux.
   Glandes salivaires
   2. Submandibular sont jumelés, situé à la mandibule et s’étendent le long de l’encolure au sternum manubrium. Ils ont un revêtement dur et sont fermement adhérés aux muscles.
   3. Retrait de ces glandes nécessite une dissection émoussée et Redoublez de prudence lorsque vous travaillez dans la région cervicale pour éviter une rupture des vaisseaux sanguins. Par dissection par clivage est une technique de dissection anatomique dans les tissus sont séparés et les structures sous-jacentes exposés sans couper.
   4. Pour une dissection émoussée, les ciseaux sont utilisés pour répandre les tissus apart, plutôt que de les couper dehors. Les embouts fermés sont poussés dans les tissus et ensuite ouvert pour fractionner le tissu le long des plans naturels. Ce processus nécessite patience et une touche délicate, comme l’étirement du tissu peut causer des dommages aux organes adjacents et les vaisseaux sanguins.
   5. Les glandes, une fois libérés des muscles sous-jacents, sont levées et les pièces jointes résiduels sont rompus.
   6. Les glandes exigent au moins une coupe pour permettre la pénétration de la fixateur.
   7. Graisse sous-cutanée est évaluée pour la quantité et de dépôts. Un animal obèse peut avoir une grande quantité de graisse avec la peau épaissie. Les animaux qui sont déshydratés aura réduit l’élasticité de la peau, et il se sentira plus mince.
4. Muscle
   1. observer les muscles abdominaux, intercostaux et exposés du cou et des membres. Notez tout épaississement anormal, masses ou décoloration.
   2. Si le muscle est nécessaire pour l’analyse, sélectionner et couper l’échantillon avant de prendre les organes abdominaux pour réduire la contamination sanguine.
5. Ouverture de la cavité du corps
   1. une petite coupe transversale en fait la plus caudale point du muscle abdominal exposé.
   2. Lifting du muscle loin des organes, découper le long de la linea alba à la xiphoïde.
   3. Couper les muscles abdominaux de la ligne médiane latéralement, juste au-dessus des membres postérieurs sur les deux côtés.
   4. Couper le muscle abdominal le long de la courbe des côtes des deux côtés.
6. Graisse abdominale
   1. évaluer la quantité et l’accumulation de graisse corporelle. Un animal sain aura coussinets adipeux abdominales et certaines matières grasses le long de la surface dorsale de la cavité abdominale. Un animal trop mince, ou un très jeune animal, n’aura pas une quantité appréciable de graisse qui entoure les reins.
   2. Observer la couleur de la graisse corporelle et noter toutes les anomalies.

3. Organes abdominaux

1. foie
   1. normalement, la couleur du foie doit être un rouge foncé. Les marges doivent être lisse et ont un bord croquant. Un foie anormaux auront une bordure épaisse et peut avoir des encoches ou bords festonnés.
   2. Il faut lors de manipulation du foie, telle qu’elle est un tissu mou. Toute perturbation de l’intégrité de l’orgue se traduira dans le sang une fuite dans la cavité du corps et de masquer les organes.
   3. Doucement reflètent le foie loin du diaphragme et faire une coupe à travers les vaisseaux sanguins antérieur du foie.
   4. Reflètent le foie vers le diaphragme et saisir le nœud fibreux qui relie tous les lobes du foie au centre. Soulevez le foie tout en coupant toutes les pièces jointes à l’intestin et l’estomac.
   5. Enlever le foie en une seule pièce et tache de sang excédentaire de la surface de l’organe. Il peut être placé dans un bain de solution saline, ou rincé dans une solution saline stérile, avant le découpage en sections plus minces pour permettre la pénétration des solutions fixateur.
2. Vésicule biliaire
   1. la vésicule biliaire est un petit sac transparent qui apparaît souvent en jaune due à l’accumulation de bile. Il est présent chez la souris, mais pas chez les rats.
   2. De la vésicule biliaire est située entre les lobes plus haut de la page du foie le long de la ligne médiane. Il est généralement relié à la membrane par un frein mince qui peut accidentellement être déchiré, causant de la vésicule biliaire à se rompre.
   3. La vésicule biliaire peut être enlevée avec le foie et séparée par la suite à l’examen.
3. Rate
   1. la rate est rouge foncé et situé le long de la courbure inférieure de l’estomac. Il doit être régulier dans la forme, avec une surface légèrement mate.
   2. Il est généralement plus grande chez les mâles que les femelles. Animaux avec les parasitoses internes, les infections bactériennes ou maladies du sang peut-être ont agrandi spleens.
   3. Comme les filtres rate endommagé des globules rouges de la circulation, il est rempli de sang. Lors du retrait de la rate, éviter toute perforation à l’orgue.
   4. Pour l’enlever, la rate est levée et les pièces jointes couper entre l’estomac et la rate.
4. Tractus intestinal
   1. post mortem évolue rapidement et comprennent l’accumulation de sang dans les tissus, ce qui entraîne l’apparition d’ecchymoses et le gonflement des intestins avec gaz, souvent produites par la prolifération bactérienne. Le tractus intestinal est soigneusement inspecté après il a été éliminé de l’organisme.
5. Estomac
   1. l’estomac se trouve à l’extrémité distale de le œsophage. Il semble être deux tons, différencier les parties musculaires et glandulaires.
   2. L’estomac doit être évaluée pour la présence de nourriture par la convivialité. Les rongeurs mangent généralement constamment en raison d’un métabolisme élevé. Un estomac vide est à noter qu’il peut être révélateur de la maladie.
   3. Ne pas couper l’estomac, comme le contenu finira par contaminer les organes de la cavité abdominale.
   4. Pour retirer le tractus intestinal, le œsophage de l’estomac est sectionné juste en avant de l’estomac. Si l’estomac doit être placé dans un conteneur commun de fixateur, un morceau de suture peut être attaché autour de le œsophage pour éviter toute fuite du contenu de l’estomac avant découpe.
6. Intestin grêle
   1. l’intestin grêle est composé de trois parties : le duodénum, le jéjunum et l’iléon. Il ne contiendra pas de boulettes fécales.
   2. Le duodénum est une section plus courte du sphincter de l’estomac postérieure au début du jéjunum. Le canal cholédoque pénètre dans l’intestin grêle dans le duodénum et le tissu pancréatique est plus fermement attaché à cette partie de l’intestin grêle.
   3. Le jéjunum est la partie centrale de l’intestin grêle.
   4. Peyer ' s Patches-composée de tissu lymphoïde dans petit ovale patches-sont présents sur la surface nonmesenteric du jéjunum et iléon chez le rat. ³ Ceux-ci font partie du système immunitaire et peut être utiles dans le diagnostic des troubles du système immunitaire.
   5. L’iléon est la partie distale de l’intestin grêle et est la plus longue partie, se terminant à caecum.
7. Caecum
   1. du caecum est une couleur verdâtre et très doux.
   2. Il est situé à la jonction du petit et du gros intestin.
   3. Fermentation se produit dans le caecum, donc la ponction de l’orgue se traduira par une odeur nauséabonde et la contamination des organes par des bactéries.
8. Gros intestin
   1. le gros intestin commence au caecum et se poursuit à l’anus. Il est facilement identifiable, comme les boulettes fécales peuvent être visualisées dans la lumière de l’intestin.
   2. Il ne faut pas des zones d’hémorragie ou de décoloration immédiatement après euthanasie.
9. Mésentère
   1. les petits et les grands intestins sont ancrés au corps par le mésentère, une membrane contenant les vaisseaux sanguins, matières grasses et les ganglions lymphatiques.
   2. Il convient de rechercher des ganglions lymphatiques et les masses avant d’ôter le tractus intestinal.
10. Pancréas
    1. le pancréas est un organe diffus situé au-dessous de l’estomac et entre les premiers plis du duodénum. C’est un bronzage lumineux de couleur grise et composé de plusieurs petits lobes avec des bords irréguliers.
    2. Il n’est pas possible d’enlever le pancréas en un seul morceau.
    3. Si le tissu pancréatique doit être récolté, il doit être effectuée avant l’enlèvement du tractus intestinal.
    4. Tissu identifié comme pancréatique doit être soigneusement taquiné loin le tissu mésentérique entourant it.
11. Enlever le tractus intestinal
    1. tractus intestinal est supprimé comme une seule pièce, commençant par l’estomac et s’étendant jusqu'à l’anus.
    2. Une coupe faite dans le gros intestin, juste en avant de l’anus. Le tractus intestinal entière peut être attaches de levé et tout membraneuses rompus. Le tractus intestinal peut alors être retiré le mésentère coupé en sections et fixe.
    3. Lorsque vous placez les sections de l’intestin dans les pots contenant les autres organes, il est impératif que les extrémités soit lié pour prévenir la contamination des tissus avec des bactéries intestinales.
    Tract
    4. la lumière de l’intestin peut être exposé en réduisant sa longueur à l’aide de ciseaux petit et pointu. L’intérieur peut être rincé après avoir exposé le lumen.
    5. Certaines études mAY exigent qu’une partie de l’intestin être enlevée et vidée plutôt que couper. En obtenant une aiguille émoussée à une extrémité du tissu excisé, une solution saline ou fixateur peut être forcée dans l’intestin pour vider le contenu.
12. Rein
    1. les reins sont des organes pairs situés contre les muscles du dos. Le rein droit est plus élevé que la gauche. Les reins chez les animaux plus âgés peuvent être entourés par des dépôts de graisse, ce qui les rend difficiles à visualiser.
    2. C’est environ la taille et la couleur d’un haricot noir ainsi que sa surface doit être lisse.
    3. Immédiatement antérieur du rein est la glande surrénale, apparaissant comme un nodule de petit, rose clair.
    4. Pour enlever le rein, l’isoler à l’aide d’une pince et couper entre le rein et l’uretère.
    5. Les reins ont une capsule externe difficile qui peut être décollée de mieux visualiser les surfaces. Couper un rein en deux le long de l’axe le plus long et l’autre rein transversalement. Remarque tout grit dans le rein pourrait indiquer la présence de cristaux ou de dépôts minéraux.
13. Système reproducteur femelle
    1. l’utérus est une structure en forme de Y. Le corps de l’utérus est court avec des cornes appariés à gauche et à droite. Les cornes se terminent aux trompes de Fallope et les ovaires. Chez une patiente non gravides, les cornes seront rose pâle et mince. Chez un animal enceinte, les cornes apparaîtront plus sombres et sont prononcées les vaisseaux sanguins en cours d’exécution adjacentes aux cornes utérines. À mesure que progresse de gestation, les cornes utérines aura un " collier de perles " apparence. Les embryons en développement créera une zone pâle dans la corne et qu’ils développent, l’utérus s’étire et le tissu va devenir plus mince, permettant la visualisation.
    2. Les ovaires sera situé juste en dessous des reins. Ils auront une surface rugueuse due à des stades différents de la maturation des follicules. Ovaires kystiques aura des vésicules remplies de liquide. Ce liquide peut varier de paille coloré aux sanguineous.
    3. Pour enlever les ovaires, coupés les pièces jointes artériels vers l’avant et la trompe de Fallope vers l’arrière. Si vous le souhaitez, les ovaires peuvent être souscrite attachés à l’utérus.
    4. D’enlever l’utérus, il doit être saisi délicatement et traction appliquée pour pouvoir couper au-dessous du col de l’utérus. Après la coupe, soulever le corps et les cornes de l’utérus, brisant toutes les pièces jointes dans la cavité coelomique.
14. Système reproducteur masculin
    1. les vésicules séminales sont blanches, ram ' s en forme de corne, jumelé à des structures situées vers l’avant de la vessie et fixée sur la ligne médiane à la glande prostatique. La taille varie, mais ils peuvent être aussi grands que le caecum.
    2. La glande prostatique est située autour de la vessie à la base. Ce tissu est généralement un bronzage léger. Chez les animaux plus âgés, il peut présenter une hyperplasie. Les animaux plus âgés en général ont plus graisse corporelle qui peut compliquer la visualisation de la prostate.
    3. Testicules sont jumelés et situés dans le sac scrotal. La surface doit être lisse et fine vascularisation évidente sur la surface. Souris et les rats n’ont pas un anneau inguinal ou le sphincter, ce qui permet à l’animal de retirer les testicules dans la cavité abdominale. Pour visualiser ces, saisir les coussinets adipeux abdominales situés dans le bas ventre et les tirer vers l’avant. Cela va tirer les testicules du scrotum pour permettre l’examen. L’épididyme est le long de la marge inférieure du testicule et s’effile vers le haut. Le canal déférent est fixé à l’extrémité de l’épididyme et nous ramène à la prostate.
    4. Enlèvement des testicules peut être accompli en coupant l’attachement au scrotum et en sectionnant le canal déférent.
    5. Suppression de la prostate et les vésicules séminales nécessite un saisissant la base de la vessie et de levage, tout en coupant les pièces jointes sous la prostate.

4. Cavité thoracique

1. 1. les poumons sont normalement une couleur rose vif et spongieux de texture avec une surface lisse. Cependant, l’euthanasie en CO ₂ peut causer des hémorragies pulmonaires, résultant en des taches rouges foncés qui peuvent couvrir la surface du poumon entier.
2. Heart
   1. coeur est rouge foncé avec quatre chambres. Les ventricules sont musclés et fermes au toucher. Les oreillettes sont de couleur rouge plus foncée et s’asseoir au sommet des ventricules. Ils sont beaucoup moins musclés et apparaissent flasques.
   2. Le péricarde est une membrane mince et translucide qui entoure le cœur.
3. Thymus
   1. le thymus est situé vers l’avant pour le coeur et s’assoit sur la trachée. Il doit être lisse en texture.
   2. Chez les jeunes animaux, il semble que tan avec une texture grasse.
   3. Les animaux plus âgés auront l’infiltration du tissu adipeux dans le thymus, agrandissant et en donnant le thymus une couleur blanche.
4. Trachée
   1. la trachée s’étend de l’épiglotte à la bifurcation des bronches. C’est un tube cartilagineux côtelée souple.
   2. , Il devrait être clair et pas n’importe quel liquide fluide ou spumeux dans la lumière. Euthanasie en CO ₂ peut causer des fluides (serosanguinous et/ou moussants) accumulation dans les poumons et la trachée en raison de l’hémorragie.
5. Oesophage
   1. le œsophage s’étend de la cavité buccale à l’estomac. C’est un tube très mince qui se trouve directement derrière la trachée et le cœur, puis passe à travers le diaphragme à l’estomac.
   2. Le œsophage est difficile à enlever, car il se déchire facilement même si le tissu est extensible. Suppression de le œsophage se faite plus facilement en disséquant il loin de la trachée après l’ablation du cœur et des poumons.
6. Enlever les organes thoraciques
   1. le coeur et les poumons sont plus faciles à enlever ensemble.
   2. Placer la pince perpendiculairement à la trachée et saisir la trachée fermement, juste au-dessus du thymus.
   3. à l’aide des ciseaux, faire une coupe perpendiculaire à la trachée juste en avant de la pince. Cette réduction devrait rompre la trachée et le œsophage.
   4. Sans desserrer l’emprise sur la trachée, soulevez la trachée direction caudale, et découper toutes les pièces jointes des poumons à la surface de la colonne vertébrale dans la cage thoracique.
   5. Le œsophage peut doivent être coupés pour être capable de soulever le cœur et poumons gratuitement la cavité thoracique.
   6. Après que le cœur est éliminé de l’organisme, il peut rincer avec du sérum physiologique pour enlever les résidus de sang et de caillots, ou il peut être rempli avec le fixateur par l’intermédiaire de l’aorte.
   7. Une fois les poumons est excisés, ils sont gonflés avec fixateur. Une ligature est placée lâchement autour de la trachée. Une aiguille reliée à une seringue contenant le fixateur de choix est enfilée dans la lumière de la trachée. La ligature est resserrée autour de l’aiguille, et le fixateur est injecté jusqu'à ce que les poumons sont gonflés. Lors du retrait de l’aiguille, la ligature est serrée pour éviter les fuites.
7. Cavité buccale
   1. langue
      1. la langue des rongeurs est lisse.
      2. Examiner la surface des lésions, y compris le dessous.
      3. La langue est rarement récoltée à l’exception des enquêtes spécialisées telles que les études de cancer de la bouche.
      4. Pour supprimer la langue, couper à travers les surfaces buccales de chaque côté de la cavité buccale à l’articulation mandibulaire-temporelle.
      5. Disloquer la mâchoire inférieure et reflètent le maxillaire pour révéler l’épiglotte et la base de la langue.
      6. Avec des pinces afin d’étendre la langue, couper les fixations sous direction caudale à la base de la langue.
      7. Entretien traction, couper horizontalement à la base de la langue à fREE de la cavité buccale.
   2. Dents
      1. denture Rat se compose de trois molaires et une incisive dans chaque quadrant qui est séparée par un diastème édenté. Ils sont couverts par émail que sur la face labiale ; sur la surface intérieure de la dent est dentine.
      2. Rat dents sont normalement de couleur jaune/orange. Cette couleur est le plus prononcée sur l’émail incisive et est due à la présence d’un pigment contenant du fer. La couleur commence à environ 21 jours après la naissance et s’aggrave avec l’âge.
      3. Examiner les dents pour la prolifération ou malocclusion.

5. Tête

1. 1. les yeux devraient être égaux en taille et claire d’exsudat. La conjonctive doit être lisse.
   2. Pour enlever les yeux, faire pression sur la peau qui entoure le œil vers l’arrière et vers le bas pour dépasser le œil de l’orbite. À l’aide d’une pince embout incurvé, isoler le globe et couper les pièces jointes tenant dans la douille.
2. Oreilles
   1. observer les oreilles pour l’identification. Demande de certains enquêteurs étiquettes aux oreilles soient incluses dans les échantillons d’organes pour confirmation d’identité animale.
   2. Les conduits auditifs sont examinés des lésions, des masses, ou exsudat.
3. Nez
   1. on observe le nez liquide ou exsudat.
   2. Les narines doivent être claire et symétriques.

La nécropsie, c’est-à-dire l’examen post-mortem des organes, et le prélèvement de tissus font partie intégrante de nombreuses expériences de laboratoire, qui reposent sur les points de collecte de données finaux recueillis à partir des analyses des organes prélevés. Par conséquent, il est important d’apprendre la bonne technique de nécropsie diagnostique et de prélèvement de tissus, car la procédure peut avoir un impact significatif sur la qualité des échantillons collectés. Cette présentation passera en revue la méthode de dissection et d’extraction des organes abdominaux, reproducteurs et thoraciques d’animaux de laboratoire.

Avant de commencer la procédure, il faut remplir un formulaire qui comprend les antécédents complets de l’animal : numéro d’identification de l’animal, sexe, conditions de logement, date de naissance, date de décès, numéro d’étude/de protocole et le nom du chercheur principal.

Ensuite, préparez la zone de dissection. Déposer un revêtement de paillasse, un plateau de dissection, des instruments désignés pour la nécropsie, y compris des ciseaux, des pinces, une lame de scalpel stérile, des coupe-os, une sonde émoussée, une petite spatule et un matériau de suture non résorbable. Le prélèvement d’organes et de tissus pour l’examen histologique nécessite que les tissus soient conservés dans une solution fixatrice. Sauf indication contraire, le fixateur le plus couramment utilisé est le formol tamponné à 10 % neutre. Notez que les échantillons de tissu doivent avoir une épaisseur de 0,5 à 1 cm pour permettre une pénétration suffisante de la solution fixatrice. La fixation empêche la carie, l’autolyse et la putréfaction ; arrête toute réaction biochimique en cours ; et peut augmenter la résistance mécanique et la stabilité des tissus traités.

La méthode d’euthanasie de l’animal peut également impacter la qualité des échantillons. La méthode d’euthanasie la plus couramment utilisée pour les souris et les rats est une surdose de dioxyde de carbone. Les animaux sont laissés dans leur cage d’origine, qui est placée, dans une chambre, et le CO2 est progressivement introduit dans la chambre à un taux de déplacement de 10 à 30 % du volume de la chambre/min. Cela fait perdre conscience aux animaux avant la perception de la douleur associée à l’activation des nocicepteurs par l’acide carbonique. Le flux est ensuite maintenu dans la chambre jusqu’à ce qu’un arrêt respiratoire se soit produit et que l’animal soit mort.

Après l’euthanasie, effectuez d’abord un examen externe initial en inspectant visuellement la carcasse pour détecter des lésions et des masses, une croissance excessive des dents ou toute coloration de la fourrure de la bouche, des narines, des oreilles, des yeux et des ouvertures anales et génitales. Si nécessaire, effectuez un test de bande, un grattage de la peau et des examens de peau pour détecter les parasites externes. Une fois l’examen externe terminé, il est temps de commencer la nécropsie, en commençant par la cavité abdominale. Notez qu’avant de prélever tout échantillon de tissu, il est important d’observer l’organe in situ.

Pour commencer à exciser la peau, placez une petite incision juste en avant du bassin chez les femelles et au-dessus du prépuce chez les mâles. Ensuite, à l’aide de la technique de dissection émoussée, détachez la peau du fascia et du muscle. La dissection émoussée est une technique de dissection anatomique dans laquelle les tissus sont séparés et les structures sous-jacentes exposées sans coupure. Dans cette technique, les ciseaux sont utilisés pour écarter les tissus plutôt que pour les couper. Les pointes fermées sont poussées dans le tissu, puis ouvertes pour diviser le tissu le long des plans naturels. Ce processus nécessite de la patience et un toucher délicat, car l’étirement des tissus peut entraîner des dommages aux organes et aux vaisseaux sanguins adjacents. Étendez ensuite la coupe jusqu’au menton. Ensuite, faites des coupes transversales à l’avant des membres postérieurs et à l’arrière des membres antérieurs, et utilisez une dissection émoussée pour exposer la région cervicale et la poitrine. Des précautions supplémentaires doivent être prises pour éviter de rompre les vaisseaux jugulaires et carotides du cou.

Chez les femelles, avec la peau excisée, observez le tissu mammaire du haut du sternum au niveau du manubrium jusqu’à l’ouverture génitale sur la surface ventrale ; s’étendant latéralement des deux côtés. Les femelles allaitantes ou gestantes auront un volume de tissu mammaire accru et du lait peut être présent. Pour exciser les glandes mammaires, saisissez le bord du tissu avec une pince et utilisez une dissection émoussée pour desserrer les attaches à la peau. Une fois la glande séparée, elle peut être placée dans une solution fixatrice pour une analyse histologique ultérieure.

À ce stade, vous pouvez observer des glandes salivaires sous-mandibulaires, qui sont appariées et situées à la mandibule - s’étendant le long du cou jusqu’au sternum manubrium. L’ablation de ces glandes nécessite une dissection contondante et des précautions supplémentaires lors du travail dans la région cervicale pour éviter la rupture des vaisseaux sanguins. Une fois libéré des muscles sous-jacents, soulevez les glandes et coupez toutes les attaches résiduelles. Les glandes nécessitent au moins une incision pour permettre la pénétration du fixateur.

De plus, vous pouvez voir la trachée, qui s’étend de l’épiglotte à la bifurcation des bronches. Il s’agit d’un tube cartilagineux strié et flexible. Bien qu’elle soit normalement claire, l’euthanasie au CO2 peut provoquer une accumulation de liquide dans les poumons et la trachée qui ressemble à un liquide clair et mousseux. De la graisse sous-cutanée sera également présente dans cette zone. Évaluez-le pour la quantité et le dépôt. Un animal obèse peut avoir une grande quantité de graisse avec une sensation d’épaississement de la peau.

Avant d’ouvrir la cavité corporelle, observez les muscles abdominaux, intercostaux et exposés du cou, ainsi que les membres pour détecter tout épaississement, masse ou décoloration. Pour ouvrir la cavité corporelle, faites d’abord une petite incision transversale au point le plus caudal du muscle abdominal exposé. Ensuite, soulevez le muscle loin des organes et coupez le long de la linea alba jusqu’au xiphoïde. Ensuite, disséquez les muscles latéralement de la ligne médiane jusqu’à juste au-dessus des membres postérieurs des deux côtés. Enfin, coupez le long de la courbe des côtes des deux côtés. Une fois la cavité corporelle ouverte, évaluez la quantité et l’accumulation de graisse abdominale. Un animal en bonne santé aura des coussinets adipeux abdominaux et un peu de graisse le long de la surface dorsale dans la cavité. Observez la couleur de ce tissu et notez toute anomalie.

Nous sommes maintenant prêts à commencer le prélèvement des organes abdominaux. Commencez par localiser la rate, qui est rouge foncé et située le long de la courbure inférieure de l’estomac. Il doit être de forme régulière et avec une surface légèrement mate. Pour enlever la rate, soulevez l’organe et coupez les attaches à l’estomac.

L’estomac est situé à l’extrémité distale de l’œsophage. Il semble être bicolore, différenciant les parties musculaires et glandulaires. Ressentez-le pour la présence de nourriture. Un estomac vide doit être noté, car il peut être indicatif d’une maladie. Ne coupez pas l’estomac, car le contenu contaminera les organes de la cavité abdominale.

L’intestin grêle est relié distalement et inférieur à l’estomac. Il y a trois sections distinctes de l’intestin grêle. Le premier est le duodénum - une section plus courte du sphincter postérieur de l’estomac au début du jéjunum. Le canal biliaire y pénètre et le tissu pancréatique est plus fermement attaché à cette partie de l’intestin grêle. Le jéjunum est la partie centrale. Les plaques de Peyer, qui sont de petites zones ovales composées de tissu lymphoïde, peuvent être observées à la surface du jéjunum et de l’iléon. L’iléon est la partie la plus longue de l’intestin grêle qui se termine au cæcum - situé à la jonction de l’intestin grêle et du gros intestin. Le caecum est de couleur verdâtre et très doux.

Le gros intestin se poursuit du caecum à l’anus. Il est facilement identifiable car les boulettes fécales peuvent être visualisées dans la lumière de cette structure. L’intestin grêle et le gros intestin sont ancrés au corps par le mésentère, une membrane contenant des vaisseaux sanguins, de la graisse et des ganglions lymphatiques. Cela devrait être examiné pour les ganglions lymphatiques hypertrophiés et toute masse avant l’ablation du tractus intestinal. Le pancréas est un organe diffus situé à l’arrière de l’estomac. Il s’agit d’une couleur beige clair à grise et composée de plusieurs petits lobes aux bords irréguliers. Pour prélever le pancréas, saisissez l’organe et détachez-le doucement du tissu mésentérique environnant. Cela doit être fait avant l’ablation du tractus intestinal.

Pour retirer tout le tractus en un seul morceau, en commençant par l’estomac et en s’étendant jusqu’à l’anus, placez d’abord une ligature au niveau du rectum, puis faites une incision à travers le gros intestin juste en avant de l’anus. Ensuite, placez une ligature à la jonction de l’œsophage et de l’estomac, après quoi tout le tractus intestinal peut être soulevé et toutes les attaches membraneuses sectionnées. Le tout peut ensuite être séparé du mésentère, coupé en tronçons et fixé.

Les reins sont des organes appariés situés contre les muscles du dos. Ils doivent avoir la taille et la couleur d’un haricot rouge foncé et avoir une surface lisse. Immédiatement en avant du rein se trouve la glande surrénale qui se présente sous la forme d’un petit nodule rose clair.

Pour retirer un rein, isolez-le à l’aide d’une pince et coupez-le entre l’organe et l’uretère. La couche extérieure dure peut ensuite être décollée pour examiner la surface. Coupez un rein en deux le long de l’axe long et l’autre transversalement. Tout grain à l’intérieur peut indiquer la présence de cristaux ou de dépôts minéraux. Enfin, retirez le foie, qui est de couleur rouge foncé et dont les marges doivent être lisses avec un bord net. Des précautions doivent être prises lors de la manipulation du foie, car il s’agit d’un tissu friable. Toute perturbation de l’intégrité de l’organe entraînera une fuite de sang dans la cavité corporelle et obscurcira les autres organes.

Pour retirer le foie, réfléchissez d’abord doucement les lobes loin du diaphragme et faites une coupe à travers les vaisseaux sanguins antérieurs à la structure. Ensuite, réfléchissez le foie vers le diaphragme et saisissez le nœud fibreux qui relie tous les lobes au centre. Enfin, soulevez l’organe tout en sectionnant toutes les attaches au tractus intestinal et à l’estomac.

Le système reproducteur féminin se compose de l’utérus et des ovaires. L’utérus est une courte structure en forme de Y avec des cornes s’étendant dans les deux sens. Les cornes se terminent aux trompes de Fallope et aux ovaires, situés juste en dessous des reins. Les ovaires auront une surface rugueuse en raison des différents stades de maturation des follicules.

Pour enlever les ovaires, coupez les attaches artérielles vers l’avant et la trompe de Fallope vers l’arrière. Pour enlever l’utérus, saisissez doucement et coupez sous le col de l’utérus. Après la coupe, soulevez le corps et les cornes de l’utérus en brisant toutes les attaches de la cavité corporelle.

Chez les mâles, vous pouvez également observer les glandes préputiales situées juste en avant du prépuce. Ils semblent grands et sont de couleur grise à jaunâtre avec un aspect mousseux. L’ablation et la fixation de ces glandes sont similaires à celles des glandes sous-maxillaires. De plus, le système reproducteur masculin se compose de vésicules séminales, de la prostate et des testicules. Les vésicules séminales sont des structures blanches, en forme de corne de bélier, situées en avant de la vessie et attachées sur la ligne médiane de la prostate.

La glande prostatique - généralement de couleur beige clair - est située autour de la vessie à la base. Pour visualiser les testicules, saisissez les coussinets graisseux abdominaux situés dans le bas-ventre et tirez-les vers l’avant. Cela permettra de retirer les testicules du scrotum pour permettre l’examen. La surface doit être lisse avec une fine vascularisation évidente à la surface.

L’épididyme se trouve le long de la marge inférieure du testicule et se rétrécit vers le haut. Le canal déférent est attaché à l’extrémité de l’épididyme et ramène à la prostate. Pour enlever les testicules, coupez l’attache au niveau du scrotum et coupez le canal déférent. Pour enlever la prostate et les vésicules séminales, saisissez la base de la vessie et soulevez-la tout en sectionnant les attaches sous la prostate.

Passons aux organes de la cavité thoracique. Pour exposer les structures vitales, retirez le diaphragme de la fixation aux côtes. Ensuite, coupez la cage thoracique latéralement des deux côtés jusqu’au sommet du sternum manubrium, puis réfléchissez les os crâniens pour visualiser les organes thoraciques.

Les poumons sont normalement de couleur rose vif, de texture spongieuse avec une surface lisse. Cependant, l’euthanasie au CO2 peut provoquer des hémorragies pulmonaires entraînant des taches rouge foncé qui peuvent couvrir toutes les surfaces pulmonaires.

Le cœur est rouge foncé et les ventricules sont musclés, qui sont fermes au toucher. Les oreillettes sont de couleur rouge plus foncé et se trouvent au sommet des ventricules. Ils sont beaucoup moins musclés et semblent flasques. Une fine membrane translucide appelée sac péricardique entoure le cœur.

Le thymus est situé en avant du cœur et se trouve au-dessus de la trachée. Il doit avoir une texture lisse. Vous pouvez voir la trachée comme décrit précédemment, et l’œsophage est un tube très mince qui se trouve directement derrière la trachée et derrière le cœur et passe à travers le diaphragme jusqu’à l’estomac.

Pour retirer les organes de la cavité thoracique, commencez par saisir la trachée juste au-dessus du thymus et faites une coupe perpendiculaire juste en avant de la pince. Tout en maintenant la prise, soulevez la trachée vers le haut et coupez toutes les attaches des poumons à la surface de la colonne vertébrale dans la cage thoracique. Il peut être nécessaire de couper l’œsophage pour pouvoir soulever le cœur et les poumons de la cavité thoracique

Après l’ablation du cœur pour le corps, rincez-le avec une solution saline pour éliminer le sang résiduel et les caillots, ou remplissez-le avec le fixateur à travers l’aorte. Une fois les poumons excisés, placez une ligature lâche autour de la trachée. Ensuite, enfilez une aiguille attachée à une seringue contenant le fixateur dans la lumière de la trachée et serrez la ligature. Injectez ensuite le fixateur jusqu’à ce que les poumons soient gonflés. Enfin, retirez l’aiguille et serrez davantage la ligature pour éviter les fuites.

Avec ce souffle de connaissances concernant la nécropsie des rongeurs et le prélèvement de tissus, examinons certaines des expériences de laboratoire actuelles impliquant ces procédures.

La nécropsie diagnostique est un critère d’évaluation courant dans les expériences de métastases cancéreuses. Dans cet exemple, les chercheurs ont injecté des cellules cancéreuses dans la rate du rongeur Puis, trente à soixante jours plus tard, ils ont effectué une nécropsie, qui a révélé d’importantes métastases hépatiques.

L’extraction tissulaire est souvent suivie d’une analyse histologique, ce qui aide à l’étude de l’anatomie microscopique de l’échantillon. En suivant le protocole de fixation, d’encastrement, de section et de coloration des tissus, les chercheurs sont en mesure d’étudier les structures microscopiques de ces organes et de découvrir l’effet d’interventions génétiques ou pharmacologiques au niveau atomique.

Parfois, les chercheurs prélèvent des tissus pour étudier des processus physiologiques, comme l’angiogenèse. Ici, les expérimentateurs ont extériorisé le tissu mésentérique d’un rat pour stimuler la croissance vasculaire. Ensuite, ils ont prélevé quelques sections et les ont traitées avec les marqueurs qui colorent les cellules de tout vaisseau sanguin, afin d’étudier la dynamique cellulaire impliquée dans la croissance du réseau vasculaire.

Vous venez de regarder la vidéo de JoVE détaillant les étapes de la nécropsie diagnostique et de la récolte de tissus chez des animaux de laboratoire. Il est important d’utiliser des techniques appropriées pour le prélèvement et la conservation des organes, afin que la procédure d’extraction n’ait aucun effet sur l’interprétation des données collectées. Comme toujours, merci d’avoir regardé !