Question 1

Qu'est-ce que le tri de cellules par activation magnétique et comment sépare-t-il les cellules?

Accepted Answer

Magnetic-cellule de tri activée, ou MACS, est une technique qui sépare les cellules en fonction d'épitopes spécifiques exprimés sur leurs surfaces. Les anticorps conjugués à la biotine se lient aux cellules cibles, puis des billes magnétiques couplées à la streptavidine se fixent à la biotine. Les cellules marquées collent à un aimant dans une colonne tandis que les cellules non marquées passent à travers, permettant une récupération de 60 à 98% des cellules cibles.

Question 2

Comment fonctionne l'interaction biotine-streptavidine dans MACS ?

Accepted Answer

La biotine, attachée à des anticorps ciblant des marqueurs spécifiques de surface cellulaire, a une haute affinité pour les molécules de streptavidine fusionnées à des billes magnétiques. Lorsque la biotine et la streptavidin entrent en contact, elles se lient étroitement, recouvrant les cellules cibles de billes magnétiques. Ce complexe en sandwich de marqueur de surface cellulaire, d'anticorps et de bille magnétique permet la capture et la séparation magnétiques.

Question 3

Quelles étapes sont impliquées dans la préparation du tissu thymique pour l'isolement par MACS ?

Accepted Answer

Le thymus est extrait et mécaniquement dissocié en cellules simples à l'aide d'un filtre à cellules et d'un piston. Les érythrocytes non désirés sont lysés à l'aide d'un tampon ACK. Les cellules sont ensuite centrifugées et resuspendues dans du HBSS avec du sérum de calfe foetal. La concentration cellulaire est ajustée à 10 à la septième cellule par millilitre avant le marquage magnétique avec des anticorps anti-CD3.

Question 4

Comment les cellules T CD3-positives sont-elles marquées et capturées pendant le MACS?

Accepted Answer

Les cellules sont incubées avec des anticorps anti-CD3 couplés à la biotine sur de la glace pendant 20 minutes, puis lavées. Des billes magnétiques couplées à la streptavidine sont ajoutées et incubées pendant 20 minutes. La suspension cellulaire marquée est pipettée dans une colonne positionnée sur un aimant, où les cellules CD3 positives adhèrent tandis que les cellules non marquées s'écoulent dans un tube de collecte.

Question 5

Quel est le but d'utiliser une colonne dans le processus de séparation MACS?

Accepted Answer

La colonne contient une matrice non magnétique qui allonge le chemin parcouru par les cellules dans le système. Cela ralentit le flux cellulaire, permettant plus de temps aux billes magnétiques pour capturer efficacement les cellules cibles. La colonne améliore l'efficacité de séparation et augmente le pourcentage de cellules récupérées par rapport à la séparation magnétique directe sans colonne.

Question 6

Comment l'efficacité de l'enrichissement des cellules T CD3-positives est-elle vérifiée après MACS ?

Accepted Answer

Les échantillons cellulaires enrichis et non enrichis sont colorés avec des anticorps anti-CD3 fluorescents et analysés à l'aide de cytométrie en flux. Les représentations matricielles affichent les lymphocytes CD3-positifs, qui devraient apparaître principalement dans l'échantillon enrichi. La fréquence des cellules CD3-positives parmi tous les lymphocytes est calculée, les cellules T enrichies montrant généralement 80% ou plus de cellules CD3-positives.

Question 7

Quelles sont les différences entre le triage magnétique positif et négatif?

Accepted Answer

Dans le tri positif, les cellules d'intérêt sont capturées à l'aide de billes magnétiques couplées à des anticorps ciblant les marqueurs de surface souhaités. Dans le tri négatif, les cellules indésirables sont éliminées en les capturant avec des billes magnétiques portant des anticorps appropriés. Les deux approches utilisent le même principe MACS mais diffèrent par la population cellulaire qui est retenue par rapport à celle qui est éliminée.

Tri cellulaire magnétique (MACS) : isolement des lymphocytes T thymiques - Quiz d'évaluation