Question 1

Qu'est-ce que le transfert de cellules adoptives et pourquoi est-il utilisé dans la recherche?

Accepted Answer

Le transfert de cellules adoptives est une méthode permettant d'introduire des cellules dans un organisme pour étudier des mécanismes biologiques ou traiter une maladie. Cela permet aux chercheurs d'examiner des fonctions spécifiques des cellules immunitaires, d'étudier l'hématopoïèse et de tester de nouvelles thérapies comme les traitements du cancer où les cellules T du patient sont extraites, modifiées pour reconnaître les tumeurs, et réintroduites pour combattre le cancer. Les modèles animaux permettent une investigation détaillée du comportement et de l'efficacité des cellules transférées.

Question 2

Pourquoi des souris CD45.1 Rag gamma-c génétiquement modifiées sont-elles utilisées dans les études de transfert adoptif?

Accepted Answer

Les souris CD45.1 Rag gamma-c knockout manquent de récepteurs de cytokines fondamentaux essentiels pour le développement normal des lymphocytes, ce qui entraîne des systèmes immunitaires compromis sans cellules tueuses naturelles, cellules T ou cellules B. Ces souris immunodéprimées servent de récepteurs idéaux pour le transfert adoptif car elles permettent aux chercheurs d'étudier comment les cellules immunitaires donneuses s'établissent et fonctionnent dans un hôte déficient en lymphocytes.

Question 3

Comment les splénocytes sont-ils isolés et purifiés à partir du tissu du donneur?

Accepted Answer

La rate est dissociée à l'aide d'un filtre à cellules et d'un piston pour libérer les cellules en suspension. Les érythrocytes non désirés sont lysés à l'aide d'un tampon de lyse au chlorure d'ammonium et au potassium, et la centrifugation sépare les globules blancs des débris. Les splénocytes purifiés résultants sont dénombrés à l'aide du bleu de trypan et ajustés à la concentration souhaitée avant transfert dans les souris réceptrices.

Question 4

Quel est le rôle de la cytométrie en flux dans la confirmation d'un transfert adoptif réussi?

Accepted Answer

La cytométrie en flux utilisant la fluorescence-cellules de tri activées (FACS) confirme le succès du transfert en détectant les cellules donneuses dans la rate de l'hôte. Les anticorps marqués contre les marqueurs donneurs comme CD45.2 distinguent les cellules transférées des cellules de l'hôte. La technique permet aux chercheurs d'identifier des populations spécifiques de lymphocytes, telles que les cellules T CD4, et de vérifier leur présence et leur distribution chez les souris receveuses.

Question 5

Comment la suspension cellulaire est-elle préparée avant l'injection intraveineuse chez les souris receveuses ?

Accepted Answer

La suspension cellulaire est centrifugée et resuspendue dans une solution saline tamponnée au phosphate par l'intermédiaire de deux étapes de lavage séquentielles. Le pellet final est resuspendu dans 200 microlitres de solution saline tamponnée au phosphate. À l'aide d'une seringue de 0,5 millilitre avec une aiguille de 29 jauges, 200 microlitres de cette suspension cellulaire purifiée sont injectés par voie intraveineuse dans le sinus sanguin rétro-orbital de la souris réceptrice.

Question 6

Que révèle l'analyse FACS sur les lymphocytes transférés par rapport aux lymphocytes de l'hôte?

Accepted Answer

L'analyse FACS distingue les cellules transférées CD45.2 positives des cellules hôtes CD45.1 positives à l'aide de diagrammes en nuage de points. Les cellules transférées n'apparaissent que dans l'échantillon de souris transférées, et pas dans les souris témoins recevant uniquement du tampon phosphate salin. Une analyse plus approfondie identifie des sous-ensembles spécifiques de lymphocytes transférés, tels que les cellules T CD4, démontrant à la fois une greffe réussie et le phénotype des cellules donneuses au sein de l'hôte.

Question 7

Quels facteurs de compatibilité doivent être considérés avant d'effectuer un transfert de cellules adoptives?

Accepted Answer

La compatibilité entre l'hôte et le donneur est cruciale pour assurer l'adoption des cellules sans rejet. Dans ce protocole, des splénocytes de donneurs CD45.2 sont transférés dans des souris receveuses CD45.1 Rag gamma-c, permettant une discrimination entre les cellules donneuses et hôtes. Cette distinction génétique permet aux chercheurs de suivre les cellules transférées et d'évaluer leur intégration, leur survie et leur fonction au sein de l'environnement immunodéprimé de l'hôte.

Transfert adoptif de cellules : introduction de splénocytes d'une souris donneuse vers une souris hôte et évaluation du taux de succès au FACS - Quiz d'évaluation