Name: Implantation de lingénierie tissulaire dans le coeur de rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-24T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Apprenez l'implantation de tissus ingénierés contenant des cellules myogéniques dans le sillon auriculo-ventriculaire du cœur de rat. Cette technique chirurgicale établit une voie de conduction électrique alternative pour la recherche cardiovasculaire.

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Ce travail est soutenu par des subventions de recherche du National Institutes of Health (HL068915; HL088206) et les contributions au Fonds de la conduction cardiaque au Centre hospitalier pour enfants de Boston.

Partie 1: Induction de l'anesthésie générale <ol><li> A 200-250 g Lewis rat est anesthésié avec 50 mg / kg de kétamine et de 4 mg / kg de xylazine injecté avec une aiguille 30 G dans la cavité péritonéale. Le haut de l'abdomen et la poitrine droite sont coupées pour enlever les poils et le site d'incision soigneusement nettoyés avec de l'éthanol 70% puis une solution de povidone-iode antiseptique topique. </li><li> L'animal est intubé endotracheally aide d'un cathéter intraveineux G 16 relié à un respirateur petit animal (Harvard Apparatus). Le respirateur est raccordé à un vaporisateur de fournir 0,5 à 1,0% isoflurane (Baxter) mélangé avec de l'oxygène à 100% afin de maintenir une anesthésie générale. Taux de respiration et du volume courant est ajusté selon le poids corporel du rat. L'animal est placé sur un coussin chauffant (Hood Thermo-Pad) pour maintenir la température du corps pendant l'intervention chirurgicale. </li><li> Pour surveiller le rythme cardiaque et la saturation en oxygène à travers l'intervention chirurgicale un dispositif Oxymètre de pouls (Nellcor) est clipsé sur l'un des membres arrière. </li></ol> Partie 2: thoracotomie et l'implantation de l'ingénierie tissulaire <ol><li> Le site chirurgical est préparé avec drapage chirurgical stérile qui est maintenu en place avec des pinces serviette. </li><li> Une incision est faite à partir du antéro-latérale de la paroi latérale de la poitrine à droite, juste au-dessus de l'espace intercostal, 5 e. L'intérieur de la poitrine est accessible via l'espace intercostal, 5 ème et un petit écarteur (Roboz) est positionné pour maximiser la vue. </li><li> Le péricarde est coupé juste au-dessus de l'appendice de l'oreillette droite et le ventricule droit de la base vers le sommet du coeur. Ensuite, le sillon AV est identifié et la couche épicardique adjacents au triangle aorto-auriculo-ventriculaire est doucement taquiné dehors. </li><li> A 7-0 Prolène suture (Ethicon) est placé à travers l'épaule basale du ventricule droit. Une 2 x 2 x 2 mm morceau est disséqué de la construction de l'ingénierie tissulaire et positionnée dans la rainure AV et doucement enchaîné avec la suture Prolène. </li><li> Le champ opératoire est vérifié pour des saignements et deux sutures Vicryl 4-0 (Ethicon) sont placés entre les supérieurs et inférieurs espace intercostal pour la fermeture de la cage thoracique. </li><li> Tout le pneumothorax apparente est excavée en élargissant les poumons en passant par le ventilateur. </li><li> La paroi thoracique est alors fermé en couches. </li></ol> Partie 3: Récupération <ol><li> Alors que l'animal récupère de la chirurgie, le site de l'incision est infiltrée avec 5 mL de bupivacaïne 0,25% [2]. </li><li> L'animal est extubé après le sevrage du respirateur et est retourné à une cage avec litière fraîche une fois qu'il est pleinement éveillé et sternal. Le rat est ensuite administré 0,01 mg / kg par voie sous cutanée buprénorphine analgésie toutes les 12 heures pendant 3 jours. </li></ol> Partie 4: Les résultats représentatifs Si effectué correctement, le décrit implantation chirurgicale de l'ingénierie tissulaire dans l'AV-sillon du cœur (figure 1) se traduit par plus de 90% de récupération des animaux. <img src="/files/ftp_upload/1139/Figure1.jpg" alt="Figure 1"> Figure 1. Une photographie du cœur exposés montrant le site d'implantation de l'ingénierie tissulaire.

<ol><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+through+engineered+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169, 72-85 (2006).</li>
<li>Shin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+systemic+bupivacaine+prevents+the+development+of+allodynia+after+thoracotomy+in+rats.+Anesth+Analg%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Low-dose systemic bupivacaine prevents the development of allodynia after thoracotomy in rats. Anesth Analg.</a> 107, 1587-1591 (2008).</li>
<li>Horstick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+procedure+affects+physiological+parameters+in+rat+myocardial+ischemia%3A+need+for+mechanical+ventilation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Surgical procedure affects physiological parameters in rat myocardial ischemia: need for mechanical ventilation.</a> Am J Physiol. 276, H472-H479 (1999).</li>
</ol>

Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le soin des animaux et du Comité institutionnel Utilisez au Children s Hospital de Boston.

Pour un résultat favorable à l&#39;intervention chirurgicale, il est essentiel de bien intuber et ventiler l&#39;animal invasive. Si le rat est tout simplement sous sédation et autorisés à respirer spontanément, les deux poumons s&#39;effondrera inévitablement tout le thorax est ouvert en raison de la plèvre commune chez les rongeurs. Avant de refermer le coffre, tout un pneumothorax doit être complètement éliminés et les poumons complètement développées pour réduire l&#39;atélectasie. Sinon, le sevrage du respirateur e...

<table><tbody><tr><td>7x4 Thermo Pad 4/boîte</td><td>Équipement</td><td>Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada</td><td>MODÈLE 704R</td><td></td></tr><tr><td>Respirateur Inspira ASV</td><td>Équipement</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxymètre de pouls portatif</td><td>Équipement</td><td>Nellcor</td><td>N20PA</td><td></td></tr><tr><td>Rétracteur</td><td>Équipement</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-6514</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane (Forane)</td><td>Réactif</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de kétamine</td><td>Réactif</td><td>Hospira Inc.</td><td>RL-0065</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (AnaSed)</td><td>Réactif</td><td>Lloyd, Inc.</td><td>LB15705A</td><td></td></tr><tr><td>Buprénorphine HCL injectable</td><td>Réactif</td><td>Bedford Laboratories</td><td>Div-BUP-P00</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaïne 0,25 %</td><td>Réactif</td><td>Hospira Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

implantation de l&#39;ingénierie tissulaire dans le coeur de rat

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

La chirurgie des rongeurs est souvent un élément important dans l&#39;évaluation de l&#39;utilité de tissus d&#39;ingénierie. Une grande variété de procédures chirurgicales peuvent être effectuées sur des rats ou des souris de laboratoire courants et ces très souvent servir d&#39;étape intermédiaire entre paillasse expériences et essais sur les animaux ou les grands essais sur les humains. Étant donné que les rongeurs fournir un système modèle établi, rentable, et physiologiquement pertinente permettant de tester de nouvelles combinaisons de matériaux d&#39;échafaudage et les cellules, ils sont particulièrement bien adapté pour les études cardiovasculaires ingénierie tissulaire. Actuellement, nous décrivons une procédure chirurgicale à cœur ouvert pour implanter l&#39;ingénierie tissulaire contenant des cellules progénitrices myogéniques dans le auriculo-ventriculaire (AV) sillon d&#39;un coeur de rat. Ces implants sont destinés à créer un conduit électrique entre l&#39;oreillette droite et le ventricule droit dans le but ultime d&#39;offrir un traitement alternatif à l&#39;implantation du stimulateur classique chez les patients pédiatriques présentant un bloc auriculo-ventriculaire complet [1]. L&#39;ingénierie tissulaire est implanté dans l&#39;AV-sillon au moyen d&#39;un thoracotomie. Pour nos besoins, des rats Lewis sont anesthésiés et ventilés afin de maintenir invasive en pression positive durant la procédure chirurgicale stérile. L&#39;approche du cœur est réalisée par une thoracotomie droite à travers une incision antéro-latérale à la 5<sup&gt; E</supL&#39;espace&gt; intercostaux. La construction du tissu est fixé dans la rainure AV à l&#39;aide d&#39;une seule suture Prolène 7-0 et positionné entre le ventricule droit et l&#39;oreillette à la partie ventrale du cœur. L&#39;épicarde est partiellement enlevée pour permettre le contact direct entre les cellules réceptrices du myocarde et ceux contenus dans le génie tissulaire. Après l&#39;implantation, la paroi thoracique est fermé dans les couches, les pneumothorax est évacuée, et l&#39;animal est extubé et traités avec analgésique.

Ici, nous décrivons une procédure de chirurgie cardiaque à l&#39;implant de l&#39;ingénierie tissulaire dans la auriculo-ventriculaire (AV)-groove d&#39;un rat adulte Lewis.

Implantation de l&#39;ingénierie tissulaire dans le coeur de rat

La chirurgie sur les rongeurs constitue souvent une composante essentielle pour évaluer l'utilité des tissus issus de l'ingénierie tissulaire. Un large éventail de procédures chirurgicales peut être réalisé chez...

Bonjour, je suis Zu du laboratoire de Douglas Cowan, du département d'anesthésiologie de l'hôpital pour enfants et de la faculté de médecine de Harvard. Aujourd'hui, nous allons vous montrer une procédure d'implantation d'un tissu génie-équipé dans le cœur rouge. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire afin de créer une voie de conduction électrique alternative entre l'oreillette et le ventricule.Commençons. Cette vidéo décrit l'implantation chirurgicale d'un construct tissulaire ingénierisé contenant des myoblastes. Ce protocole expérimental, basé sur une preuve de principe, fournit des preuves que des moules tissulaires peuvent être fabriqués in vitro et transplantés in vivo chez des receveurs nécessitant la réparation d'un organe non fonctionnel.Et la vidéo accompagnante décrit comment les cellules ont été moulées dans un moule s'adaptant au sillon auriculoventriculaire du cœur d'un rat adulte. Le protocole commence par l'anesthésie d'un rat Lewis de 200 à 250 grammes à l'aide d'un cocktail de kétamine et de xylazine injecté via une aiguille de calibre 30 dans la cavité intrapéritonéale. Une fois que le rat est complètement anesthésié et ne réagit plus à une pincée

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La fabrication des matériaux injectables d&#39;origine biologique pour l&#39;ingénierie tissulaire du myocarde

Imagerie par bioluminescence pour l&#39;évaluation des réponses immunitaires après l&#39;implantation du tissu cardiaque d&#39;ingénierie (ISE)

L'implantation d'un biograft pour traiter l'infarctus du myocarde induite par la ligature LAD dans un modèle de rongeur est classiquement requise des deux opérations à cœur ouvert. Afin de réduire la mortalité et de fournir des conditions optimales pour la fixation de biomatrices gélatineuses solides et associés à des cellules, des procédures minimalement invasives ont été développées.

Thérapie à base de cellules pour l&#39;insuffisance cardiaque chez le rat: Double thoracotomie pour infarctus du myocarde et épicardique implantation de cellules et Biomatrice

Il s’agit d’une ligne directrice pour la construction de tissus vascularisés in vivo à l’aide d’une boucle artérioveineuse microchirurgicale ou d’une configuration pédiculaire à écoulement continu à l’intérieur d’une chambre d’ingénierie tissulaire. Les tissus vascularisés générés peuvent être utilisés pour la régénération des organes et le remplacement des défauts tissulaires, ainsi que pour les tests de médicaments et la modélisation des maladies.

Génie tissulaire par Intrinsic vascularisation dans un<em&gt; In Vivo</em&gt; Tissue Chambre Ingénierie

Nous présentons ici un protocole pour l’induction de cryoinjury ventriculaire gauche, suivie de l’implantation d’un patch du muscle cardiaque, dérivée de cellules iPS humaines cardiomyocytes dans un modèle de cobaye.

Implantation des dérivés hiPSC myocarde patchs après lésion myocardique dans un modèle de cochon d’Inde

Nous décrivons un modèle de transplantation abdominale hétérotopique de coeur chez les rats, impliquant des modifications des stratégies actuelles, qui mènent à une approche chirurgicale simplifiée. En outre, nous décrivons un modèle de rejet nouveau par l’injection dans l’oreille des cellules cardiaques vitales de muscle, permettant d’autres analyses immunologiques de greffe chez des rats.

Un modèle immunologique pour la transplantation héterotopique de cellules cardiaques et cardiaques chez les rats

Ce protocole décrit l’implantation des stents coronaires humains dans l’aorte abdominale des rats avec un fond d’apoE-/- utilisant un accès transport-fémoral. Par rapport à d’autres modèles animaux, les modèles murins ont les avantages d’un débit élevé, d’une reproductibilité, d’une facilité de manipulation et de logement et d’une large disponibilité de marqueurs moléculaires.

Implantation d’endoprothèses coronaires de taille humaine dans l’aorte abdominale du rat à l’aide d’un accès transfémoral

Ce protocole décrit une méthode simple et efficace pour la transplantation de feuillets valvulaires aortiques sous la capsule rénale afin de permettre l’étude de l’alloréactivité des valves cardiaques.

Un modèle simplifié pour la transplantation valvulaire cardiaque hétérotopique chez les rongeurs

Le présent protocole décrit des méthodes d’expression transgénique dans le cœur de rats et de souris par injection intramyocardique directe du virus sous guidage échocardiographique. Les méthodes d’évaluation de la susceptibilité des cœurs aux arythmies ventriculaires par la stimulation électrique programmée de cœurs isolés perfusés par Langendorff sont également expliquées ici.

Expression de transgènes viraux dans les cœurs de rongeurs et évaluation du risque d’arythmie cardiaque

Ce travail présente un modèle animal de fibrose induite par la transition endothéliale à mésenchymateuse, tel qu’il est observé dans les malformations cardiaques congénitales telles que la sténose aortique critique ou le syndrome hypoplasique du cœur gauche, ce qui permet une évaluation histologique détaillée des tissus, l’identification des voies de signalisation régulatrices et le test des options de traitement.

Un modèle de transplantation cardiaque de rat hétérotopique néonatal pour l’étude de la transition endothéliale à mésenchymateuse

Ici, un protocole est présenté pour l’implantation d’un greffon vasculaire issu de l’ingénierie tissulaire dans l’artère carotide de souris à l’aide de la technique du ballonnet, fournissant un modèle animal approprié pour l’étude des mécanismes de régénération du tissu vasculaire.

Implantation d’une greffe vasculaire issue de l’ingénierie tissulaire dans l’artère carotide de souris via la technique du brassard

Apprenez l'implantation de tissus ingénierés contenant des cellules myogéniques dans le sillon auriculo-ventriculaire du cœur de rat. Cette technique chirurgicale établit une voie de conduction électrique alternative pour la recherche cardiovasculaire.

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