Name: Cellules dimagerie à long terme des mammifères en utilisant la microscopie à champ large (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: Découvrez l'imagerie à long terme des cellules de mammifères en utilisant la microscopie à champ large à 37°C. Cette méthode permet d'étudier la progression mitotique en neuroscience avec précision.

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cellules d&#39;imagerie à long terme des mammifères en utilisant la microscopie à champ large

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Cellules d&#39;imagerie à long terme des mammifères en utilisant la microscopie à champ large

En fait, ce que je vais faire, c'est d'abord le monter ici, puis vous remplacer. Donc maintenant, je vais aspirer en essayant d'être le plus doux possible. D'accord. Quelques secondes en maintenant en place. D'accord. Très bien.Ainsi, les caractéristiques importantes de notre grille d'imagerie en conditions physiologiques sont les suivantes : il s'agit d'un microscope inversé, ce qui signifie que l'objectif, les échantillons situés ici par rapport à l'objectif sont en dessous. L'objectif est donc orienté vers le haut, et l'ensemble du microscope, ou pratiquement l'ensemble du microscope, y compris les objectifs et l'échantillon, se trouve à 37 degrés. Ainsi, tout ce qui se trouve dans cette boîte en plastique est maintenu à 37 degrés.Et juste au-dessus de la platine, nous avons un mélange d'air et de CO2 à 5 %CO2. L'idée est que l'échantillon se trouve en réalité dans une enceinte à cellules, comme une incuabteur de cellules.Et donc, voici notre mélangeur pour l'air et le CO₂, qui est ensuite humidifié et chauffé avant d'être acheminé vers l'échantillon placé sur la platine. Très bien. Aujourd'hui, nous allons simplement effectuer une détection de fluorescence en un seul canal, cel

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Biology

Biologie

L'imagerie des tissus embryonnaires en temps réel est difficile sur de longues périodes de temps. Nous présentons ici une analyse pour surveiller les changements cellulaires et sub-cellulaire de la moelle épinière de poulet pendant de longues périodes avec une résolution spatiale et temporelle. Cette technique peut être adaptée pour d'autres régions du système nerveux et de l'embryon en développement.

Imagerie à haute résolution en direct du comportement des cellules dans le développement neuro-épithélium

Imagerie time-lapse est utilisé pour évaluer le comportement des principaux pré-néoplasiques des cellules épithéliales mammaires issues de modèles de souris génétiquement modifiées de risque de cancer du sein afin de déterminer s'il existe des corrélations entre certains paramètres comportementaux et génétiques distinctes des lésions.

Imagerie time-lapse de primaires prénéoplasiques cellules épithéliales mammaires issues de modèles de souris génétiquement modifiées de cancer du sein

La matrice extracellulaire subit un remodelage important lors de la cicatrisation des plaies, l'inflammation et la tumorigenèse. Nous présentons une nouvelle approche de microscopie par immunofluorescence intravitale de visualiser la dynamique des fibrillaire ainsi que maille-comme composants de la matrice avec une résolution spatiale et temporelle en utilisant épifluorescence ou la microscopie à deux photons.

À long terme intravitale immunofluorescence imagerie de tissus composants matriciels avec épifluorescence et deux microscopie biphotonique

Imagerie en temps réel de la cochlée des mammifères embryonnaire est difficile parce que les processus de développement de la main fonctionnent sur un gradient temporel de plus de dix jours. Nous présentons ici une méthode pour la culture et l'imagerie des tissus embryonnaires des explants cochléaire pris d'une souris rapporteur fluorescent sur cinq jours.

À long terme Accéléré imagerie de souris cochléaires explants

Ce protocole décrit l’utilisation de la microscopie multiphotonique pour effectuer une imagerie à long terme, à haute résolution, sur cellule unique, du poumon intact en temps réel à l’aide d’une fenêtre d’imagerie stabilisée sous vide.

À long terme à haute résolution Microscopie intravitale dans le poumon avec un vide Stabilisé Imaging Window

La méthode présentée ici utilise le micromodèle avec l'imagerie quantitative pour révéler l'organisation spatiale au sein des cultures mammifères. La technique est facile à établir dans un laboratoire standard de biologie cellulaire et offre un système tractable pour étudier le modelage in vitro.

Cartographier l'organisation spatiale émergente des cellules mammifères à l'aide de micromodèles et d'imagerie quantitative

Présenté ici est un protocole pour l’implantation d’une fenêtre crânienne chronique pour l’imagerie longitudinale des cellules du cerveau chez des souris éveillées et retenues par la tête.

Implantation d’une fenêtre crânienne pour l’imagerie in vivo répétée chez des souris éveillées

Une approche est présentée ici pour l’imagerie intravitale à long terme utilisant des fenêtres en silicone optiquement claires qui peuvent être collées directement sur le tissu / organe d’intérêt et la peau. Ces fenêtres sont moins chères et plus polyvalentes que d’autres actuellement utilisées sur le terrain, et l’insertion chirurgicale provoque une inflammation et une détresse limitées chez les animaux.

Imagerie intravitale longitudinale à travers des fenêtres en silicone transparent

Ce protocole décrit une nouvelle fenêtre d’imagerie mammaire avec un couvercle remplaçable (R.MIW). La microscopie intravitale après implantation du R.MIW permet une imagerie longitudinale et multi-jours de la glande mammaire saine et malade avec une résolution cellulaire au cours des différents stades de développement.

Microscopie intravitale longitudinale à l’aide d’une fenêtre d’imagerie mammaire avec couvercle remplaçable

Le présent protocole décrit la fabrication d’une grande fenêtre crânienne (6 x 3 mm2) à l’aide d’une pellicule alimentaire, de silicone transparent et de verre de couverture. Cette fenêtre crânienne permet des expériences in vivo d’imagerie calcique à grand champ et à deux photons chez la même souris.

In vivo Imagerie calcique à grand champ et à deux photons d’une souris utilisant une grande fenêtre crânienne

Les protocoles actuels décrivent de nouvelles méthodes d’imagerie à monture entière pour la visualisation des structures périphériques du cristallin oculaire avec des méthodes de quantification d’image. Ces protocoles peuvent être utilisés dans le cadre d’études visant à mieux comprendre la relation entre les structures à l’échelle microscopique des lentilles et le développement/la fonction des lentilles.

Imagerie à monture entière pour visualiser et quantifier la structure, la morphologie et l’organisation des lentilles périphériques

Découvrez l'imagerie à long terme des cellules de mammifères en utilisant la microscopie à champ large à 37°C. Cette méthode permet d'étudier la progression mitotique en neuroscience avec précision.

Cellules d'imagerie à long terme des mammifères en utilisant la microscopie à champ large

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