Name: Cancer borealis Stomatogastric dissection du système nerveux (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 37 s
Description: Découvrez la dissection du système nerveux stomatogastrique chez Cancer borealis pour la neurobiologie. Cette méthode prépare le ganglion stomatogastrique et les nerfs associés pour des enregistrements électrophysiologiques.

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Nous remercions sincèrement les membres du Laboratoire Marder. Nous remercions notre conseiller, la Dre Eve Marder, pour son soutien et ses encouragements. Cette recherche a été financée par l&#39;Institut national des troubles neurologiques et des maladies Subventions NS-17813 et NS-058 110.

1. Dissection brut <ol><li> Placer un crabe sur la glace pendant 30 minutes pour ternes les systèmes sensoriels et moteurs de l&#39;animal. L&#39;entourent sur tous les côtés avec de la glace. Les gants doivent être portés lors de la manipulation du crabe. </li><li> Préparez-vous à la dissection brute en posant la poêle dissection et les outils que vous allez utiliser. Rongeurs, os de coupe ciseaux, petits ciseaux, pince à griffes, une spatule avec un bord effilé, un noir Sylgard revêtement plat, et les broches d&#39;insectes sont nécessaires. </li><li> Retirer le crabe du seau à glace par sa patte arrière pour l&#39;empêcher de pincement et le placer dans la casserole de dissection. </li><li> Retirez les premières griffes en tournant chacun vers l&#39;intérieur. Ensuite, retirer chaque jambe en utilisant le mouvement de torsion même. </li><li> Utilisation de la pince gouge, retirez le maxillaire se couvrir la bouche. Retirez également la maxillule doux. </li><li> Utilisation de la pince gouge à nouveau, à partir de l&#39;extrémité latérale postérieure de la carapace et obtenir une bonne adhérence sur le bord de celui-ci. Etouffer les rongeurs et de briser ce morceau de la carapace hors tension. Prendre soin d&#39;enlever la carapace assez pour permettre à la spatule pour entrer dans l&#39;ouverture. Continuez à supprimer le bord de la carapace jusqu&#39;aux yeux et répétez de l&#39;autre côté. </li><li> Avec le côté effilé de la spatule, grattez délicatement le tissu mou intérieure loin du toit de la carapace dorsale. Gardez la spatule en contact avec la carapace pour éviter d&#39;endommager l&#39;STNS. Utilisez la pince gouge à rompre avec les parties de la carapace qui ont été séparés du tissu. Également séparer certains des tissus mous de la carapace ventrale en prenant soin de séparer les muscles adducteurs attacher le tissu de la carapace. </li><li> Rompre la carapace dorsale postérieure autant que le cœur, où il ya deux petits osselets en saillie de la carapace. Coupez aussi loin que possible antérieure. Stabiliser le céphalon (le «visage») avec un doigt tout en rompant avec les parties les plus antérieure de la carapace dorsale. </li><li> Sur la face ventrale de la carapace, tirez celui mandibules à la fois par l&#39;ancrage de la pince gouge sur une mandibule, tordant leur extérieur pour déloger la mandibule de l&#39;épistome attaché, et l&#39;écartant. Deux longues osselets avec les muscles doivent être joints à la mandibule extraite si c&#39;est fait correctement. </li><li> Écartent le tissu sur les côtés du céphalon près des yeux à l&#39;aide de la spatule. Avec des ciseaux de dissection petit coupé à travers le tissu le plus près de la crête de osselet comme couche par couche possibles. </li><li> Reste le crabe contre une paroi de la casserole de dissection et le soutenir en le fixant en place (les griffes peut être utilisé pour cela). Couper le labrum (&quot;lèvre supérieure&quot;) de l&#39;épistome veillant à ne laisser aucun tissu attaché. L&#39;utilisation d&#39;os de coupe ciseaux faire deux coupes en diagonale dans la carapace ventrale pour enlever le céphalon. </li><li> Prenez le labrum avec une pince à dents et couper la lèvre (&quot;lèvre inférieure&quot;) loin de l&#39;osselet sur la face ventrale. Puis soulevez doucement la lèvre loin de la carapace ventrale restantes. Utilisez des ciseaux petits de séparer la partie ventrale de l&#39;estomac du tissu tapissant la carapace. Lorsque les ampoules pyloriques sont visibles, couper l&#39;estomac loin de le tissu de chaque côté de celui-ci jusqu&#39;à ce que l&#39;estomac est extraite du crabe. </li><li> Tout en maintenant l&#39;estomac par la lèvre avec une pince, le repos de l&#39;estomac contre la paume de la main et versez une solution saline dans la bouche. Cela élargit l&#39;estomac et le rend plus facile à ciel ouvert. Couper de l&#39;ouverture à la bouche vers le bas entre le droit du pylore travers l&#39;osselet entre les ampoules. Puis couper en diagonale vers le bas par les deux branches cardiaques. Coupez les pointes des trois dents à l&#39;intérieur de l&#39;estomac. </li><li> Placez le ventre sur une grande, noir, Sylgard revêtement plat avec l&#39;intérieur de l&#39;estomac vers le bas. Pin bas des cinq coins de la préparation avec des épingles d&#39;insectes et de remplir le plat avec une solution saline froide, plongeant toute la préparation (voir figure 1). </li></ol> 2. Dissection fine <ol><li> , Micro-dissection sont les outils nécessaires pour la dissection fine. En particulier, pinces et de ciseaux à ressort sont nécessaires aussi bien en tant que titulaire broches avec une aiguille de tungstène. Un clair, Sylgard enduits, boîte de Pétri et des épingles fil fin devrait également avoir été préparé. </li><li> Dès le grossissement le plus faible, commencez par mettre le doigt sur les rabats près de la lèvre qui l&#39;habitude d&#39;être l&#39;ouverture bouche. Réorganiser le reste des broches pour faire la préparation tendue et la broche tous les autres secteurs nécessaires. </li><li> Soulevez délicatement l&#39;hypoderme repéré couvrant la partie inférieure de la préparation et la garniture en laissant dans un patch de l&#39;hypoderme avec deux points blancs. </li><li> Peler les jaunes, vaporeux, tissu membraneux près du fond de la préparation. Le mvns sont faiblement attaché à la face de ce tissu. Séparez délicatement l&#39;mvns du tissu jaune comme il est tiré vers le haut. Suivez les tissus jaunes et coupé aux côtés du cerveau. </li><li> Suivez le processus de sortie du cerveau d&#39;épaisseur qui s&#39;étendent laterally. Ce sont les nerfs commisural. Une fois l&#39;extrémité du nerf commissural est atteinte, retirer la masse de spongieux, le tissu blanc cassé qui a été coupé du côté du cerveau. </li><li> Lorsque les ions et fils rencontrent les Cogs, couper les tissus musculaires et de révéler la longueur des ions et des fils. </li><li> Retour au patch hypoderme repéré et le couper. Ceci devrait laisser une ouverture de l&#39;artère qui entoure la STG. Couper à travers l&#39;ouverture de séparer les deux muscles qui entourent la STG. Soulever les extrémités de ces muscles et couper juste en dessous d&#39;eux pour les séparer de l&#39;artère et d&#39;exposer les alns et AGNS. Séparez les muscles flanquant aussi loin que le cartilage couché sur le RTC. </li><li> Coupez le tissu artériel autour de la STG jusqu&#39;à l&#39;endroit où l&#39;mvns, DGN, et dvn rencontrer. Travailler le bas du DVN à l&#39;LVNs et couper à travers l&#39;blanchâtre, tissus délicats couvrant les LVNs. </li><li> Localisez le psn sur l&#39;osselet près du fond de la préparation. Le PSN peut être utilisé pour localiser les LVN et la jonction dlvn. </li><li> Suivant suivre les dlvn bas pour localiser le PYN et PDN. Les enveloppements PYN souvent sur l&#39;ampoule à l&#39;ouverture du pylore. Le PDN bifurque de l&#39;dlvn et est entre les pylorique ampoule et les muscles cardio pylore. Laissez un peu de muscle attaché à l&#39;un de ces nerfs, car ils peuvent facilement être confondues lorsque la préparation est transférée à l&#39;antenne claires Sylgard. </li><li> Une fois que tous les nerfs ont été découverts, de rompre toute connexions restantes entre les STNS et les nerfs des tissus et non désirés de l&#39;estomac. Soigneusement déplacer le STNS loin du reste de l&#39;estomac, la coupe des correspondances manquées. </li><li> Condition du plat Sylgard clair avec la masse restante des tissus de l&#39;estomac en le frottant sur la surface de l&#39;Sylgard jusqu&#39;à ce que le Sylgard ne se sent plus trop collant ou sec. Sylgard est hydrophobe et la STNS adhèrent fortement à elle si le plat Sylgard revêtement n&#39;est pas conditionnée de cette manière. </li><li> Ajoutez un peu de solution saline froide à l&#39;antenne. Prenez les extrémités supérieures des nerfs commissuraux avec des pinces et amener le STNS au plat claires Sylgard. </li><li> Epingler la STNS bas sur le Sylgard. Sever le cerveau par les nerfs commissuraux et utiliser les broches Minuten pour sécuriser les quatre extrémités des rouages ​​en premier lieu. Assurez-vous que la préparation est à l&#39;endroit en vérifiant que le IVN est pointée vers le haut loin du Sylgard. La DGN doit sortir légèrement sous la STG lorsque la STG est du bon côté. Pin le reste du nerf se termine vers le bas avec les goupilles de fil fin. </li><li> Nettoyez toute musculaires restantes ou les tissus de la STNS. </li><li> Desheath le STG utilisant un support et une tige légèrement crochu, fine aiguille de tungstène,. Faire un petit trou dans un coin de la gaine STG loin du corps cellulaire et l&#39;utilisation que le trou d&#39;obtenir entre les couches de la gaine. Découpez soigneusement un rabat de la gaine séparée pour exposer le neuropile STG et les corps cellulaires. </li><li> Pin toute volets de la gaine vers le bas pour augmenter l&#39;accessibilité aux organes de la cellule et de stabiliser la STG pour les enregistrements intracellulaires. Re broches du reste de la STNS veillant à ce que chaque nerf est tendu et bien espacés pour l&#39;enregistrement extracellulaire (voir figure 3). </li></ol> 3. Résultats <ol><li> Idéalement, toutes les nerfs doivent être libres d&#39;entailles et des dommages, en particulier celles qui seront enregistrées à partir. Aucun des nerfs emmêlés devrait être ou tordu. Le STG doit être intact avec tous les cellules disposées dans une formation autour de la barbe neuropile. Le STNS intacte est bilatéralement symétrique et ressemble à un homoncule avec le LVNs que les jambes, le mvns que les armes et l&#39;extrémité antérieure de la tête. </li></ol> Abréviations: <table border="1"><tbody><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric du système nerveux </td></tr><tr><td> STG </td><td> Ganglionnaires Stomatogastric </td></tr><tr><td> CoG </td><td> Ganglionnaires commissurales </td></tr><tr><td> OG </td><td> Ganglion œsophagien </td></tr><tr><td> mvn </td><td> Nerf médian du ventricule </td></tr><tr><td> ions </td><td> Inférieur nerf oesophagien </td></tr><tr><td> le fils </td><td> Supérieur nerf oesophagien </td></tr><tr><td> AGN </td><td> Nerveuses antérieures gastriques </td></tr><tr><td> aln </td><td> Antérieur nerf sciatique </td></tr><tr><td> dgn </td><td> Dorsale du nerf gastrique </td></tr><tr><td> dvn </td><td> Nerf dorsal du ventricule </td></tr><tr><td> LVN </td><td> Nerveuses du ventricule latéral </td></tr><tr><td> psn </td><td> Nerveuses estomac postérieur </td></tr><tr><td> PYN </td><td> Nerveuses pylorique </td></tr><tr><td> pdn </td><td> Nerf dilatateur pylorique </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> Branche dorsale du nerf du ventricule latéral </td></tr><tr><td> IVN </td><td> Nerveuses ventriculaires inférieures </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;Figure 1&quot; /&gt; Figure 1: Schéma illustrant le placement approximatif de la STNS dans l&#39;estomac avant de dissection. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2: Schéma des différents muscles dans la partie inférieure de l&#39;estomac et une superposition des STNS en vert clair. Chaque type de cellule dans la STG est répertorié avec les muscles, ils sont connus pour innerver. Cette carte est utile pour la planification de disséquer un nerf qui transporte un signal provenant d&#39;une cellule donnée (avec la permission du laboratoire de Nadim). <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3: Schéma de l&#39;STNS avec des électrodes intracellulaires et extracellulaires puits (de Marder et Bucher, 2007).

<ol><li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris-Warrick%2C+RM+%22Dynamic+Biological+Networks%3A+The+stomatogastric+nervous+system%22">Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system</a>. , MIT Press. Boston. (1992).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li>
<li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stomatogastric+Nervous+System%3A+Structure+and+function+of+a+small+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li>
</ol>

La dissection STNS est la première étape dans l&#39;exécution d&#39;une expérience ou électrophysiologie immunohistochimie, ou pour obtenir des cellules pour la culture cellulaire. Indépendamment de l&#39;expérience prévue, la dissection brute restera inchangée. Cependant, la dissection fine peut varier. Il est important de planifier à l&#39;avance du temps que les cellules des nerfs et qui vous enregistrer. La plupart des neurones dans la STG ont des processus qui innervent les muscles au moins un dans l&#39;estomac (v...

<table><tbody><tr><td>Sylgard noir 170</td><td>Autre</td><td>Dow Corning</td><td>170</td><td>Dissection macroscopique</td></tr><tr><td>Ciseaux fins</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Épingles à insectes taille 6</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-65</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de Mayo</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14110-17</td><td></td></tr><tr><td>Micro-spatule</td><td>Chirurgie</td><td>WARD&amp;rsquo;s Natural Science</td><td>15 V 4313</td><td></td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à tissus</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Fil fin en tungstène (diamètre 0,001 po)</td><td>Chirurgie</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>Dissection fine</td></tr><tr><td>Pinces n°5</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Minuten Pins</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort Moria (lames de 7 mm)</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri (100x15 mm)</td><td>Autre</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Support pour épingles</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>Pinces super fines n°5SF</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>Autre</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles en tungstène</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stéréoscopique</td><td>Microscope</td><td>Wild</td><td>MC3</td><td>Divers</td></tr><tr><td>Crabe Jonah (&lt;em&gt;C. borealis&lt;/em&gt;)</td><td>Animal</td><td>Commercial Lobster</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cancer borealis stomatogastric dissection du système nerveux

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

Le ganglion stomatogastric (STG) est un excellent modèle pour étudier les interactions cellulaires et le réseau, car il contient un nombre relativement restreint de cellules (environ 25 en C. borealis) qui sont bien caractérisés. Les cellules de la STG présentent un large éventail de sorties et sont responsables de l&#39;action motrice de l&#39;estomac. L&#39;estomac contient le moulin gastrique qui décompose les aliments avec trois dents internes, et le pylore qui filtre la nourriture avant qu&#39;elle atteigne l&#39;intestin moyen. Le STG produit deux sorties rythmiques pour contrôler le moulin gastrique et le pylore connue en tant que générateurs motif central (GPC). Chaque cellule dans la STG peuvent participer à l&#39;une ou l&#39;autre de ces rythmes. Ces GPC permettre l&#39;étude de la neuromodulation, l&#39;homéostasie, la variabilité cellulaire et réseau, développement du réseau, et la reprise du réseau. La dissection du système nerveux stomatogastric (STNS) du crabe nordique (Cancer borealis) se fait en deux parties: la dissection fine et globale. Dans la dissection brute de l&#39;estomac entier est disséqué du crabe. Pendant la dissection fines du STNS est extraite de l&#39;estomac à l&#39;aide d&#39;un microscope de dissection et de micro-dissection des outils (voir figure 1). Le STNS comprend les STG, le ganglion œsophagien (OG), et les ganglions commissuraux (CG) ainsi que les nerfs qui innervent les muscles du ventre. Ici, nous montrons comment effectuer une dissection complète de l&#39;STNS en préparation pour une expérience électrophysiologie où les cellules dans la STG seraient enregistrées à partir intracellulaire et les nerfs périphériques seraient utilisées pour des enregistrements extracellulaires. La bonne technique pour trouver les nerfs désirée est affichée, ainsi que notre technique de dégainage le ganglion de révéler le soma et le neuropile.

Le système nerveux stomatogastric (STNS) du crabe nordique (<em&gt; C. boréales</em&gt;) Peut être utilisé pour l&#39;électrophysiologie, l&#39;immunohistochimie, et les études de culture cellulaire. L&#39;extraction STNS se fait en deux parties: la dissection fine et globale.

Cancer borealis Stomatogastric dissection du système nerveux

Le ganglion stomatogastrique (STG) constitue un excellent modèle pour l'étude des interactions cellulaires et de réseau, car il contient un nombre relativement restreint de...

Cette procédure commence par une dissection macroscopique de l'estomac du crabe, au cours de laquelle les appendices et le carpe dorsal sont retirés du crabe. L'estomac entier est disséqué à partir de l'animal. L'estomac est ouvert par une incision et fixé à plat sur une boîte de Petri noire.En prévision de la dissection fine, le système nerveux gastrique de Steamatic est disséqué à partir de l'estomac et transféré dans une boîte de Pétri claire revêtue de Sard, où il est débarrassé de ses gaines en vue d'une expérience d'électrophysiologie. Bonjour, je m'appelle Rachel Au du laboratoire Martyr à l'Université Brandeis. Et moi, c'est Gabrielle Gutierrez, également du laboratoire Martyr.Aujourd'hui, nous allons vous présenter une procédure permettant de disséquer le système nerveux gastrique somatique du crabe Cancer borealis. Nous utilisons le crabe St NS dans notre laboratoire pour nos expériences d'électrophysiologie, d'immunohistochimie et de culture cellulaire. À l'aide de ce réseau neuronal, nous pouvons étudier plusieurs principes fondamentaux de la neurobiologie, tels que la modulation neuronale, l'homéostasie, la variabilité du réseau, le développement du réseau et la récupération du réseau.Commençons. Avant de commencer la dissection, il faut engourdir le crabe en l'enterrant dans de la glace pendant 30 minutes. Veillez à l'entourer complètement de glace.La glace neutralise les systèmes sensoriel et moteur du crabe, mais ce dernier pourrait encore être réactif lorsqu'il est retiré, tant qu'il reste au frais. Préparez-vous à la dissection macroscopique en rassemblant le matériel nécessaire pour cette étape du protocole. Le plateau de dissection, les pinces à bec courbé, les ciseaux à os, les petits ciseaux, la pince à dents, la spatule à bord effilé, la boîte recouverte d'une couche noire en silicone et les épingles à insectes doivent être prêts avant le début.Protégez-vous en mettant des gants. Une fois les 30 minutes écoulées, retirez le crabe du seau de glace par sa patte arrière. Pour éviter de vous pincer et afin de le placer d'abord dans le bac de dissection, retirez les pinces en tournant chacune d'entre elles vers l'intérieur.Ensuite, retirez chaque patte en utilisant le même mouvement de torsion. Maintenant que l'animal est dépourvu de ses appendices, utilisez le Ron Jos pour enlever la maxille qui recouvre la bouche et la maxille molle. En utilisant à nouveau le Ron Jos, commencez par l'extrémité postérieure latérale du carpe et saisissez fermement son bord. Serrez bien avec le Ron Jos et cassez ce morceau de carpe.Veillez à retirer suffisamment de carpe pour permettre à la spatule d'entrer dans l'ouverture. Continuez à retirer le bord du carpe jusqu'aux yeux, puis répétez l'opération de l'autre côté. À l'aide du côté effilé de la spatule, grattez délicatement les tissus mous internes du toit du carpe dorsal.Pendant cette opération, maintenez la spatule en contact avec le carus. Pour éviter d'endommager les STNS, utilisez le Ron Jos afin de détacher les parties du carus qui ont été séparées du tissu. Détachez le carus dorsal jusqu'à l'endroit où deux petits S émergent du carus.Couper aussi antérieurement que possible. Stabiliser le céphalon avec un doigt tout en détachant les parties les plus antérieures du carapace dorsal. Séparer certains tissus mous du carapace ventral.Veillez à séparer tous les muscles adducteurs reliant le tissu au carus sur la face ventrale du carus. Extrayez les mandibules une par une en fixant les mâchoires incorrectes sur une mandibule en la tournant vers l'extérieur et en tirant pour retirer deux obstacles allongés auxquels des muscles devraient être attachés. Si l'opération est correctement réalisée, séparez le tissu des côtés du céphalon près des yeux.À l’aide de la spatule et de petites ciseaux de dissection, sectionner couche par couche le tissu juste à côté de la crête de l’ossicule. Maintenir ce qui reste du crabe en appui contre le plateau de dissection. À l’aide des pinces détachées, détacher entièrement le labre de l’épistome.À l’aide de petites ciseaux, et en utilisant des ciseaux à sectionner les os, effectuez deux incisions en diagonale dans le carpe ventral. Pour retirer le céphalon, saisissez maintenant le labre avec une pince dentée et sectionnez le labium du côté ventral, à l’écart de l’osci. Soulevez délicatement la lèvre du reste du carpe ventral.Utilisez de petites ciseaux pour séparer la partie ventrale de l'estomac du tissu qui tapisse le carus. Lorsque les canules poriques sont visibles, découpez l'estomac du tissu de chaque côté jusqu'à ce que l'estomac soit extrait du crabe, en tenant l'estomac par la lèvre avec une pince. Posez l'estomac contre votre paume et versez du sérum physiologique dans la bouche.Cela permettra de dilater l'estomac et de faciliter son ouverture à l'aide des petites ciseaux. Couper depuis l'ouverture de la bouche vers le bas, entre les ula, en traversant l'obstacle. Ensuite, couper en diagonale à travers les deux branches cardio.Enfin, coupez les extrémités des trois dents situées à l'intérieur de l'estomac. Placez l'estomac sur une boîte de Pétri noire recouverte de papier filtre, la face interne vers le bas, afin de préparer la dissection fine. Fixez les cinq coins de l'estomac à l'aide d'épingles à insectes et immergez la préparation dans du sérum physiologique froid.La dissection fine s'effectue sous stéréomicroscope et nécessite une pince, des ciseaux à ressort, ainsi qu'un porte-épingle équipé d'une aiguille en tungstène. Une boîte de Pétri munie d'un rebord transparent préalablement recouvert doit être prête, ainsi que quelques épingles fines. En commençant par le grossissement le plus faible, fixez avec des épingles les lambeaux situés près du bord qui correspondait à l'ouverture buccale. Tendez ensuite la préparation en réorganisant et en ajoutant des épingles selon les besoins.Avec une pince, soulevez délicatement l'hypoderme tacheté recouvrant la partie inférieure de la préparation et taillez-le transversalement. Ce qui doit rester est une plaque d'hypoderme avec deux points blancs. Détachez maintenant la fine membrane jaunâtre située près du bas de la préparation. Les M vns sont faiblement attachés à la face inférieure de ce tissu.À l’aide de la lame des ciseaux, séparez soigneusement le VNS moteur du tissu jaune pendant qu’il est tiré vers le haut. Retirez le tissu jaune ainsi que les quelques épais processus blancs visibles du cerveau. La majeure partie du cerveau est actuellement enfouie dans le tissu.Suivez les prolongements qui s'étendent latéralement et vers la lèvre. Ce sont les deux nerfs commissuraux. Une fois l'extrémité du nerf commissural repérée, retirez le tissu massif, épongeux et blanc grisâtre qui a été découpé sur le côté du cerveau.Localisez les nerfs IO et SO au niveau de la jonction où ils rejoignent les ganglions commissuraux. Retirez le muscle et les tissus afin de mettre en évidence la longueur des nerfs IO et SO ; ces deux nerfs cheminent en direction médiale à partir des ganglions commissuraux et rejoignent le nerf œsophagien. Revenez à la zone hypodermique tachetée et découpez-la.Cela devrait laisser une ouverture dans l'artère entourant le STG. Couper par cette ouverture pour séparer les deux muscles qui flanquent le STG. Soulever les extrémités de ces muscles et couper en dessous pour les détacher de l'artère. Cette étape expose les ganglions lymphatiques axillaires (ALNs).Retirez les muscles latéraux jusqu'à la ligne cartilagineuse au-dessus du STN. Le TN est un nerf qui remonte depuis le STG et présente une légère saillie. Ensuite, éliminez le tissu artériel entourant le STG jusqu'au point de convergence du M vns DGN et du DVN.Suivez le DVN lorsqu'il se divise en deux LVNs. Coupez le tissu délicat de couleur blanchâtre jusqu'à ce que chaque LVN soit complètement exposé et rejoigne le DLVN. Localisez le PSN au-dessus de l'Osco.Près du bas de la préparation, le PSN peut être utilisé pour localiser la jonction entre le LVN et le DLVN. Ainsi, le DV DLV suit ce trajet. Il descend ici. Oui.Ensuite, il se divise et part dans cette direction. Exactement. Et donc ce que je fais habituellement, c'est que je les repère ici en bas, puis je remonte progressivement. Le nerf phrénique descend du nerf laryngé inférieur et se situe entre les muscles de l'ULA et la valve cardio-pylorique. Oui. Voici donc l'ampoule de l'ULA, l'ampoule de l'ULA, le P, le PYN juste ici.Veillez à laisser un peu de muscle attaché à l'un de ces nerfs afin de servir de marqueur pour les distinguer les uns des autres. Une fois que tous les nerfs ont été mis à nu, sectionnez toutes les connexions restantes entre le STNS et l'estomac. Enfin, éloignez délicatement le STNS du reste de l'estomac.Couper toutes les connexions manquées. Préparez la coupelle de garde S transparente en frottant un peu de tissu gastrique dessus jusqu'à ce qu'elle soit humide et moins collante. Le STNS adhérera fortement au sogar.Si la boîte n'est pas conditionnée de cette manière, ajoutez un peu de sérum physiologique frais et froid dans la boîte. Saisissez les extrémités supérieures des nerfs commissuraux avec une pince et déplacez le st NS vers la boîte Sogar claire. Le cerveau restera attaché aux nerfs commissuraux afin d'éviter tout emmêlement.Maintenant, préparez les STNS en vue de leur fixation en sectionnant le cerveau des nerfs commissuraux. Utilisez des épingles minuchin pour fixer les quatre extrémités des nerfs commissuraux sur la garde d'appui. Vérifiez que le montage est dans le bon sens en vous assurant que le nerf IVN est orienté vers le haut et que le nerf DGN émerge légèrement sous l'épingle du STG.Le reste du nerf est sectionné vers le bas à l’aide des broches en fil fin à l’aide de pinces et de ciseaux fins. Retirez soigneusement tout muscle ou tissu résiduel du STNS. Le STG doit maintenant être désenveloppé à l’aide d’un porte-aiguille et d’une fine aiguille de tungstène légèrement recourbée.Faites un petit trou dans le coin de la gaine du STG, à l'opposé des corps cellulaires. Insérez délicatement l'aiguille en tungstène dans le trou et glissez-la entre la gaine et le Samara. Coupez ou déchirez doucement un lambeau de gaine détachée afin d'exposer le bourgeon neurogène du STG et les corps cellulaires.Épingler les éventuels lambeaux de gaine afin d'améliorer l'accès aux corps cellulaires et de stabiliser le GTS pour les enregistrements intracellulaires. Tendre le reste du SNT en veillant à ce que chaque nerf soit bien tendu et suffisamment espacé pour l'enregistrement extracellulaire. Idéalement, tous les nerfs doivent être exempts de rétrécissements et de lésions, en particulier ceux à partir desquels vous effectuerez les enregistrements.Aucun des nerfs ne doit être emmêlé ou tordu. Le GST doit être intact, avec toutes ses cellules disposées en formation de barbe autour du bec du NI. Le STN était bilatéralement symétrique et présentait une apparence de homoncule, les NVM formant les jambes.Le M vns correspond aux membres et l'extrémité antérieure est la tête. Nous venons de vous montrer comment disséquer le système nerveux gastrique somatique du crabe en vue d'une expérience d'électrophysiologie. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler de disséquer les nerfs à partir desquels vous prévoyez d'enregistrer, en suivant les nerfs souhaités jusqu'aux muscles qu'ils innervent habituellement.Veillez à ce que le STNS soit fixé fermement sur la coupelle transparente en forme de cigare, le côté du STG dégarni étant orienté vers le haut. Voilà, c'est terminé. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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