Name: Gene-gun transfection de neurones de lhippocampe (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Apprenez la transfection par biolistique de neurones hippocampiques isolés à l'aide d'un étage de coupe stérile. Cette méthode précise facilite l'étude de la fonction neuronale et des mécanismes de mémoire.

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gene-gun transfection de neurones de l&#39;hippocampe

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gene-gun transfection de neurones de l&#39;hippocampe

Bonjour, je suis Kma. Je travaille au laboratoire Case de l'Université Brown sur une lame propre traitée avec de l'éthanol à 70 %. Placez l'insert de la plaque dans le six.Plaque de culture avec milieu et incuber à 37 degrés, cerveau entier avec des pinces entre le mésencéphale et le diencéphale. Isoler l'hippocampe d'un côté, puis isoler l'hippocampe du deuxième côté. Placer les hippocampes sur une goutte de PBS. Aspirez le PBS et réalisez des coupes sagittales à l’aide du coupe-tissu. Transférez à plusieurs reprises les coupes sur un plat à l’aide d’une pince en les rinçant avec du PBS par ajout et aspiration douce du PBS et du milieu. Séparez les coupes à l’aide de pinces. Lavez les sections avec du PBS et du milieu. Transférez à nouveau les sections sur la plaque et insérez-les. Aspirez le milieu des sections à l’aide de pinces. Fixer le tuyau du pistolet à gènes sur la bouteille d'hélium. Fixer le canon au pistolet à gènes. Remplir le chargeur avec les microbilles.Insérez le magasin dans le pistolet Jing. Réglez la pression du réservoir d'hélium pour tirer. Déposez les billes revêtues de EGFP sur les sections.Et maintenant.

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Nous décrivons une méthode pour la préparation de l'ADN des balles d'or revêtues et de démontrer l'utilisation de ces balles à biolistically transfecter des neurones en culture des coupes d'hippocampe.

Préparation de balles pistolet à gènes et transfection biolistique des neurones en culture Slice

Imagerie des cellules vivantes est d'une utilité particulière lorsque l'on étudie la dynamique du trafic des organelles. Nous décrivons ici un protocole d'imagerie en temps réel du noyau dense vésicules dans des neurones cultivés en utilisant la microscopie à fluorescence à champ large. Ce protocole est flexible et peut être adaptée aux organites autre image tels que les mitochondries, les endosomes, et les peroxysomes.

Imagerie en temps réel du noyau dense de vésicules cultures primaires neurones de l&#39;hippocampe

Ce protocole décrit les étapes nécessaires à disséquer, transfecter par électroporation et de neurones de souris de la culture de l'hippocampe et du cortex. Cultures à court terme peut être utilisé pour des études d'excroissance axonale et d'orientation, tout en cultures à long terme peut être utilisé pour des études de la synaptogenèse et l'analyse des épines dendritiques.

Nucléofection et de la culture primaire de neurones embryonnaires de souris hippocampe et cortex

Contrôle de l'expansion des cellules souches somatiques est un facteur majeur qui pèse sur leurs études et leur utilisation en thérapie. Ici, nous décrivons un système à contrôler temporellement les cellules souches neurales l'expansion au cours du développement et de l'âge adulte, ce qui peut être utilisé pour augmenter le nombre de neurones générés dans le cerveau de souris.

Expansion du embryonnaires et cellules souches neurales adultes par<em&gt; In Utero</em&gt; Électroporation ou virale par injection stéréotaxique

Source : Keener, D. G., et al. Électroporation unicellulaire à travers différentes cultures de coupes organotypiques de neurones excitateurs et inhibiteurs spécifiques à la classe de souris. J. Vis. Exp. (2020).Cette vidéo démontre le processus d’électroporation d’une cellule unique pour introduire de l’ADN plasmidique dans les neurones des cultures de tranches d’hippocampe de souris. La procédure implique un positionnement précis de la pipette, des ajustements de pression et des impulsions...

Expression génique par électroporation de cellule unique dans des cultures de tranches d’hippocampe de souris

précipitation au phosphate de calcium est une méthode pratique et économique pour la transfection de cellules en culture. Avec l'optimisation, il est possible d'utiliser cette méthode sur des cellules difficiles à transfecter comme les neurones primaires. Ici, nous décrivons notre protocole détaillé pour le phosphate de calcium transfection de neurones de l'hippocampe co-cultivés avec des cellules astrocytes.

Phosphate de calcium transfection de primaire neurones de l&#39;hippocampe

Les améliorations récentes apportées aux préparations de coupes de cerveau organotypiques ont permis de les exploiter pour des applications biotechnologiques. Les coupes organotypiques conservent les caractéristiques structurelles locales de la biologie in vivo, y compris les connexions synaptiques fonctionnelles. Nous présentons ici une méthode d’administration biolistique régiosélective pour étiqueter et manipuler génétiquement ces tranches.

Régiosélective Biolistic ciblage dans les tranches de cerveau organotypique l&#39;aide d&#39;un pistolet à gènes modifiés

Ici nous présentons un protocole, conçu pour employer des outils chimiogénétiques pour manipuler l'activité des progéniteurs interneurons corticaux transplantés dans le cortex des souris postnatales tôt.

Transplantation de progéniteurs interneuron corticales génétiquement modifiés dans les cerveaux de souris postnatales précoces

Présenté ici est un protocole pour l’électroporation unicellulaire qui peut livrer des gènes dans les neurones excitateurs et inhibiteurs à travers une gamme d’âges in vitro de culture de tranche hippocampique. Notre approche fournit une expression précise et efficace des gènes dans des cellules individuelles, qui peuvent être utilisées pour examiner les fonctions cellulaires autonomes et intercellulaires.

Électroporation unicellulaire à travers différentes cultures de tranches organotypiques de neurones excitateurs excitateurs de l’hippocampe de souris et de neurones inhibiteurs spécifiques à une classe

Cette technique démontre d'une manière efficace de se préparer à réplication déficiente stocks rétroviraux codant pour une oncogène humain, et par la suite utilisé pour l'induction de syndromes myéloprolifératifs dans le modèle murin.

Production de réplication défectueuse Rétrovirus par transfection transitoire de cellules 293T

Apprenez la transfection par biolistique de neurones hippocampiques isolés à l'aide d'un étage de coupe stérile. Cette méthode précise facilite l'étude de la fonction neuronale et des mécanismes de mémoire.

Gene-gun transfection de neurones de l'hippocampe

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