Name: Mesure Extension mur cellulaire végétale (Creep) induite par un pH acide et par Alpha-expansine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: Découvrez la mesure de l'extension des parois cellulaires végétales par extensométrie à force constante. Cette méthode évalue l'effet du pH acide et des protéines expansines sur l'extensibilité des parois cellulaires de concombre.

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Les techniques présentées ici ont été développées grâce à un financement par des subventions du ministère de l&#39;Énergie (Sciences de la bioénergie) et la National Science Foundation.

Partie 1: La culture et le stockage du matériel végétal adapté <ol><li> Dans notre expérience, de jeunes plants hypocotyles étiolés concombre servir une source pratique de matériau de paroi cellulaire pour ces expériences. Graines de concombre sont semées sur le papier humide dans une boîte étanche à la lumière, ce qui est de garder dans une armoire sombre dans une pièce à température constante fixée à 26 ° C. La température exacte n&#39;est pas critique, comme quelque chose entre 22 ° et 30 ° C devrait être bon, mais la température sera de déterminer à quelle vitesse les plants atteignent un stade approprié de développement. Le réchauffement de la température, plus le semis se développeront. Nous utilisons généralement des plants quand ils ont passé à environ 5 cm de longueur, qui est atteint 3-4 jours après le semis. Il est important que la plantule être cultivés dans l&#39;obscurité, que même de petites quantités de lumière affectent à la fois le taux de développement des semis et les propriétés paroi cellulaire que l&#39;on mesure avec cette technique. Au jour 3, vous pouvez coup d&#39;oeil dans la boîte, en utilisant une faible lumière verte filtrée, pour vérifier sur le développement des plantules. </li><li> Les plants sont rapidement coupés et emballés dans des petits boîtes en plastique, 100-150 plants par boîte, et conservés à -80 ° C. A cette température, ils restent utiles pendant des semaines. </li></ol> Partie 2: Préparation des échantillons paroi cellulaire <ol><li> De petits groupes (8-10) des plants coupés congelés sont transférés du congélateur pour un conteneur isotherme contenant un bloc de congélation -80. </li><li> La cuticule qui couvre l&#39;hypocotyle est abrasé avec carborundum. Cela se fait en plusieurs reprises le dessin de l&#39;hypocotyle entre le pouce et l&#39;index, qui sont recouverts d&#39;une boue épaisse de poudre de carborundum humide. Il faut un peu d&#39;expérience pour connaître le montant exact de la pression d&#39;utilisation: trop de pression et de la couche épidermique commence à être déchiquetés et déchirés, trop peu de pression et de la cuticule ne sera pas perméabilisées. On doit aussi travailler rapidement parce que le dégel congelé hypocotyle, il devient flasque et difficile à gérer. </li><li> L&#39;hypocotyle abrasé est plongé dans l&#39;eau glacée pour enlever la plupart du carborundum adhérant puis stockés sur l&#39;eau glacée tout en restant les hypocotyles sont préparés d&#39;une manière semblable. </li><li> Les hypocotyles sont coupées à la longueur désirée, généralement de 1,2 cm, avec une lame de rasoir nouvelles seul tranchant, puis alignés sur une lame de verre. </li><li> Maintenant nous avons besoin d&#39;aplatir les murs pour enlever la sève cellulaire et de faciliter serrage. Une seconde lame de verre est placée sur le dessus du groupe de 8-10 échantillons, formant un sandwich. Un poids (400-500 g) est placé sur le dessus de la lame de verre pendant 5 min. Pour le poids nous avons l&#39;habitude d&#39;utiliser un bécher contenant une quantité appropriée d&#39;eau. </li><li> Étape facultative: Selon l&#39;expérience, les hypocotyles peut être inactivé par un traitement thermique brève à ce point. Pour ce faire, nous lier les lames de verre avec une paire de bandes de caoutchouc, de placer l&#39;ensemble dans un récipient avec 100 ml d&#39;eau déminéralisée à température ambiante et le placer dans un four à micro-ondes à pleine puissance. Avec notre four à micro-ondes de l&#39;eau commence à bouillir à environ 50 s et nous nous arrêtons au micro-ondes 15 s après l&#39;ébullition commence. L&#39;eau chaude est rapidement vidé et remplacé par de l&#39;eau froide pour arrêter la dénaturation. Vous pouvez avoir à modifier ces horaires, en tant que votre micro-ondes peut être différente de la nôtre. Avec l&#39;échauffement excessif des échantillons deviennent faibles et se brisent facilement. Avec un chauffage insuffisant du expansine endogènes n&#39;est pas inactivé et les échantillons mur de conserver une certaine réactivité à pH acide. </li></ol> Partie 3: configuration Extensomètre <ol><li> Les échantillons murs sont désormais bridée dans un extensomètre à force constante. Ceci est un dispositif sur mesure qui consiste d&#39;une cuvette en plexiglas pour la tenue de l&#39;extrémité basale de l&#39;échantillon mur et une pince amovible fixé à l&#39;extrémité apicale de l&#39;échantillon. La pince mobile est monté à l&#39;extrémité d&#39;une tige qui traverse les bobines ouverte d&#39;un capteur de position, un LVDT ou «transformateur différentiel», qui détecte électroniquement la position d&#39;un cylindre métallique de petites ou «de base», qui est attachée à la tige. L&#39;extrémité supérieure de la tige est reliée à un levier avec un contrepoids ajustable. Ce levier exerce une valeur réglable de force à la hausse sur l&#39;échantillon mur. La force est ajustée en ajoutant ou en enlevant des poids métalliques calibrée à l&#39;extrémité du levier. </li><li> Retour à l&#39;échantillon de mur - l&#39;extrémité basale de l&#39;échantillon hypocotyle est ramassé avec une pince fine et ~ 2-3 mm de l&#39;extrémité apicale est placé entre les mâchoires ouvertes de la pince mobile. Cette pince est une pince crocodile à ressort dont les mâchoires sont en métal recouvert de plastique pour empêcher tout contact direct entre la surface du métal et la solution tampon ou de l&#39;échantillon mur. Dans notre expérience ions métalliques peuvent être lessivés de la pince et d&#39;inhiber la capacité du mur à étendre, et si nous gardons le métal couvert. </li><li> En tenant l&#39;ensemble de serrage mobiles dans une main, l&#39;extrémité basale de l&#39;échantillon de mur est désormais manoeuvré entre les morceaux articulée en deux de la cuvette en plexiglas et la cuvetteles pièces sont réunies et vissée, verrouillant ainsi l&#39;extrémité inférieure de l&#39;échantillon mur dans la cuvette. </li><li> L&#39;assemblage de serrage mobile est désormais publié en douceur, permettant la pleine force de contrepoids à être transférée à l&#39;échantillon de mur. Nous utilisons régulièrement un contrepoids total de 20 g pour les échantillons préparés à partir d&#39;hypocotyles mur de concombre. Autres matériaux des murs ou des expériences pourraient exiger des poids différents. </li><li> La cuvette est remplie avec le tampon (200 uL) et la position de la cuvette vers le haut ou vers le bas avec une vis de réglage, de sorte que la pince mobile est amené à l&#39;extrémité inférieure de la plage de mesure LVDT. Notre LVDT est connecté à une unité d&#39;acquisition de données d&#39;un micro-ordinateur, et si nous suivons la position LVDT à travers l&#39;ordinateur. Nous avons huit assemblées LVDT connecté en parallèle avec un ordinateur, ce qui nous permet d&#39;exécuter simultanément 8 échantillons mur. L&#39;ordinateur enregistre la position de chacune des assemblées LVDT fois toutes les 30 s. </li></ol> Partie 4: extension de la réponse à la mesure de pH acide ou expansine - Résultats Représentant <ol><li> [Première expérience] Pour la mesure de l&#39;acide-induced extension, nous commençons avec des échantillons de mur natif (qui est, non pas inactivé par la chaleur) et un tampon neutre est ajouté à la cuvette. Les échantillons mur de prolonger de quelques minutes, en réponse à la tension ajoutée, mais les désintégrations extension à un faible taux après quelques minutes. Notre ordinateur nous permet de suivre soit la variation de longueur de l&#39;échantillon (qui est, le changement de position de la pince amovible, après le début de l&#39;expérience) ou nous pouvons suivre la dérivée temporelle de la position, en d&#39;autres termes le taux d&#39;extension . Le taux d&#39;extension se stabilise à une valeur faible avec le temps. </li><li> Après environ 20 minutes, le tampon neutre est supprimé. Nous utilisons un tuyau de métal mince, fabriqué à partir d&#39;une aiguille hypodermique de gros calibre, relié à une pompe à vide pour enlever le tampon rapidement, avec une perturbation minimale de la paroi ou l&#39;assemblage mécanique. Tampon acide est ensuite ajouté, parfois avec 1-2 échanges rapides pour assurer l&#39;échange complet de tampon acide. Ensuite, nous s&#39;asseoir et regarder la réponse de la paroi. Typiquement on peut détecter l&#39;accélération du rythme de l&#39;extension, en quelques minutes. Après 60 min nous avons habituellement suffisamment d&#39;informations pour évaluer la réponse d&#39;extension, bien que dans certains cas, les mesures peuvent s&#39;étendre à de plus longues périodes. </li><li> [Deuxième expérience] Pour la mesure de l&#39;extension expansine induite paroi cellulaire, nous commençons avec des échantillons de mur inactivé à la chaleur et le tampon acide est ajouté à la cuvette. Comme dans la première expérience, le taux d&#39;extension paroi cellulaire se stabilise progressivement à une valeur faible en raison du manque de expansine fonctionnelle. </li><li> Après environ 20 minutes, les protéines expansine est ajouté à la cuvette par «dopage» avec le tampon dans la cuvette avec 10-20 uL d&#39;une solution expansine. Le expansine pénètre rapidement l&#39;échantillon paroi cellulaire et en quelques minutes, nous voyons que le taux d&#39;extension a augmenté. Cette réponse d&#39;extension peut être suivie pendant une heure ou plus. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1263/fig1.png" alt="" width="600" height="469" /> Figure 1: Schéma des procédures de préparation des parois cellulaires pour évaluer induite par l&#39;acide ou de l&#39;extension expansine induite mur.

<ol><li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+extension+of+isolated+cell+walls+from+growing+cucumber+hypocotyls%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term extension of isolated cell walls from growing cucumber hypocotyls.</a> Planta. 177, 121-130 (1989).</li>
<li>Rayle, D. L., Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Acid+Growth+Theory+of+auxin-induced+cell+elongation+is+alive+and+well%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Acid Growth Theory of auxin-induced cell elongation is alive and well.</a> Plant Physiol. 99, 1271-1274 (1992).</li>
<li>Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxin-induced+growth+of+Avena+coleoptiles+involves+two+mechanisms+with+different+pH+optima%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Auxin-induced growth of Avena coleoptiles involves two mechanisms with different pH optima.</a> Plant Physiol. 99, 1556-1561 (1992).</li>
<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loosening+of+plant+cell+walls+by+expansins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loosening of plant cell walls by expansins.</a> Nature. 407, 321-326 (2000).</li>
<li>McQueen-Mason, S., Durachko, D. M., Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+endogenous+proteins+that+induce+cell+wall+expansion+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Two endogenous proteins that induce cell wall expansion in plants.</a> Plant Cell. 4, 1425-1433 (1992).</li>
</ol>

Pour cette démonstration, nous avons utilisé les parois cellulaires des hypocotyles de concombre, parce qu&#39;ils se sont révélés être une source fiable d&#39;échantillons mur qui sont faciles à manipuler et qui répondent avec une bonne sensibilité. Nous avons également eu de bons résultats avec des murs d&#39;autres plants ainsi que certains matériaux du supermarché, comme les feuilles d&#39;épinards jeunes et les tiges de céleri. Fondamentalement, jeune, doux, les tissus végétaux à croissance rapide sont susceptibles...

mesure extension mur cellulaire végétale (creep) induite par un ph acide et par alpha-expansine

Measuring Plant Cell Wall Extension (Creep) Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

Growing parois des cellules végétales présentent une caractéristique propriété connue comme «la croissance d&#39;acide&quot;, par laquelle nous entendons qu&#39;ils sont plus extensibles à pH faible (&lt;5) 1. L&#39;hormone végétale auxine stimule rapidement l&#39;élongation cellulaire dans les jeunes tiges et les tissus similaires au moins en partie par un mécanisme acide-croissance de 2, 3. L&#39;auxine active une pompe à H + dans la membrane plasmique, provoquant l&#39;acidification de la solution de la paroi cellulaire. L&#39;acidification Mur active expansines, qui sont endogènes relâchement de la paroi cellulaire des protéines-4, causant de la paroi cellulaire de céder à des tensions mur créé par la pression de turgescence cellulaire. En conséquence, la cellule commence à élargir rapidement. Ce phénomène de «croissance acide» est facilement mesurable dans les régions isolées (non vivantes) spécimens paroi cellulaire. La capacité des parois cellulaires de se soumettre à l&#39;acide-induced extension n&#39;est pas simplement le résultat de l&#39;agencement structurel des polysaccharides des parois cellulaires (pectines, par exemple), mais dépend de l&#39;activité des expansines 5. Expansines n&#39;ont aucune activité enzymatique connue et la seule façon de dosage de l&#39;activité expansine est de mesurer leur induction de l&#39;extension des parois cellulaires. Ce reportage vidéo détaille les sources et les techniques de préparation pour obtenir des matériaux mur approprié pour les dosages expansine et continue de montrer induite par l&#39;acide extension et expansine induite par l&#39;extension des échantillons préparés à partir d&#39;hypocotyles mur de concombre en pleine croissance. Pour obtenir des échantillons de la paroi cellulaire appropriée, des plants de concombre est cultivé dans l&#39;obscurité, les hypocotyles sont coupés et congelés à -80 ° C. Hypocotyles congelés sont abrasées, aplati, puis serré à une tension constante dans une cuve spéciale pour les mesures extensomètre. Pour mesurer l&#39;extension induite par l&#39;acide, les murs sont d&#39;abord tamponné à pH neutre, résultant en une faible activité de expansines qui sont des composants des parois cellulaires d&#39;origine. Après échange de tampon à pH acide, expansines sont activés et les parois des cellules s&#39;étendent rapidement. Nous démontrons également l&#39;activité expansine dans un essai de reconstitution. Pour cette partie, nous utilisons un traitement thermique pour dénaturer les brèves expansines natif dans les échantillons de la paroi cellulaire. Ces parois cellulaires inactivés ne s&#39;étendent pas, même en tampon acide, mais l&#39;addition de expansines aux parois cellulaires rétablit rapidement leur capacité à étendre.

Nous démontrons l&#39;utilisation d&#39;un extensomètre à force constante pour mesurer extension à long terme (fluage) de spécimens de plantes de la paroi cellulaire induite par les tampons acides et protéines expansine.

Mesure Extension mur cellulaire végétale (Creep) induite par un pH acide et par Alpha-expansine

Les parois cellulaires végétales en croissance présentent caractéristiquement une propriété connue sous le nom de « croissance acide », ce qui signifie qu'elles sont plus extensibles à un pH faible (< 5) 1. Le ...

Ici, nous démontrons des méthodes permettant de mesurer l'expansion et l'activité par la géométrie de la paroi cellulaire. Des échantillons de paroi appropriés peuvent être préparés à partir des hypocotylés de jeunes plants de concombre E TATés afin de mesurer l'allongement induit par l'acide, qui est catalysé par des expansines endogènes liées aux parois cellulaires natives. Nous fixons les parois dans un tampon neutre à l'aide d'un extensomètre ; lors du passage à un pH acide, les expansines sont activées et les parois cellulaires s'allongent rapidement.Nous démontrons également un test de reconstitution de l'expansine. Pour cette partie, nous utilisons un traitement thermique bref afin de dénaturer les expansines endogènes. Les parois cellulaires inactivées par la chaleur ne s'étendent pas, même en présence d'un tampon acide, mais l'ajout rapide d'expansine restaure l'élasticité pariétale.Bonjour, je suis Dan De Roko du laboratoire du Dr Daniel Cosgrove, du département de biologie de l'Université d'État de Pennsylvanie. Aujourd'hui, nous allons vous montrer une procédure permettant de mesurer l'extension irréversible ou le fluage de parois cellulaires végétales isolées. Commençons donc.D'après notre expérience, les jeunes avocats hypo provenant de semis de concombre constituent une source pratique de matériel de paroi cellulaire. Pour ces expériences, les graines de concombre sont semées sur du papier humide dans une boîte opaque à la lumière, que l'on maintient dans un placard sombre et une pièce à température constante réglée à 26 degrés Celsius. Des températures comprises entre 22 et 30 degrés Celsius conviennent également, mais il est important de noter que la température détermine la vitesse de croissance.Plus la température est élevée, plus les semis se développeront rapidement. Il est essentiel de maintenir un environnement de croissance sombre, car même de faibles quantités de lumière affectent à la fois la vitesse de développement des semis et les propriétés de la paroi cellulaire que nous mesurons avec cette technique. Le troisième jour, vous pouvez jeter un coup d'œil dans la boîte à l’aide d’une lumière verte filtrée et atténuée pour vérifier le développement des semis.En général, lorsqu'on ouvre la boîte au troisième ou quatrième jour, on trouve des plantules développées d'environ cinq centimètres de longueur, ce qui correspond habituellement à ce que nous avons utilisé pour nos expériences. Ces plantules peuvent être congelées à moins 80 degrés Celsius avant utilisation. Pour commencer la préparation des échantillons de paroi cellulaire, de petits groupes de huit à dix plantules congelées et coupées sont transférés depuis le congélateur vers un récipient isolant contenant un bloc de congélation à moins 80 degrés Celsius. À l’aide d’une pâte épaisse de poudre de carborundum recouvrant le pouce et l’index, la cuticule recouvrant l’hypocotyle est retirée en séchant répétitivement l’hypocotyle entre le pouce et l’index.Lors de l'exécution de cette technique, il est essentiel d'appliquer la pression adéquate pour assurer la pénétration de la cuticule sans endommager la couche épidermique. Il faut également travailler rapidement, car au fur et à mesure que l'hypo coddle congelé dégèle, il devient mou et difficile à manipuler pour retirer la majeure partie du carum adhérent. L'hypo coddle abrasé est trempé puis conservé dans de l'eau glacée pendant que les autres hypo coddles sont préparés.Après le retrait de la cuticule sur toutes les plantules, celles-ci sont coupées à la longueur souhaitée, généralement 1,2 centimètre, à l’aide d’un nouveau rasoir à lame unique, puis alignées sur une lame de verre après mise en ordre. Une seconde lame de verre est placée au-dessus du groupe de huit à dix échantillons, et un poids de 400 à 500 grammes est disposé sur la lame de verre pendant cinq minutes. Nous utilisons généralement un bécher rempli d’une quantité appropriée d’eau.Le poids du bécher aplatira les parois cellulaires afin d’éliminer la sève cellulaire et de faciliter le serrage. Selon l’expérience, les hypo-coddles peuvent être inactivés par un bref traitement thermique à ce stade. Pour ce faire, nous fixons les lames de verre ensemble à l’aide de deux élastiques, plaçons l’ensemble dans un récipient contenant cent millilitres d’eau déionisée à température ambiante, puis introduisons le tout dans un four à micro-ondes fonctionnant à pleine puissance.L'eau commence à bouillir environ 50 secondes après le début du chauffage, et nous arrêtons le micro-ondes 15 secondes après le début de l'ébullition ; l'eau chaude est alors rapidement versée et remplacée par de l'eau froide afin d'arrêter la dénaturation. Un chauffage optimal fait que les échantillons ne réagissent plus au pH bas, tout en ne devenant ni fragiles ni cassants. Les échantillons de paroi sont désormais fixés dans un extensomètre à force constante X.Il s'agit d'un dispositif sur mesure composé d'un cube en plexiglas destiné à maintenir l'extrémité basale de l'échantillon de paroi et d'une pince mobile fixée à l'extrémité APIC de l'échantillon. La pince mobile est montée à l'extrémité d'une tige qui traverse les spires ouvertes d'un capteur de position, un LVDT (transformateur différentiel linéaire variable), qui détecte électroniquement la position d'un petit cylindre métallique ou noyau fixé à la tige.L'extrémité supérieure de la tige est reliée à un levier muni d'un contrepoids réglable. Ce levier exerce une force ascendante ajustable sur l'échantillon de paroi. La force est ajustée en ajoutant ou en retirant des masses métalliques étalonnées à l'extrémité opposée du levier afin de préparer les échantillons pour la mesure de l'expansion de la paroi cellulaire.L'extrémité basale de l'échantillon de hypo cotto est saisie avec une pince fine, environ deux à trois millimètres de l'extrémité APIC étant placés entre les mâchoires ouvertes du serre-fils mobile. Ce serre-fils est un clip à ressort de type pinces crocodile. Les mâchoires métalliques sont recouvertes de plastique afin d'éviter tout contact direct entre la surface métallique et la solution tampon ou l'échantillon de paroi.D'après notre expérience, des ions métalliques peuvent s'échapper du collier et inhiber la capacité de la paroi à s'étendre ; nous veillons donc à maintenir le métal recouvert. Tenant l'ensemble du collier mobile dans une main, l'extrémité basale de l'échantillon de paroi est maintenant positionnée entre les deux pièces articulées du vete en plexiglas, puis les pièces du vete sont rapprochées et vissées fermement, bloquant ainsi l'extrémité inférieure de l'échantillon de paroi dans le vete. L'ensemble du collier mobile est ensuite relâché délicatement, permettant ainsi le transfert intégral de la force des contrepoids à l'échantillon de paroi. Nous utilisons couramment un contrepoids total de 20 grammes pour les échantillons de paroi préparés à partir de concombre, hypo coddles.D'autres matériaux de paroi ou expériences peuvent nécessiter des poids différents. Le qve est rempli de tampon et la position du QVE est ajustée vers le haut ou vers le bas à l'aide d'une vis de réglage, de sorte que la pince mobile soit amenée à l'extrémité inférieure de la plage de mesure du LVDT. Notre LVDT est relié à une unité d'acquisition de données de l'ordinateur.Nous avons huit ensembles de DTDL connectés en parallèle à un ordinateur, ce qui nous permet de tester huit échantillons de paroi simultanément. L'ordinateur enregistre la position de chacun des ensembles de DTDL une fois toutes les 30 secondes afin de mesurer l'allongement induit par l'acide. Nous commençons avec des échantillons de paroi natifs qui ne sont pas inactivés par la chaleur, et un tampon neutre est ajouté au récipient.Les échantillons de paroi s'étendent pendant quelques minutes en réponse à la tension appliquée, mais l'élongation décroît rapidement vers un taux faible. Après quelques minutes, notre ordinateur nous permet de surveiller soit la variation de longueur de l'échantillon, c'est-à-dire le changement de position du serre-joint mobile après le début de l'expérience, soit la dérivée temporelle de la position. Autrement dit, la vitesse d'élongation.Le taux d'extension se stabilise à une valeur faible au fil du temps. Après environ 20 minutes, le tampon neutre est éliminé à l’aide d’un fin tube métallique provenant d’une aiguille hypodermique de grand calibre, relié à une pompe à vide. Pour éliminer rapidement le tampon.Le dispositif permet de retirer le tampon avec une perturbation minimale de la paroi ou de l'assemblage mécanique. Un tampon acide est ensuite ajouté, parfois accompagné d'un à deux échanges rapides afin de garantir un remplacement complet par le tampon acide. Ensuite, nous observons la réponse de la paroi.Typiquement, nous pouvons détecter la vitesse plus rapide d'extension en quelques minutes. Après 60 minutes, nous disposons généralement de suffisamment d'informations pour évaluer la réponse d'extension, bien que dans certains cas les mesures puissent s'étendre sur des périodes plus longues. Pour la mesure de l'extension de la paroi cellulaire induite par l'expansion, nous commençons par des échantillons de paroi inactivés par la chaleur et nous ajoutons un tampon acide au qve.Comme dans la première expérience, la vitesse d'extension de la paroi cellulaire se stabilise progressivement à une valeur faible en raison du manque d'expansine fonctionnelle. Après environ 20 minutes d'expansion, la protéine est ajoutée au Q vet en ajoutant, par pointe, dans le tampon du Q vet, de 10 à 20 microlitres d'une solution d'expansine. Étant donné que la cuticule a été retirée, l'expansine pénètre rapidement l'échantillon de paroi cellulaire, et en quelques minutes, on observe une augmentation de la vitesse d'extension.Cette réponse d'extension peut être suivie pendant une heure ou plus. Nous venons de vous montrer comment mesurer l'extension de la paroi cellulaire due aux expansines endogènes et à l'ajout d'expansines. Lors de cette procédure, il est important de minimiser les vibrations mécaniques et les fluctuations de température, car elles génèrent du bruit dans les courbes d'extension.Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos essais d'extension.

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Découvrez la mesure de l'extension des parois cellulaires végétales par extensométrie à force constante. Cette méthode évalue l'effet du pH acide et des protéines expansines sur l'extensibilité des parois cellulaires de concombre.

Mesure Extension mur cellulaire végétale (Creep) induite par un pH acide et par Alpha-expansine

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