Name: Génération dune seule cellule suspensions de tissus de souris de neurones (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Découvrez la dissociation de tissu cérébral de souris avec le gentleMACS Dissociator pour obtenir des suspensions unicellulaires viables. Cette méthode préserve les épitopes antigéniques et facilite l'identification cellulaire.

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Pour travailler dans des conditions stériles, il est recommandé d'effectuer toutes les étapes d'une hotte à flux laminaire. 1. Matériaux <ul><li> Neural Tissue Kit de dissociation (P) (Composants: Solution 1,2, 3 et 4, de stockage tampon) </li><li> Pré-Séparation Filtres </li><li> (Facultatif) Perles de suppression myéline </li><li> Les bêta-mercaptoéthanol </li><li> gentleMACS dissociateur </li><li> C Tubes </li><li> Rotator Tube MACSmix </li><li> HBSS (w / o) </li><li> HBSS (w) </li></ul><ol><li> Préparer les solutions suivantes avant de commencer le protocole: <ol><li> Hanks solution saline tamponnée sans cations divalents Ca 2 + ou Mg 2 + (HBSS (w / o) </li><li> HBSS, standard, c'est à dire avec Ca 2 + et Mg 2 + (HBSS (w) </li></ol></li><li> Selon l'épitope d'antigène d'intérêt dans les applications ultérieures, utilisez soit la papaïne à base de tissus neuronaux dissociation Kit (P) ou de la trypsine à base de tissus neuronaux dissociation Kit (T). </li><li> Préparer les solutions suivantes de la dissociation des tissus neuronaux du kit: <ol><li> Solution 2: ajouter des bêta-mercaptoéthanol à 0,067 mM </li><li> Solution 4: dissoudre la poudre dans 0,7 ml de tampon de stockage (fourni dans le kit), mélanger délicatement (ne pas vortexer) </li><li> Mélanger une enzyme: Pipeter 1,9 ml de solution 2 et 50 ul de solution 1 (tous deux de kit) dans un tube C et incuber pendant 10-15 min à 37 ° C. Cela est suffisant pour dissocier de 400 mg de tissu cérébral. </li></ol></li></ol> 2. Dissociant le tissu neural <ol><li> Peser le tissu cérébral dans un tube contenant 1 ml de HBSS (w / o) </li><li> Transfert cerveau de souris dans le tube C contenant 1950 ul de mélange enzymatique préchauffé 1. (REMARQUE: ce protocole est rédigé pour ≤ 400 mg, mais les volumes de solution peut être adaptée pour accueillir jusqu'à 1600 mg de tissu cérébral par Tube C) </li><li> Placer le tube C sur le dissociateur gentleMACS et exécutez le programme "m_brain_01". </li><li> Incuber avec rotation (4 min en utilisant un tube Rotator MACSmix) pendant 15 min à 37 ° C. </li><li> Placer le tube C sur le dissociateur gentleMACS et exécutez le programme "m_brain_02". </li><li> Pendant l'étape de dissociation de préparer 30 pi de 2 Mix enzyme par 400 mg de tissu par un léger mélange de 20 ul de la solution 3 et 10 ul de la solution 4. </li><li> Ajouter 2 mélange enzymatique du métro C via le septum scellé bouchon et mélanger doucement sans vortex. </li><li> Incuber le tube C avec rotation pendant 10 min à 37 ° C dans un incubateur. </li><li> Placer le tube C sur le dissociateur gentleMACS et exécutez le programme "m_brain_03". </li><li> Incuber le tube C avec rotation pendant 10 min à 37 ° C dans un incubateur. </li><li> Centrifuger brièvement pour prélever l'échantillon au fond du tube. </li></ol> 3. Filtration <ol><li> Sélectionner un assez grand filtre pour permettre le passage vers les cellules d'intérêt. Par exemple, les cellules de Purkinje sont trop grands pour passer à travers un filtre de 30 um, mais Prominin-1 + cellules. </li><li> Utiliser une pipette suitable1000 ul pour éliminer les cellules forment le tube C à travers le septum scellé bouchon et l'appliquer à la pré-filtre de séparation sur un tube de prélèvement de 15 ml. (REMARQUE: pour des échantillons plus importants d'utiliser un tube de prélèvement de 50 ml). </li><li> Laver le filtre avec 10 ml de HBSS (w). </li><li> Centrifuger les cellules filtrées à 300 xg pendant 10 min à température ambiante. </li><li> Reprendre le surnageant dans votre moyenne ou tampon de choix pour les applications ultérieures. </li><li> Pour enlever les débris de myéline, l'utilisation Perles de suppression de myéline. </li></ol> 4. Résultat Représentant: S'il vous plaît voir Figures 1-3 <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="La figure 1"> Figure. 1 La dissociation du cerveau avec la dissociateur gentleMACS abouti à 97% de cellules viables, comme le montre l'analyse des flux de cytométrie. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="La figure 2"> Figure. 2 photo Microscope optique de la formation Neurosphère après tri cellulaire magnétique en utilisant Anti-Prominin-1 microbilles après 7 jours de culture dans MACS ® NeuroMedium complétée par MACS supplément B27 PLUS. Les cellules ont été préparées à partir de cerveau de souris CD1 (P3) en utilisant le tissu neural dissociation Kit (P). <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="figure 3.5"> Figure. 3 débris de myéline dans une seule cellule suspensions altère considérablement l'isolement cellulaire, et l'enlèvement des débris de myéline par les perles de suppression myéline accroît les séparations de cellules d'efficacité. Pour les séparations MACS utilisant Anti-Prominin-1 microbilles, P22 cerveau de souris a été dissociée en utilisant les tissus neuronaux dissociation Kit (P). Les cellules de la suspension à cellule unique ont été soit directement utilisé pour la séparation, ou ont été soumis à la myéline déplétion en utilisant des perles de suppression de myéline. En comparant la séparation à partir d'échantillons avec et sans suppression de la myéline, démontre que la pureté est supérieure pour les échantillons avec l'enlèvement de myéline précédente.

<ol><li>Hardt, O., Scholz, C., Küsters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li>
<li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Környei, Z., Gócza, E., Rühl, R., Orsolits, B., Vörös, E., Szabó, B., Vágovits, B., Madarász, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li>
<li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li>
<li>Skog, J., Würdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T. Jr, Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs sont des employés de Miltenyi Biotec GmbH, Allemagne.

Le dissociateur gentleMACS facilite la préparation standardisée des suspensions unicellulaires à partir des tissus neuraux dans un système fermé. Neural Tissue Kits de dissociation sont optimisés pour préserver épitopes antigène nécessaire pour d&#39;autres applications comme les immunomarquages ​​et la séparation des cellules immuno 1-5. Dans ce protocole, nous montrons la dissociation enzymatique doux de cerveau de souris en utilisant les dissociateur gentleMACS et le tissu neural dissociation Kit (P), ce qui donne dans 97% des cellules viables. 100 mg de tissu neural entre les rendements 5x10 et 1x10 6 7 cellules, en fonction de l&#39;âge du tissu hôte. La cible Prominin-1 + cellules ont été isolées à l&#39;aide anti-Prominin-1 microbilles et ensuite repris dans la culture. Le protocole est indiqué pour être encore plus efficace avec l&#39;utilisation additionnelle de perles de suppression myéline quand on travaille avec les tissus nerveux provenant de souris&gt; P7.

<table><tbody><tr><td>C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Kit de démarrage</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotex.com/fr/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Rotateur de tubes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Kit de dissociation des tissus nerveux (P)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-092-628</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Filtres préalables à la séparation</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Microbilles anti-Prominine-1</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-092-333</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominine-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-092-335</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Billes de suppression de la myéline</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-094-544</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Pointes de pipette Art 1000 Reach </td><td>Molecular BioProducts</td><td>N° de commande 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Kit de dissociation des tissus nerveux (T)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-093-231</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Solution d'iodure de propidium</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N° de commande 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/fr/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

génération d&#39;une seule cellule suspensions de tissus de souris de neurones

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Dans le système nerveux, des centaines de types de cellules neuronales et gliales ont été décrits. Chaque type de cellule spécifique dans le cerveau ou la moelle épinière a un répertoire de molécules de surface cellulaire, ou déterminants moléculaires, grâce auquel il peut être identifiée et caractérisée. Actuellement, l&#39;identification de cellules robustes et les technologies de séparation nécessitent une seule cellule préparations destinées à être produites tout en limitant la mort cellulaire et la destruction des protéines de surface caractéristique. Le dissociateur gentleMACS, lorsqu&#39;il est utilisé en combinaison avec la trypsine ou la papaïne basé kits de dissociation, peut efficacement et en douceur dissocient le tissu cérébral, tout en préservant épitopes d&#39;antigènes et de limiter la perte de cellules. Préparation standardisée des suspensions unicellulaires est réalisé en utilisant les tubes C et optimisées, prédéfinies Programmes gentleMACS. Une fois produite, une seule cellule suspensions peuvent être traitées avec des conjugués monoclonaux comme anti-Prominin-1 microbilles, qui identifient les progéniteurs neuronaux, ou encore purifiée en utilisant des perles de suppression de myéline.

Dissocier les cellules de différents types de tissus spécifiques requiert des paramètres spécifiques pour aggitation tissus pour obtenir un volume élevé de viabilité, de cellules cultivables. Le Miltenyi gentleMACS dissociateur optimise cette tâche avec un simple, protocole pratique. Dans cette publication, l&#39;utilisation de cet appareil sur le tissu nerual est expliqué.

Génération d&#39;une seule cellule suspensions de tissus de souris de neurones

Au sein du système nerveux, des centaines de types de cellules neuronales et gliales ont été décrits. Chaque type cellulaire spécifique du cerveau ou de la moelle épinière possède un...

Dans le système nerveux, des centaines de types cellulaires neuronaux et gliaux ont été décrits. Chaque type cellulaire spécifique du cerveau ou de la moelle épinière possède un répertoire de molécules de surface ou de déterminants moléculaires au moyen desquels il peut être identifié et caractérisé.Actuellement, les technologies robustes d'identification et de séparation des cellules nécessitent la préparation de cellules individuelles tout en limitant simultanément la mort cellulaire et la destruction des protéines de surface caractéristiques. Le dissociateur gentle max, lorsqu'il est utilisé en combinaison avec des kits de dissociation à base de trypsine ou de papaine, permet de dissocier efficacement et délicatement le tissu cérébral tout en préservant les épitopes antigéniques et en minimisant la perte cellulaire. Une fois obtenues, les suspensions uniques de cellules peuvent être traitées avec des conjugués monoclonaux tels que les microbilles anti-prominent one, qui identifient les cellules souches neuronales, ou purifiées davantage à l'aide de microbilles d'élimination de la myéline.Bonjour, je m'appelle Sandra PeNAT. Je suis chargée de projet pour les produits en neurosciences chez Mil Biotech, ici à Bagge Gabert, en Allemagne. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment préparer une suspension de cellules individuelles à partir de tissu cérébral de souris en utilisant le dissociateur Genix.Le dissociateur Genix Dis est un dispositif capable de dissocier divers types de tissus dans un environnement stérile fermé, éliminant ainsi la nécessité d'une dissociation mécanique manuelle fastidieuse. Commençons donc. Selon l'épitope antigénique d'intérêt dans les applications ultérieures, utilisez soit le kit de dissociation de tissu nerveux à base de papaine, soit le kit de dissociation de tissu nerveux à base de trypsine.Pour l'expérience d'aujourd'hui, nous préférons le kit de dissociation des tissus nerveux P, car nous souhaitons isoler des cellules positives marquées à l'aide de microbilles anti-prominent one. La protéine prominent one n'est ni sensible à la pépané ni à la trypsine, et dans un tel cas, le kit de dissociation des tissus nerveux P constitue le meilleur choix. Avant de commencer le protocole, les réactifs et solutions doivent être préparés pour ce kit.Ayez à portée de main votre propre stock de solution saline équilibrée de Hank (HBSS) sans ions calcium et ions magnésium, ainsi que de la HBSS contenant des ions calcium et magnésium, et du bêta-mécaptoéthanol. Commencez par préparer la solution deux, la solution quatre, puis le mélange enzymatique un. Ajoutez d’abord du bêta-mécaptoéthanol à la solution deux pour obtenir une concentration finale de 0,067 millimolaire.La solution est désormais stable pendant jusqu'à un mois lorsqu'elle est conservée à quatre degrés Celsius. Ensuite, dissolvez la poudre lyophilisée et une solution étiquetée quatre. En utilisant 0,7 millilitre de tampon de stockage, mélangez délicatement sans vortexer.Préparez maintenant le mélange enzymatique un en pipetant 1900 microlitres de la solution deux et 50 microlitres de la solution un dans un tube C. Cette quantité de solution suffit pour dissocier 400 milligrammes de tissu ; par conséquent, si un volume supérieur doit être dissocié, préparez un mélange enzymatique un supplémentaire. Un maximum de 1600 milligrammes de tissu cérébral peut être traité dans un tube C.Le mélange enzymatique un dans le tube C est ensuite incubé à 37 degrés Celsius pendant 10 à 15 minutes. Pour commencer la dissociation, pipeter un millilitre de HBSS sans ions calcium et magnésium dans le tube. Placer le tube sur une balance, ajouter le tissu cérébral et enregistrer sa masse.Ce cerveau de souris P4 pèse environ 0,2 gramme. Un cerveau adulte pèserait environ 0,4 gramme pour tous les échantillons de tissu inférieurs à 400 milligrammes. Les volumes de solution que nous utiliserons aujourd'hui sont suffisants.Si votre tissu pèse plus de 400 milligrammes, augmentez proportionnellement tous les volumes de réactifs ; jusqu'à 1600 milligrammes de tissu peuvent être traités dans un seul tube C. Transférez le cerveau de souris dans le tube C préparé contenant 1 950 microlitres d'enzyme préchauffée. Mélangez une fois et fermez hermétiquement le bouchon.Maintenant, placez le tube C sur l'associateur Gen Max, bouchon vers le bas, et assurez-vous que le tissu se trouve dans la zone du stator. Sélectionnez le programme MCO brain O un et lancez le programme. C'est le premier des trois programmes que vous exécuterez lors de la dissociation ; exécutez-le jusqu'à la fin.Retirer le tube C et incuber l'échantillon pendant 15 minutes à 37 degrés Celsius sous rotation lente et continue. À l'aide du rotateur de tube max mix, le mode de fonctionnement de l'appareil correspond à quatre tr/min. Après la première incubation, remettre le tube sur le dispositif de dissociation à l'envers et exécuter le programme M brain O2. Pendant l'association suivante, préparer 30 microlitres de mélange enzymatique deux par 400 milligrammes de tissu en ajoutant 20 microlitres de solution trois à 10 microlitres de solution quatre.Lorsque le deuxième cycle d'association est terminé, ajoutez 30 microlitres du mélange enzymatique deux dans le tube C directement à travers l'ouverture scellée par un septum située au centre du bouchon. Pour garantir la stérilité, retournez délicatement le tube C afin de mélanger, sans utiliser le vortex. Replacez ensuite le tube C sur le rotateur de tubes max mix et incubez l'échantillon pendant 10 minutes à 37 degrés Celsius avec un mélange à quatre tours par minute.Ensuite, le CTU est replacé sur l'extracteur doux max pour la troisième et dernière fois, et le programme M brain oh three est exécuté. Une fois le troisième programme terminé, placez les tubes C sur le rotateur et incubez-les encore 10 minutes à 37 degrés Celsius. Centrifugez maintenant brièvement l'échantillon pour rassembler les cellules au fond du tube.Nous sommes maintenant prêts à filtrer les cellules. Choisissez un tamis cellulaire en fonction de la taille de votre type cellulaire d'intérêt. Si les cellules que vous souhaitez recueillir ont un diamètre supérieur à 30 micromètres, comme les cellules kinji, la taille des pores doit être suffisamment grande pour laisser passer les corps cellulaires de ce diamètre.Pour les cellules positives marquées, un filtre de 30 micromètres conviendra. Retirer le tissu dissocié du tube C à l’aide de pointes de pipette de 1000 microlitres adaptées à l’ouverture scellée par septum du bouchon du tube C. Appliquer la suspension cellulaire sur le filtre de préséparation placé sur un tube de collecte de 15 millilitres.Pour des échantillons de plus grande taille, un tube de 50 millilitres peut être nécessaire. Laisser la suspension cellulaire passer à travers le filtre. Ensuite, laver le filtre en ajoutant 10 millilitres de solution HBSS contenant des ions calcium et magnésium.Lorsque vous travaillez avec des quantités de tissu supérieures à 400 milligrammes, utilisez jusqu'à 30 millilitres de HBSS contenant des ions calcium et magnésium pour le lavage du filtre. Ensuite, faites précipiter les cellules dans le tube de collecte par centrifugation à 300 G pendant 10 minutes à température ambiante, aspirez complètement le surnageant et resuspendez le culot cellulaire dans le tampon ou le milieu de votre choix. À ce stade, vous pouvez choisir d'éliminer tous les débris de myéline, car ceux-ci peuvent compromettre l'isolement des cellules et la coloration par anticorps.Pour éliminer les débris de myéline, nous recommandons l'utilisation de billes de suppression de la myéline. Sinon, les cellules sont prêtes pour des applications ultérieures. Ce diagramme en points basé sur la coloration par l'iodure de propidium indique que 97 % des cellules présentes dans une suspension de cellules uniques provenant d'une souris domestique souffrant d'une entorse, comme la suspension générée dans cette vidéo, sont viables.Ces cellules peuvent être davantage purifiées à l’aide de microbilles anti-prominent pour obtenir des progéniteurs neuronaux, qui, lorsqu’ils sont cultivés dans un milieu max neuro enrichi avec B 27 plus, peuvent former des neurosphères dans ces diagrammes en points. L’avantage du traitement des suspensions avec les microbilles de retrait de la myéline est observé. Un pourcentage significativement plus élevé de progéniteurs neuronaux exprimant prominent un est obtenu par séparation max après appauvrissement de la myéline à partir d’une suspension monocellulaire.J'ai vient de vous montrer comment préparer une suspension de cellules uniques à partir de tissu cérébral de souris en utilisant la dissociation Genix et le kit de dissociation de tissu neural. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de préparer correctement toutes les solutions en fonction du choix approprié du kit de dissociation de tissu neural, T ou P. Veuillez consulter la note d'application ou la fiche technique du NDK. Grâce à cette méthode, des sections de tissu embryonnaires ainsi que des sections D ou des cerveaux entiers peuvent être traités dans des conditions stériles, de manière standardisée et en économisant du temps.Merci d'avoir regardé et bonne chance pour vos expériences.

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