Name: Création dexpérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec lélastase (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-23T18:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 23 s
Description: Apprenez à créer des anévrismes de l'aorte abdominale chez la souris en utilisant l'élastase pancréatique porcine. Cette méthode chirurgicale permet d'étudier la pathobiologie vasculaire et les mécanismes moléculaires impliqués dans cette maladie.

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Ce travail a été soutenu la subvention SCCOR &quot;Maladie AAA: Mécanismes, la stratification et de traitement» (P50 HL083800-03) de la National Institutes of Health

<ol><li> Les souris sont anesthésiées avec inhalation d&#39;isoflurane de 2,0 3.0ml / L. </li><li> L&#39;abdomen est rasée et nettoyée avec de l&#39;alcool et de la bétadine. </li><li> La souris est placé en décubitus dorsal sur le champ opératoire. </li><li> Des gants stériles sont portés par le chirurgien, et les instruments utilisés ont été stérilisés avec stérilisateur à billes chaud. </li><li> Une longue incision médiane abdominale est faite. Contenu abdominal sont rentrés en dehors de l&#39;abdomen avec une gaze stérile afin d&#39;exposer l&#39;aorte abdominale. </li><li> L&#39;aorte abdominale est isolée du niveau de la veine rénale gauche à la bifurcation. </li><li> Les branches de l&#39;aorte abdominale sont exposés et ligaturé avec 10-0 points de suture. Toutes les branches aortiques au sein de 1.0cm de la bifurcation sont ligaturées. </li><li> Temporaire 6,0 ligatures de soie sont placés autour des portions proximales et distales de l&#39;aorte </li><li> Un aortotomie est créé à la bifurcation avec une aiguille de calibre 30. </li><li> Des tuyaux en polyéthylène Chaleur-coniques (PE-10) est introduit par l&#39;aortotomie et sécurisé avec une cravate. </li><li> En utilisant une poche de solution saline accroché à la hauteur de 136 cm à 100 mmHg calibrer, l&#39;aorte est rempli avec la solution saline contenant 4,5 U / ml de type I pancréatiques élastase porcine. L&#39;aorte se dilate généralement à 150-170% de son diamètre initial pendant la perfusion d&#39;élastase 5-15 minutes. </li><li> Le cathéter de perfusion est ensuite retiré et l&#39;aortotomie fermée par une suture 10-0 pour éviter la constriction. </li><li> Après la aortotomie est fermé, la ligature distale est retiré. </li><li> S&#39;il ya peu ou pas de saignements de l&#39;aortotomie réparé, la ligature proximale est retirée. L&#39;aorte élargie se remplit de sang immédiatement. </li><li> Les intestins sont retournés à l&#39;abdomen, et la plaie est fermée en deux couches avec Nylon 6-0 / polypropylène de suture. </li><li> 0,25% Bupivicaime gouttes (Appx une goutte pour chaque centimètre de la taille de l&#39;incision) sont placés sur la plaie et une dose de Caprofen (5mg/kg) est donnée en sous-cutané. </li><li> La souris est placée sur un endroit chaud et récupère normalement dans les 15 minutes. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1280/fig1280.png" alt="Figure 1" /> Figure 1. Résultat représentatif de l&#39;élastase induit AAA.

<ol><li>Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).</li>
<li>Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).</li>
<li>Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase+is+not+sufficient+to+induce+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

Des études antérieures ont noté significative lot à lot de variation dans le développement AAA de différentes préparations commerciales élastase 3. Ainsi, il est essentiel de surveiller des lots de production ainsi que d&#39;avoir des groupes de contrôle appropriées afin de documenter la capacité de la préparation d&#39;induire AAA. Fait intéressant, la susceptibilité au développement AAA dans ce modèle dépend de la souche de souris utilisée 3. Les souris utilisées dans...

<table><tbody><tr><td>Élastase pancréatique porcine de type I</td><td>Réactif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250</td><td></td></tr><tr><td>tuyau en polyéthylène (PE-10)</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>427400</td><td></td></tr><tr><td>CHANGE-A-TIP</td><td></td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>18010-00 (FST)</td><td>lame électrochirurgicale</td></tr><tr><td>LEICA MZ6</td><td></td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>stéréomicroscope</td></tr><tr><td>LEICA DFC290HD</td><td></td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>caméra USB</td></tr><tr><td>Image Pro Express ver. 6.0</td><td></td><td>Media Cybernetics Inc.</td><td></td><td>logiciel</td></tr></tbody></table>

création d&#39;expérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec l&#39;élastase

Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase 

Transient perfusion intraluminale de l&#39;élastase pancréatique porcine dans le segment sous-rénal de l&#39;aorte abdominale est le modèle animal le plus largement utilisé des anévrismes de l&#39;aorte abdominale (AAA) depuis qu&#39;elle a été décrite pour la première chez le rat par Anidjar et ses collègues 1. La justification de son développement a été basée sur la nature perturbée de l&#39;élastine observée en AAA. Ce modèle de rat a été modifié pour produire AAA dans la région de l&#39;aorte de souris. 2 Le modèle a la possibilité d&#39;ajouter un aperçu général sur la pathobiologie de AAA en raison de l&#39;émergence de nombreuses transgéniques et des souris knockout du gène. Par ailleurs, il est une plateforme viable pour tester des agents thérapeutiques potentiels pour AAA. Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure perfusion d&#39;élastase AAA utilisées dans notre laboratoire. Les souris sont anesthésiées à l&#39;aide de 2,5% d&#39;isoflurane, et une laparotomie est effectuée dans des conditions stériles. Le aortais abdominale isolée avec l&#39;aide d&#39;une loupe binoculaire d&#39;exploitation (Leica). Après avoir placé des ligatures temporaires autour de l&#39;aorte proximale et distale, une aortotomie est créé à la bifurcation avec la pointe d&#39;une aiguille de calibre 30. Un segment de la chaleur conique de tube PE-10 en polyéthylène est introduit par l&#39;aortotomie et sécurisé. La lumière aortique est ensuite perfusé pendant 5-15 minutes à 100 mm Hg avec le type de contenant une solution saline, je l&#39;élastase pancréatique porcine (4,5 U / ml; Sigma Chemical Co.). Après avoir retiré le cathéter de perfusion, la aortotomie est réparé sans constriction de la lumière.

Cette vidéo montre comment provoquer un anévrisme aortique abdominal (AAA) chez des souris par perfusion intraluminale transitoires de l&#39;élastase pancréatique porcine dans le segment sous-rénal de l&#39;aorte abdominale. Le modèle a la possibilité d&#39;ajouter bon aperçu du pathobiologie de AAA en raison de l&#39;émergence des cultures transgéniques et des souris knockout de nombreux gènes.

Création d&#39;expérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec l&#39;élastase

L'infusion intraluminale transitoire d'élastase pancréatique porcine dans le segment infra-rénal de l'aorte abdominale est le modèle animal le plus largement utilisé pour...

Cette intervention chirurgicale utilisée pour créer un anévrisme de l'aorte abdominale commence par une incision abdominale médiane. Le contenu abdominal est déplacé sur le côté et toutes les branches de l'aorte sont ligaturées. Les portions proximale et distale de l'aorte sont fermées par ligature.Le cœur est perforé avec une aiguille et une perfusion d'élastase est administrée à travers un tube en polyéthylène effilé à chaud. Une fois la perfusion terminée, l'autotomie de l'aorte est refermée. Les ligatures sont retirées, l'aorte se remplit de sang et la cavité abdominale est fermée.On laisse ensuite la souris se remettre, et l'anévrisme sera complètement dilaté en 14 jours. Bonjour, je suis Julian Asma du laboratoire de biologie fœtale du Département de médecine cardiovasculaire de l'Université de Stanford. Aujourd'hui, je vais vous montrer la procédure d'injection d'une nouvelle anévrisme expérimentale de l'aorte abdominale avec de l'élastase.Nous utilisons cette procédure dans votre laboratoire pour étudier les EP de l'artère abdominale S.So. Commençons. Pour démarrer vos expériences, sélectionnez une souris d'intérêt, par exemple une souris C57 black six, et anesthésiez-la av

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Biology

Biologie

Modifications histologiques et biochimiques après anévrisme exclusion d'endoprothèse sont encore mal connues. Nous décrivons un nouveau modèle d'implantation d'une endoprothèse anévrisme murin. Grâce à l'analyse thrombus avec et sans circulation persistante interface de flux sanguin, et nouvelle évaluation des biomatériaux endovasculaire, ce modèle permettra de mieux comprendre endovasculaire anévrisme exclusion pathobiology.

Un nouveau modèle murin de endovasculaire anévrisme de l&#39;aorte réparation

Nous décrivons un protocole chirurgical pour induire uniformément les aneurysms aortiques thoraciques descendants robustes chez les souris. La procédure implique la thoracotomie gauche, l'exposition à l'aorte thoracique, et le placement d'une éponge imbibée d'élastase pancréatique porcine sur la paroi aortique.

Modèle chirurgical murine de l'élastase topique induit descendant l'aneurysm aortique thoracique

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale normalisée pour le modèle AAA induit par l’élastase par l’application directe d’élastase à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Ce manuscrit présente un protocole permettant d’établir un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris à l’aide de chlorure de calcium et d’élastase, combinant les avantages des méthodes de modélisation précédentes. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les mécanismes physiopathologiques sous-jacents aux anévrismes de l’aorte abdominale.

Un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par infiltration péri-adventice de chlorure de calcium et d’élastase

Ce protocole décrit une approche chirurgicale méthodique pour modéliser les anévrismes avancés de l’aorte abdominale chez la souris en combinant l’application directe d’élastase sur l’aorte infrarénale et l’administration de ß-aminopropionitrile dans l’eau de boisson.

Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale standardisée pour l’induction d’anévrismes carotidiens dans un modèle murin par une seule opération chirurgicale.

Un modèle murin de la formation d’un anévrisme carotidien

Ce protocole fournit une méthode reproductible et fiable pour induire des anévrismes de l’aorte abdominale (AAA) chez des souris C57BL/6 en utilisant la sensibilisation à l’elastine et l’application d’élastase périvasculaire, en tant que modèle AAA incorporant une composante immunosensibilisation.

Création fiable d’un modèle d’anévrisme aortique abdominal murien utilisant la sensibilisation à l’élastine et l’élastase périvasculaire

L'angiogenèse, la germination des vaisseaux sanguins préexistants vasculaire, est associée à des processus naturels et pathologiques. Ici nous démontrons un test anneau aortique qui permet potentialisateurs angiogéniques et inhibiteurs d'être directement ajoutés à anneaux aortiques dans la culture. La germination et l'excroissance neovessel peut être déterminé en examinant les anneaux aortiques sur une période de 6-12 jours.

Assay anneau aortique

Constriction aortique transverse (TAC) chez la souris est un modèle couramment utilisé expérimental pour étudier les mécanismes qui sous-tendent l'hypertrophie cardiaque et le développement d'insuffisance cardiaque. Ici, nous décrivons les procédures de la constriction de l'aorte afin de créer un diplôme reproductible de l'hypertrophie cardiaque chez la souris.

Constriction aortique transverse chez la souris

Targeted-estérase induite colorant chargement (TED) appuie l'analyse de la dynamique intracellulaire des magasins de calcium par imagerie de fluorescence. La méthode se fonde sur le ciblage d'une carboxylestérase recombinant pour le réticulum endoplasmique (RE), où il améliore le démasquage locale de synthétique de faible affinité...

Imagerie directe du calcium ER avec Targeted-estérase colorant induit Chargement (TED)

Apprenez à créer des anévrismes de l'aorte abdominale chez la souris en utilisant l'élastase pancréatique porcine. Cette méthode chirurgicale permet d'étudier la pathobiologie vasculaire et les mécanismes moléculaires impliqués dans cette maladie.

Création d'expérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec l'élastase

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