Name: Génération embryons de poissons zèbres chimériques par transplantation (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-17T16:04:00.000+00:00
Duration: 21 min 1 s
Description: Découvrez la génération d'embryons chimériques chez le poisson zèbre par transplantation aux stades blastula et gastrula. Cette méthode permet d'étudier les fonctions cellulaires des gènes et leurs interactions pendant le développement.

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Merci aux membres du laboratoire pour l&#39;entrée Moens utiles lors de la rédaction de cet article. HK est stagiaire post-doctoral soutenu par le NIH / NICHD octroi # 5R01HD037909-08. CBM est un enquêteur de la Howard Hughes Medical Institute.

<ol><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%22">The Zebrafish Book</a>. , 3rd Ed, University of Oregon Press. Eugene, Oregon. (2000).</li>
<li>Kimmel, C. B., Warga, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+and+developmental+potential+of+cells+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Cell lineage and developmental potential of cells in the zebrafish embryo.</a> Trends Genet. 4, 68-74 (1988).</li>
<li>Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+organization+of+the+zebrafish+fate+map%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Origin and organization of the zebrafish fate map.</a> Development. 108, 581-594 (1990).</li>
<li>Woo, K., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Order+and+coherence+in+the+fate+map+of+the+zebrafish+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Order and coherence in the fate map of the zebrafish nervous system.</a> Development. 121, 2595-2609 (1995).</li>
<li>Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primordial+germ-cell+development%3A+the+zebrafish+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Primordial germ-cell development: the zebrafish perspective.</a> Nat Rev Genet. 4, 690-700 (2003).</li>
<li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124, 3157-3165 (1997).</li>
<li>Koprunner, M., Thisse, C., Thisse, B., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zebrafish+nanos-related+gene+is+essential+for+the+development+of+primordial+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A zebrafish nanos-related gene is essential for the development of primordial germ cells.</a> Genes Dev. 15 (21), 2877-2885 (2001).</li>
<li>Weidinger, G., Wolke, U., Koprunner, M., Klinger, M., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+tissues+and+patterning+events+required+for+distinct+steps+in+early+migration+of+zebrafish+primordial+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Identification of tissues and patterning events required for distinct steps in early migration of zebrafish primordial germ cells.</a> Development. 126 (23), 5295-5307 (1999).</li>
<li>Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+zebrafish+primordial+germ+cell+migration+by+attraction+towards+an+intermediate+target%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulation of zebrafish primordial germ cell migration by attraction towards an intermediate target.</a> Development. 129 (1), 25-36 (2002).</li>
<li>Ciruna, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+maternal-zygotic+mutant+zebrafish+by+germ-line+replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Production of maternal-zygotic mutant zebrafish by germ-line replacement.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 14919-14924 (2002).</li>
<li>Waskiewicz, A. J., Rikhof, H. A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliminating+zebrafish+pbx+proteins+reveals+a+hindbrain+ground+state%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Eliminating zebrafish pbx proteins reveals a hindbrain ground state.</a> Dev Cell. 3, 723-733 (2002).</li>
<li>Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((dead+end%2C+a+novel+vertebrate+germ+plasm+component%2C+is+required+for+zebrafish+primordial+germ+cell+migration+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">dead end, a novel vertebrate germ plasm component, is required for zebrafish primordial germ cell migration and survival.</a> Curr Biol. 13, 1429-1434 (2003).</li>
<li>Blaser, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li>
</ol>

La facilité avec laquelle la transplantation peuvent être utilisées pour produire des chimères ciblé est l&#39;une des grandes puissances du poisson zèbre comme modèle vertébré. Une modification de ce protocole n&#39;est pas décrit ci-dessus permet d&#39;analyser la fonction des gènes maternels pour les gènes ayant un rôle essentiel dans le développement zygotique. Comme ces poissons mutants ne peuvent pas survivre jusqu&#39;à l&#39;âge adulte, il est nécessaire de transférer la lignée germinale dans un embryon mutant c...

Réactifs: Recettes pour la plupart des réactifs utilisés pour ces procédures sont disponibles dans le livre de poisson zèbre, qui est disponible en ligne complet à <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html">http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html</a> . Les recettes sont fournies il ya pour la préparation des poissons d&#39;eau moyen d&#39;embryon avec et sans antibiotiques, la pronase pour dechorionating, dextranes fluorescents, et de la cellulose de méthyle.

génération embryons de poissons zèbres chimériques par transplantation

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Un des outils les plus puissants utilisés pour mieux comprendre les processus complexes de développement est l&#39;analyse des embryons chimériques. Une chimère est définie comme un organisme qui contient des cellules de plus d&#39;un animal; mosaïques sont un type de chimère dans laquelle les cellules de plus d&#39;un génotype sont mixtes, généralement de type sauvage et mutant. Dans le poisson zèbre, les chimères peuvent être facilement réalisés par transplantation de cellules d&#39;un embryon donateurs dans un embryon hôte au stade approprié embryonnaire. Les cellules du donneur sont étiquetés produites par injection d&#39;un marqueur de la lignée, comme un colorant fluorescent, dans l&#39;embryon au stade d&#39;une cellule. Les cellules du donneur sont étiquetés prélevées sur des embryons donateurs et introduit dans des embryons hôtes non étiquetés en utilisant une huile à commande pipette en verre montée sur un composé ou soit microscope à dissection. Les cellules donneuses peuvent dans certains cas, être ciblés sur une région spécifique ou un tissu de l&#39;embryon en développement stade blastula ou gastrula d&#39;hôte en choisissant un site de transplantation de l&#39;embryon hôte basées sur des cartes sort bien établi.

Un guide étape par étape pour générer ciblées embryons de poissons zèbres chimérique par transplantation au stade blastula ou de gastrula.

Génération embryons de poissons zèbres chimériques par transplantation

L'un des outils les plus puissants utilisés pour mieux comprendre les processus développementaux complexes est l'analyse d'embryons chimériques. Une chimère est définie comme un...

Bonjour, je suis Hillary Kemp du laboratoire de Cecilia Owens. Et je suis Cecilia Owens. Hillary et moi travaillons au sein de la division des sciences fondamentales du Fred Hutchinson Cancer Research Center à Seattle.Aujourd'hui, nous allons vous présenter une technique permettant de produire des embryons de poisson zèbre chimériques, également appelés mosaïques génétiques. Cette procédure nous permet d'évaluer la base cellulaire de la fonction des gènes au cours du développement. Nous pouvons déterminer si un gène donné exerce sa fonction au sein des cellules présentant un phénotype mutant, ce qu'on appelle une fonction autonome pour la cellule, ou bien dans l'environnement de ces cellules, ce qu'on appelle une fonction non autonome pour la cellule.Nous réalisons ces mosaïques en transplantant des cellules entre des embryons de type sauvage et des embryons mutants, soit au stade de blastula, soit au stade gastrulaire précoce. Nous évaluons ensuite la fonction des gènes en observant le phénotype et le génotype des cellules issues du donneur dans leur environnement hôte. Commençons donc.Dans cette partie du protocole, un colorant de lignée est injecté dans l'embryon donneur afin de

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Zebrafish transplantation de cellules permet la combinaison de la génétique et l'embryologie de générer des chimères tissulaires spécifiques. Cette vidéo montre gastrula scène transplantations de cellules qui ont permis à notre laboratoire pour étudier les rôles des populations astrogliales et les indices des directives précises lors de la formation commissure dans le prosencéphale.

Tissu ciblé chimères embryonnaires: Zebrafish cellulaire Gastrula transplantation

Nous démontrons un protocole visant à générer des embryons de poissons zèbres chimérique pour l'imagerie cellulaire comportements direct durant l'embryogenèse.

La transplantation de blastomères exprimant la GFP pour l&#39;imagerie en direct sur le développement de la rétine et du cerveau dans les embryons de poissons zèbres chimériques

En raison de la chorion dur et d'embryons non alcoolisées, la manipulation d'embryons de medaka est plus compliqué que chez le poisson zèbre. Cette vidéo montre étape par étape, les procédures pour la manipulation des embryons de medaka, y compris dechorionation, montage d'agarose pour l'imagerie et la transplantation de cellules pour la production de chimères. Ces procédures sont essentielles à utiliser le medaka et poisson-zèbre dans un laboratoire de tirer pleinement parti de leur...

Dechorionation d&#39;embryons Medaka et la transplantation de cellules pour la production de chimères

Ce protocole fournit des instructions étape par étape sur la façon de générer des embryons de poisson-zèbre parabiotique de différents antécédents génétiques. Lorsqu’elle est combinée aux capacités d’imagerie inégalées de l’embryon de poisson-zèbre, cette méthode fournit un moyen unique et puissant d’étudier les fonctions autonomes cellulaires par rapport aux fonctions non autonomes cellulaires pour les gènes candidats d’intérêt.

Génération de parabiose Zebrafish Embryons par Fusion chirurgicale de développement blastulas

Suivi en direct des progéniteurs rétiniens WT individuels dans des contextes génétiques distincts permet l'évaluation de la contribution de la signalisation non-autonome cellule pendant la neurogenèse. Ici, une combinaison de knock - down de gènes, la génération par la transplantation d' embryons chimères et in vivo d' imagerie confocale time-lapse a été utilisé à cette fin.

Imagerie in vivo de Transgenic Gene Expression en Retinal individuelle progéniteurs dans chimériques Zebrafish Embryons à étudier cellulaires Influences non autonomes

Ici, nous montrons le processus de création d’une ligne de poisson-zèbre de journaliste tension électrique cellulaire afin de visualiser le développement embryonnaire, mouvement, et des cellules de tumeur de poissons in vivo.

Visualisation de l’activité électrique cellulaire dans les jeunes embryons de poisson-zèbre et tumeurs

Les manipulations embryologiques telles que la disparition et la transplantation de cellules sont des outils importants pour étudier le développement précoce. Ce protocole décrit un dispositif de transplantation simple et efficace pour effectuer ces manipulations chez des embryons de poisson zèbre.

Un dispositif de transplantation simple et efficace pour les embryons de poisson zèbre

Nous présentons ici un protocole de transplantation de cellules à haute résolution spatiale et temporelle chez des embryons et des larves de poisson-zèbre à n’importe quel stade entre au moins 1 et 7 jours après la fécondation.

Transplantation cellulaire à haute résolution chez le poisson-zèbre embryonnaire et larvaire

La transplantation de moelle rein entier chez le poisson zèbre pour adultes

La microinjection est une méthode bien établie et efficace pour introduire des substances étrangères dans des embryons de poisson zèbre fécondé. Ici, nous démontrons une technique de microinjection robustes pour effectuer une surexpression d'ARNm, et morpholino oligonucléotides études de génétique chez le poisson zèbre knockdown.

Microinjection d&#39;ARNm et oligonucléotides antisens morpholino dans embryons de poissons zèbres.

Découvrez la génération d'embryons chimériques chez le poisson zèbre par transplantation aux stades blastula et gastrula. Cette méthode permet d'étudier les fonctions cellulaires des gènes et leurs interactions pendant le développement.

Génération embryons de poissons zèbres chimériques par transplantation

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