Name: Wolbachia infection bactérienne chez la drosophile (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Découvrez un protocole simple pour isoler Wolbachia de drosophiles infectées et les injecter dans des mouches non infectées. Cette méthode utilise un dispositif filtrant et facilite l'étude de la transmission des infections chez les insectes.

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wolbachia infection bactérienne chez la drosophile

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia infection bactérienne chez la drosophile

Je m'appelle Voia Friedman. Je suis chercheuse associée à l'Université de Princeton. Aujourd'hui, je vais vous parler de plusieurs protocoles que j'ai mis au point pour transinfecter, initialement afin d'isoler, puis de revenir à partir des hélices de mouches infectées, et par la suite pour aider à injecter l'hélice alimentée à des mouches non infectées.Donc, fondamentalement, il s'agit d'un protocole très simple pour isoler lui-même à des fins de base. Vous utiliserez cet appareil provenant de Mepo, qui contient un filtre placé au-dessus d'un E. On commence essentiellement avec environ cent mouches. Vous anesthésiez les mouches, les placez dans le dispositif de filtration, vous pouvez simplement utiliser une ampoule et celle-ci s'adaptera très facilement sur cet appareil, puis vous rincez avec de l'éthanol à 70 %.Vous prenez simplement, retirez le futur, vous pouvez jeter l'éthanol, puis après trois lavages, vous effectuez votre dernier lavage avec de l'eau moléculaire, car vous ne voulez pas de bactéries provenant de traces d'éthanol. Ensuite, vous passez simplement à une nouvelle porte d'arme et vous centrifugez dans un micro, un vrai micro, pendant deux minutes. Ensuite, vous pouvez injecter cela. Il ne nourrit que les mouches non affectées.Donc, prenez essentiellement un ruban adhésif double face, dont l'un des côtés est généralement plus collant que l'autre. Laissez le côté le plus collant orienté vers le haut, car c'est ce côté que vous utiliserez pour coller les mouches par-dessus. Ensuite, concernant l'appareil à gaz, si vous avez cette lumière au-dessus, il n'y aura aucun flux de gaz, et les mouches se réveilleront si elles se trouvent au-dessus de la lame.Vous pouvez donc diriger le flux, en formant une petite hotte ou une petite chambre à l’aide de ruban adhésif. Ensuite, vous dirigez le gaz vers les mouches. Puis vous placez votre source lumineuse ici avec le ruban, et vous avez vos mouches.Fixez les mouches sur le dessus du ruban, toutes dans la même orientation, en orientant leur tête vers la direction d'où vous apporterez l'aiguille. Ainsi, vous pouvez simplement passer par-dessus l'aile ; assurez-vous, puisqu'elles peuvent voler, qu'elles ne s'envolent pas. Si elles se réveillaient pendant la procédure, vous ne voudriez pas qu'elles s'échappent.Veillez donc à appliquer légèrement la pointe contre les ailes de la mouche, près de la queue. Il est acceptable que les ailes soient endommagées. Et lorsque vous retirez les mouches après l'injection, elles perdront probablement leurs ailes de toute façon, mais elles survivront.Cela peut être utile parce que vous ne perdrez pas les mouches ; il applique donc de l'huile minérale sur le micromètre à l'arrière de l'aiguille, puis l'aiguille d'injection polaire, et ensuite, vous pouvez simplement régler la pression pour faire remonter le liquide jusqu'à l'extrémité de l'aiguille. J'ai injecté entre 10 et 15 nanolitres, mais tant que je reste constant, c'est bon. Un détail important dans cette expérience est que la mouche, une fois que l'injection est effectuée, doit avoir l'aiguille introduite aussi profondément que possible dans la partie supérieure de l'abdomen.Parce qu’ici, fondamentalement, lorsque l’aiguille pénètre, vous disposez d’un espace plus grand pour aller vers le haut et vers le bas. Et fondamentalement, si c’est proche, plus près de la cuticule, il est moins probable que l’aiguille pénètre des organes vitaux pendant le vol. Il est très peu probable, par exemple, que vous perciez un trou dans votre intestin, ce qui tuerait le drosophile sur lequel vous effectuez la chirurgie.Je m'appelle Voia Friedman. Je suis chercheuse associée à l'Université de Princeton, dans le laboratoire d'Eric Hels. Aujourd'hui, je souhaite vous parler de ce protocole que vous venez de voir, la démonstration.Ce protocole a donc été réalisé parce que nous souhaitions démontrer que l'UBA est capable de traverser les tissus. L'UBA est en effet l'un des parasites intracellulaires les plus répandus à la surface de la Terre, infectant de 20 à 70 % des insectes ainsi que de nombreuses particules.Et il est également très important en ce qui concerne les maladies humaines, car il infecte des nématodes qui transmettent des maladies comme la cécité des rivières ou la filariose lymphatique. Ainsi, CCA est un endosymbiote obligatoire de ces vers. Il existe un grand intérêt, un intérêt très fort, à utiliser CCA également comme moyen de contrôler les maladies parasitaires transmises par les moustiques, comme le paludisme et la dengue.Ainsi, ce protocole a été principalement mis au point pour montrer que, une fois présents dans la cavité abdominale d'une mouche, les CCA peuvent traverser les tissus et atteindre les cellules germinales. En substance, ce que vous pouvez observer ici correspond à l'oph du follicule ovarien de drosophile ; une fois présents dans l'hélice, ils peuvent franchir une membrane périorénale rose entourant l'ovaire.Ensuite, ils traversent une couche musculaire. En réalité, l'un des premiers endroits qu'ils atteignent à l'intérieur de l'ovaire est l'image des cellules souches somatiques. Puis, ils peuvent atteindre la lignée germinale.Et cette bactérie est transmise de la même manière que les mitochondries, c'est-à-dire par la mère, par le biais des cytoplasmes présents dans l'ovule. Elle doit donc nécessairement être présente dans la lignée germinale. C'est pourquoi ce protocole a été mis au point.Et ce protocole peut être très utile, car traditionnellement, la méthode utilisée par les chercheurs pour transinfecter des wbaa consistait essentiellement à prendre des wbaa et à introduire une nouvelle espèce d'insecte par micro-injection dans l'embryon. Or, ces techniques sont nettement plus complexes.Et fondamentalement, ici, nous tirons simplement parti de la biologie des o, puisqu'elles sont capables de traverser les tissus et de pénétrer dans les tissus des cellules souches, permettant ainsi leur passage jusqu'à la lignée germinale. Cela facilite donc le prélèvement d'UBA à partir de certaines espèces d'insectes infectées, et celles-ci peuvent être transmises à des espèces non infectées. Probablement, je pense que c'est l'injection elle-même.En principe, vous devez faire attention à bien immobiliser la drosophile. Nous utilisons un ruban adhésif double face et vous devez insérer l'aiguille aussi près que possible, en restant le plus parallèle possible à la drosophile, afin de ne pas pénétrer trop profondément. Cela réduit la probabilité de tuer la drosophile lors de l'intervention chirurgicale.

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Découvrez un protocole simple pour isoler Wolbachia de drosophiles infectées et les injecter dans des mouches non infectées. Cette méthode utilise un dispositif filtrant et facilite l'étude de la transmission des infections chez les insectes.

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