Name: Dissection de 6,5 embryons de souris DPC (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Apprenez la dissection d'embryons de souris à 6,5 jours post-coïtum pour étudier le patronage génique et les décisions de lignée cellulaire. Cette technique permet d'isoler les embryons au stade de la primitive streak.

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Dissection des organes reproducteurs d'une souris femelle <ol><li> Les femelles gravides sont euthanasiés par asphyxie à l'aide de CO 2 de gaz comprimé. </li><li> Posez le dos des animaux sur le tampon absorbant et la tremper dans de l'éthanol à 70% pour réduire le risque de contamination de la dissection avec les cheveux de la souris. </li><li> Pincer la peau et de faire une petite incision latérale à la ligne médiane avec des ciseaux chirurgicaux réguliers. Tenez fermement la peau dessus et en dessous de l'incision et tirez la peau en dehors vers la tête et la queue afin d'exposer l'abdomen. </li><li> Saisir le péritoine avec une pince et coupé à exposer la cavité abdominale. </li><li> Repérez les organes de reproduction dans la région dorsale de la cavité du corps: deux cornes utérines, l'oviducte et les ovaires. </li></ol> Primitive Streak stade (6,5 DPC) Dissection <ol><li> Retirez la corne utérine en saisissant l'utérus ci-dessous l'oviducte et couper le long de la libre mésométrium. Placez l'utérus disséqués dans PBS glacé. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="Figure 1" width="263" height="132"> Figure 1 </li><li> Séparez les embryons en coupant entre les sites d'implantation le long des cornes utérines. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="Figure 2" width="575" height="171"> Figure 2 </li><li> Saisir la muqueuse utérine en glissant musculaires pince d'horloger entre la couche musculaire et des tissus environnants decidua enveloppés. Peler la couche musculaire, exposant la caduque. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="Figure 3" width="593" height="166"> Figure 3 </li><li> Coupez une partie de la caduque exposés à l'apex (environ 1 / 5 du tissu decidua), qui exposera la pointe midventral ou distal de l'embryon clos. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="Figure 4" width="589" height="212"> Figure 4 </li><li> L'embryon peut être bombardé à l'aide du bout des pinces. Pierce la caduque avec une pince entourant l'embryon et les forceps ouverte à la déchirure decidua dehors. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="Figure 5" width="249" height="200"> Figure 5 </li><li> Une fois que l'embryon est enlevé, la membrane Reichart a peut-être encore attachés, ainsi que le cône ectoplacentaire (le trophoblaste). L'embryon peut être disséqué encore par une dissection minutieuse. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="Figure 6" width="356" height="222"> Figure 6 </li></ol>

<ol><li>Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).</li>
</ol>

Postimplantatoire chez la souris se situe entre 4,5 DPC et de la naissance. Cette méthode de dissection peut être appliquée, essentiellement comme décrit, d&#39;isoler plus tôt ou plus tard au stade de 5.5 à 8.5 embryons DPC.

<table><tbody><tr><td>Pinces chirurgicales micro-dissection, dentelées, droites</td><td>Outil</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5130</td><td>2 paires</td></tr><tr><td>Pincettes micro-dissection modèle n°55 INOX</td><td>Outil</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5010</td><td>2 paires</td></tr><tr><td>Solution tamponnée au phosphate de Dulbecco&amp;rsquo;s (1x)</td><td>Réactif</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri en polystyrène stérile Fisherbrand</td><td>Outil</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Parafomaldéhyde à 4 % dans du PBS</td><td>Réactif</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection droits à pointe effilée</td><td>Outil</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Souris femelles gestantes</td><td>Animal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope de dissection</td><td>Microscope</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection de 6,5 embryons de souris dpc

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

L&#39;analyse des profils d&#39;expression génique au cours des étapes précoces du développement embryonnaire chez les mammifères peuvent fournir des indices importants sur la fonction du gène, cellule-cellule d&#39;interaction et les mécanismes de signalisation qui guident la structuration embryonnaire. Cependant, la dissection de l&#39;embryon de souris de la decidua peu après l&#39;implantation peut être une procédure difficile et détaillées étape par étape la documentation de ce processus fait défaut. Ici, nous montrons comment post-implantation (6,5 DPC) embryons sont isolés d&#39;abord disséquer l&#39;utérus d&#39;une souris enceintes (détection de l&#39;coïtum jour poist bouchon vaginal a été désigné 0,5) et ensuite disséquer l&#39;embryon à partir decidua maternelle. La dissection de la membrane de Reichert est décrite ainsi que la suppression du cône ectoplacentaire.

L&#39;isolement des embryons au stade post-implantation permet d&#39;étudier la structuration génétique et d&#39;analyser les cellules de lignée processus de décision durant le développement embryonnaire, mais la dissection adéquate de l&#39;embryon précoce peut s&#39;avérer difficile. Ce protocole décrit une méthode pour isoler début primitive-série au stade d&#39;embryons (~ 6,5 jours post coïtum [DPC]).

Dissection de 6,5 embryons de souris DPC

L'analyse des profils d'expression génique lors des premières étapes du développement embryonnaire chez les mammifères peut fournir des indices importants sur la fonction des gènes, les interactions cellule-cellule...

Je m'appelle Kelly Shea et je suis responsable du laboratoire ainsi que technicienne de recherche dans le laboratoire de Neilsen. C'est difficile parce que beaucoup de gens ne savent pas distinguer les différentes couches tissulaires. Vous devez donc essentiellement décoller toutes les couches de tissu afin d'exposer l'embryon sous-jacent, qui à ce stade n'est pas très vascularisé. Il est donc très transparent et difficile à distinguer.Prenez des pinces et des ciseaux assez robustes. La première chose à faire est de pincer l'animal exactement au niveau de la ligne médiane, puis d'effectuer une première incision. À partir de ce point, vous pouvez simplement écarter la peau pour exposer l'abdomen de l'animal.Il y a une fine couche du péritoine que vous allez soulever avec la pince, puis inciser avec des ciseaux et rabattre simplement. Vous devez inciser le long de la ligne médiane de l'animal et séparer les deux cornes utérines, qui sont reliées au milieu. Vous pouvez couper directement à la base.Vous allez probablement obtenir beaucoup de tissu adipeux en même temps. Prélevez tout le cornet utérin de l'animal. Placez-le directement dans le PBS.Donc, ceci se trouve dans la corne. Ce

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Dissection de 6,5 embryons de souris DPC

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