Poussin Ovo ex Culture et Ovo ex CAM Test: Comment il fonctionne vraiment

La membrane chorio-allantoïde de poulet (CAM) est un environnement unique et naturellement immunodéficients culture favorable pour étudier l'angiogenèse et de la tumorigenèse. Cet article vidéo montre les différentes étapes de poussin Ovo ex Culture, à l'application de substances potentiellement angiogéniques et l'inoculation des cellules tumorales avec succès et les tissus sur la surface de la came.

Bonjour, je m’appelle Susan Paa. Je travaille à l’Institut de chimie physiologique, département d’endocrinologie biochimique de l’Université de Burg Esen en Allemagne. Bonjour, je m’appelle Daniel Ze Basian Dole.

Je viens de la même institution que Susan. Bonjour, je m’appelle Mann et je travaille au département de neurologie de l’Institut d’anatomie de l’Université de Burg. Nous allons vous montrer comment la culture CH X et l’essai sur la membrane fonctionnent vraiment.

Allons donc au laboratoire. Dans la plupart des études expérimentales récentes, la came qu’est la membrane Chico a été exposée en découpant une fenêtre à travers la coquille de l’œuf, et les expériences ont été menées in ovo, ce qui a entraîné des limitations significatives dans l’accessibilité de la CAM et dans les possibilités d’observation et de documentation photographique des effets. Les cultures X ovo d’embryons de poussin facilitent considérablement l’accessibilité de la caméra et de l’embryon de poussin.

S’il vous plaît voir le cœur battant permettant une documentation in vivo facile des effets et la manipulation expérimentale de l’embryon. Dans notre article vidéo, nous allons fournir une démonstration étape par étape de l’application réussie de la culture X ovo pour un grand nombre de questions scientifiques. Les œufs sont incubés dans un incubateur avec un plateau mobile.

Ici, vous pouvez voir l’élément chauffant et le déménageur de plateau faire tourner les œufs 12 fois par jour en continu. L’humidité est maintenue à 60 % en ajoutant de l’eau dans des récipients en plastique au fond de l’incubateur, et la température d’incubation est réglée à 37,5 degrés centigrades avant de commencer l’incubation. La saleté, les plumes et les excréments sont soigneusement retirés des coquilles d’œufs, en essuyant mécaniquement les œufs avec de l’éthanol ou un désinfectant, mais en réduisant considérablement les taux de survie des embryons.

Les œufs sont positionnés horizontalement sur le plateau mobile de l’incubateur. Assurez-vous de garder une distance suffisante entre les œufs individuels pour permettre la rotation libre. Après l’incubation Pendant 72 heures, les œufs sont retirés de l’incubateur et la face supérieure des œufs où réside l’embryon est marquée au crayon.

Étant donné que l’embryon résiste dans une certaine mesure à la rotation et reste situé ici Pour une meilleure sensation, aucun gant ne doit être utilisé pour casser les œufs, mais les mains doivent être désinfectées avec de l’éthanol à 70 %. L’œuf est tenu horizontalement avec une marque de crayon sur le dessus et fissuré sur le bord d’une barre d’agitation magnétique triangulaire Pour un contrôle maximal de la force pendant les procédures de fissuration, les coudes ne doivent pas reposer sur le plan de travail. Il est important que la coquille de l’œuf ainsi que la membrane de l’œuf soient ouvertes lors de la fissuration La fuite du blanc d’œuf est un signe sûr que la membrane de l’œuf a été perforée.

L’œuf est conservé près du fond du plat patriote. Pour éviter d’autres fuites de blanc d’œuf lors de cette procédure d’ouverture initiale, il est important que le blanc d’œuf au fond du plat patriote soit toujours connecté au reste à l’intérieur de l’œuf. Comme cela se traduit par un vide à l’intérieur de l’œuf qui maintient le jaune en place en appliquant doucement une pression sur le méridien traversant la fissure et l’équateur de l’œuf avec le pouce et le majeur, il est possible de réguler le vide et l’extrusion du contenu de l’œuf.

Le contenu de l’œuf peut ensuite être transféré dans la boîte de Pétri avec le jaune intact. Si l’œuf est doucement soulevé et que les deux moitiés de la coquille sont soigneusement séparées, les cultures ex ovo sont ensuite placées sur un plateau, retournées dans un incubateur et maintenues à 37,5 à 38,2 degrés centigrades et 70 % d’humidité. Un apport de dioxyde de carbone ou d’oxygène n’est pas nécessaire.

Si l’on utilise des plats spéciaux patriote avec des entretoises entre le couvercle et le plat et des incubateurs avec une grille de ventilation, la grille de ventilation doit être maintenue à moitié ouverte. Les papiers filtrants pour autoclave sont utilisés comme matériau de support pour les substances liquides appliquées sur la came car ils semblent causer le moins d’irritation de la came. Le site d’application doit se trouver à mi-chemin entre l’embryon et le bord de la caméra, sinon l’embryon entrave l’observation microscopique des effets en lumière transmise.

Le liquide ici atropine doit être appliqué immédiatement après que le filtre a été placé sur la came pour éviter le dessèchement. Des doses supplémentaires ou un tampon doivent être réappliqués tous les jours. Lorsque la came est complètement développée, jusqu’à six échantillons différents peuvent être appliqués et leurs effets peuvent être comparés sur une seule bague de came coupée À partir d’une pointe de pipette d’un millilitre, la pointe doit être coupée aussi fine que possible pour minimiser le poids et éviter l’indentation de la came.

L’anneau est ensuite appliqué sur la came et les cellules sont pipetées dans l’anneau. Une seringue Hamilton Microliter est rincée plusieurs fois avec de l’éthanol à 70 % et enfin avec une solution saline tamponnée au phosphate stérile ou PBS, La micro-seringue est remplie d’une suspension cellulaire préparée avec soin Mais pénètre rapidement dans la came et les couches oculaires avec l’aiguille de la seringue et injecte continuellement la suspension cellulaire. L’aiguille doit rester quelques secondes dans l’œil pour éviter une perte de la suspension cellulaire injectée Par contrôle d’étanchéité X Ovo.

Des cultures d’œufs incubées pendant trois jours sont utilisées comme donneuses de bourgeons de membres. L’embryon est disséqué à partir des vaisseaux vitellins connectés. En découpant un cercle, l’embryon est transféré dans une boîte de Pétri remplie de PBS stérile froid à l’aide d’une petite cuillère de drainage et lavé par agitation.

L’embryon est ensuite transféré dans une boîte de Pétri fraîche remplie de PBS stérile et libéré des membranes environnantes, en les déchirant soigneusement avec une pince fine. Les bourgeons des membres sont détachés à l’aide de pinces aussi près que possible du corps, saisis et transférés à la caméra d’un poulet hôte âgé de huit à 10 jours. Sur le site d’application souhaité, la came est traumatisée de manière sélective par un léger grattage avec un morceau de la pince.

Ensuite, le greffon est saisi et superposé sur la came avec l’autre morceau de la pince. La souris femelle sacrificielle est fixée sur une planche. La paroi abdominale est humidifiée avec de l’éthanol à 70 % coupé le long de la ligne médiane et les lambeaux cutanés sont fixés latéralement par des épingles.

L’utérus est retiré de l’abdomen, détaché et transféré dans un bécher. Avec PBS froid. Les membranes embryonnaires sont retirées avec précaution à l’aide d’une pince à des fins de démonstration.

Un embryon de souris de 16 jours est montré ici pour une meilleure visibilité des bourgeons des membres. Seuls des résultats de greffage optimaux sont obtenus. Cependant, si des bourgeons de membres d’embryons âgés de 10 à 13 jours sont utilisés, les bourgeons de membres sont coupés ou l’utilisation de pinces fines aussi près que possible du corps.

Sur le site d’application souhaité, la FAO est traumatisée de manière sélective par un léger grattage avec des pinces. Ensuite, les bourgeons des membres sont saisis et transférés dans le CAM d’une poule hôte âgée de huit à 10 jours. Le greffon est placé une ou deux fois sur un côté de la came où aucun greffage final n’est destiné à éliminer l’excès de PBS.

Les greffons sont idéalement placés sur la came près d’une bifurcation en Y d’une tumeur vasculaire sanguine. Les biopsies sont coupées en morceaux d’un à deux millimètres cubes à l’aide de scalpels stériles. Le prélèvement de matériel à la surface de la biopsie augmente le risque de contamination par le muscle ou le tissu conjonctif.

Sur le site d’application souhaité, la FAO est traumatisée de manière sélective par un grattage doux. Un morceau de la carotte de l’échantillon de biopsie est greffé sur le CAM d’un poulet hôte âgé de huit à 10 jours. Les greffons sont idéalement placés sur la came près d’une bifurcation en Y d’un vaisseau sanguin.

Le greffon est ensuite transféré à la CAM avec un minimum de PBS attaché. Une légère pression peut être appliquée pour manœuvrer le greffon dans une indentation résultante de la came. L’embryon de poussin hôte est tué par décapitation.

Le CAM avec le greffon attaché est retiré par une coupe circulaire et transféré dans une boîte de Pétri remplie de PBS. Une MCA excessive est coupée du greffon, à l’exception de l’ancien site d’attache. Encore une fois sur le site d’application souhaité.

La came d’un nouvel embryon de poussin hôte est traumatisée de manière sélective par un grattage doux et le greffon est transféré à la came du deuxième hôte avec un minimum de PBS attaché. Nous venons de démontrer comment CH X ou la culture fonctionne réellement. Je vous ai montré les avantages par rapport aux expériences d’Orval et vous ai donné quelques exemples pour son application.

Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.