Name: Automated Protocole microfluidiques lyse du sang pour lenrichissement de cellules circulantes nucléées (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Découvrez l'enrichissement de cellules nucléées circulantes par lyse sanguine microfluidique automatisée. Cette méthode préserve l'intégrité cellulaire pour analyses en cytométrie en flux.

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La recherche a été soutenue par le Prix Wallace H. Coulter Fondation en début de carrière dans la recherche translationnelle. Merci à Tim Andrews, Hématologie / oncologie pédiatrique, pour aider à la collecte de l&#39;échantillon sanguin. Aussi, grâce à Dr Sam Wellhausen, Core cytométrie en flux, James Graham Brown Cancer Center, pour les aider à exploiter des échantillons par cytométrie en flux.

Partie 1. Fabrication de dispositifs microfluidiques Un moule maître de silicium de l'appareil lyse microfluidique a été créé en utilisant des techniques de photolithographie avec l'équipement de l'Université de Louisville salle blanche [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc, San Rafael, Californie) a été utilisée pour générer un masque de transparence (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) pour créer des répliques négatives des canaux. L'appareil a été fabriqué lyse microfluidique de la moule maître de silicium en utilisant des techniques de lithographie molle avec l'élastomère (diméthylsiloxane) poly (PDMS; Dow Corning, Midland, MI). L'élastomère avec les canaux reproduits a été libéré, et les trous d'accès au canal ont été perforé avec une aiguille de calibre 20 (petites pièces, Miramar, en Floride.). La plaquette a été irréversiblement PDMS collés sur une lame de verre par plasma d'oxygène et testée pour l'expérimentation. Partie 2. Protocole pour la course dispositif de lyse Après le dispositif microfluidique a été fabriqué et testé, les expériences avec lyse des globules rouges sont prêts à commencer. La section suivante détaille le protocole pour le dispositif microfluidique. 2.1 Prélèvement des échantillons <ol><li> Recueillir 4 millilitres de l'échantillon de sang de la veine cubitale médiane, sur la veine avant-bras antérieur du patient avec l'héparine comme anticoagulant chez les deux 2 ml verte vaccutainers haut. </li><li> Jeter les 2 premiers ml tube car il contient des cellules endothéliales matures délogé (faux positifs). </li><li> Reprendre le deuxième tube pour mélanger avec du sang héparine en tournant haut et en bas; enregistrer immédiatement sur la glace. </li><li> Transférer 1 ml de sang dans un tube de 1,5 ml Eppendorf. Traiter les échantillons de sang immédiatement (moins d'une heure de la collecte). </li></ol> 2.2 dispositif de Premier microfluidiques avec PBS <ol><li> Procurez-vous un dispositif microfluidique collé au verre. Press-Fit tube d'accès (petites pièces, Miramar, Floride) de diamètre légèrement plus grand dans les entrées et de sortie (figure 1). </li><li> Fixer une aiguille de seringue de calibre 30 (petites pièces, Miramar, Floride) pour le tuyau sur chacun des bras de mer, offrant la macro à l'interface micro. </li><li> Remplir une seringue de 1 ml avec du PBS 1X et veillez à vous débarrasser des bulles en feuilletant l'aiguille de la seringue. Branchez le PBS-chargé seringue de 1 mL d'entrée 1 sur le dispositif microfluidique. Poussez la seringue contenant le PBS 1X doucement par la main jusqu'à ce que la solution coule de l'entrée 2, puis immédiatement pince entrée 2 avec un clip liant de bureau standard </li><li> Continuez à pousser le PBS 1X que le liquide atteint le port de sortie du dispositif microfluidique. Une fois la solution coule de la sortie, serrer le tube de sortie avec un autre clip liant. </li><li> Continuez à pousser la seringue de 1 ml de PBS 1X jusqu'à ce que le sort de l'entrée 3, et pince l'entrée 3 de port avec un autre clip liant bureau. Le dispositif microfluidique est maintenant complètement amorcée. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Schéma du dispositif montrant les entrées pour les solutions respectives et à la sortie. 2.3 Préparation des pompes à seringues et de la solution <ol><li> Pour calibrer les pompes procédez comme suit: <ol class="lalpha"><li> Pour la pompe seringue Harvard grande (Harvard, PHD 22/2000 Partie # 702000): Définir la configuration de diamètre pour 22,5 mm, débit 600 l / min. </li><li> Pour la pompe seringue Harvard petits (Harvard, ainsi qu'une partie de Pico # 702213): Définir la configuration de diamètre pour 4,61 mm, débit 20 l / min. </li></ol></li><li> Remplissez un seringue de 30 ml avec de l'eau déminéralisée stérile. Ceci peut être accompli en retirant la solution directement sur le tube conique de 50 ml. (Label de la seringue) </li><li> Remplir une seconde seringue de 30 ml avec 2X tampon phosphate salin (PBS), 2% de paraformaldéhyde (PFA) en utilisant la procédure décrite dans l'étape 9. (Label de la seringue) </li><li> Remplir une seringue de 1 ml avec du PBS 1X de la aliquotes stockées dans les 15 ml tubes coniques, en utilisant la procédure décrite dans l'étape 9. </li><li> Connectez la seringue de 30 ml d'eau déminéralisée à l'entrée 2 et le 30 ml de PBS 2X seringue à l'entrée 3 (assurez-vous d'enfiler bulles piège t dans le tube ou d'un dispositif microfluidique). Retirez la pince de criques 2 et 3 et le tube de sortie. Branchez le PBS 1X ml 1 seringue dans l'entrée 1. Évitez d'introduire des bulles en remplissant le aiguille de la seringue avec le liquide, reliant la seringue, et en tapotant l'aiguille de la seringue pour débarrasser des bulles. </li></ol> 2,4 lyse des globules rouges <ol><li> Régler toutes les seringues sur les pompes à Harvard, telles que décrites ci-dessous: <ol class="lalpha"><li> Réglez les deux seringues 30 ml (un contenant stérile, de l'eau déminéralisée et l'autre avec 2X PBS, 2% PFA), ainsi que sur la pompe à Harvard grosse seringue. </li><li> Régler la seringue de 1 ml (contenant du PBS 1X) sur la pompe à Harvard petite seringue. </li><li> Placez le tuyau d'écoulement dans un collecteur de déchets (50 ml tube conique qui est étiqueté wASTE). </li></ol></li><li> Mettez la pompe à Harvard grosse seringue (avec les 30 seringues ml) et le laisser fonctionner pendant une minute. (Assurez-vous qu'il n'ya pas de bulles et aucune fuite dans l'appareil ou dans le tube). </li><li> Mettez la pompe à Harvard petite seringue et le laisser fonctionner pendant une minute supplémentaire. (Assurez-vous qu'il n'ya pas de bulles et aucune fuite dans l'appareil ou dans le tube). L'arrêt des pompes. Le dispositif microfluidique est maintenant prêt à être utilisé. </li><li> Retirez la seringue de 1 ml contenant du PBS 1X de la pompe Harvard petite seringue. </li><li> Après l'obtention d'un échantillon de sang, remplir la seringue de 1 ml à 0,05 ml de solution stérile PBS 1X, sans piégeage des bulles. Ensuite, remplir la seringue avec 0,5 ml de sang provenant du tube Eppendorf. (La seringue de 1 ml contient maintenant un volume final de 0,55 ml de sang et 1X tampon PBS.) Remarque: Conserver la seringue verticale pendant le remplissage pour éviter de mélanger du PBS 0,05 ml avec le sang. </li><li> Connectez la seringue contenant le sang à l'entrée 1 et monter la seringue avec précaution (éviter de pousser le sang à travers le tube dans l'appareil) sur la pompe à Harvard petite seringue (la seringue est monté verticale dans la pompe). </li><li> Retirez le tube de sortie du tube de déchets et de mettre un tube à centrifuger de 50 ml propres à sa place et le mettre sur un seau de glace. </li><li> Mettez la pompe Harvard grosse seringue premier et le laisser fonctionner pendant 1 minute. Commencer à recueillir l'échantillon de la sortie dans le tube à centrifuger de 50 ml. </li><li> Mettez la pompe Harvard petite seringue. </li><li> Une fois l'échantillon de sang dans la seringue de 1 ml a complètement traversé le périphérique, arrêter les deux pompes. Cela devrait prendre environ 20 minutes. </li><li> Centrifuger l'échantillon recueilli pendant 5 minutes à 350 xg à température ambiante avec l'arrêt de frein. </li><li> Retirer le surnageant en plaçant la pointe de pipette sur le côté opposé de la pastille blanche. Retirer le surnageant que possible, les débris cellulaires surtout le rouge, sans perturber le culot blanc. </li><li> Resuspendre l'échantillon dans 1 ml de tampon de flux (PBS 1X, 1% de BSA [albumine sérique bovine], 2% PFA) par aspiration et refoulement. Transférer l'échantillon à un tube Eppendorf de 1,5 ml. </li><li> Microcentrifugeuse l'échantillon recueilli pendant 5 minutes à 4 xg à température ambiante. Utilisez même précision que, avant d'enlever le surnageant. </li><li> Resuspendre l'échantillon dans 1 ml de tampon de flux par vortex. </li></ol> 2.5 Préparation pour l'analyse par cytométrie en flux <ol><li> Pour l'analyse de l'échantillon en utilisant la cytométrie de flux, ajouter 100 ul d'échantillon dans un tube de cytométrie en flux. </li><li> Pour l'ul 100 de l'échantillon ajouter des anticorps spécifiés (veiller à la bonne concentration). </li><li> Laisser l'échantillon à incuber pendant 30 minutes à 40 ° C. </li><li> Laver deux fois avec le tampon de flux avant de la cytométrie de flux. Étape de lavage comprend l'ajout de 250 ul de tampon de flux, vortex, centrifuger pendant 5 minutes à 350 xg, et enlever le surnageant avec un tour du fluide du tube de cytométrie en flux. </li><li> Reprendre le culot dans 250 ul de tampon de flux. L'échantillon est prêt pour l'analyse par cytométrie en flux. </li></ol> Les résultats représentatifs Le sang entier a été exécuté à travers le dispositif microfluidique lyse et de post-traitement de protocole, débarrassant des érythrocytes et enrichissante circulant cellules nucléées (CNC). Idéal résultats donneront une parcelle de débit propres cytométrie de dispersion avec les populations CNC séparée. Affiché en dessous dans les figures 2 et 3 sont des comparaisons diagramme de dispersion d'un échantillon de sang total, sans lyse des érythrocytes et avec lyse des globules rouges par le protocole microfluidiques avec des haches en diffusion vers l'avant (FSC) par rapport à diffusion latérale (SSC) de lumière. On peut voir que le protocole d'enrichissement microfluidique est nécessaire d'obtenir une parcelle de débit propres cytométrie de dispersion. <img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Nuage de cytométrie en flux d'échantillon de sang total, sans lyse des globules rouges avec le FSC et les axes de la SSC. <img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Nuage de cytométrie en flux de circulation de cellules nucléées avec une lyse des érythrocytes microfluidique étiquetés par les populations avec le FSC et les axes de la SSC. Région 1 (rouge) représente les lymphocytes, la Région 2 (vert) représente les monocytes, la Région 3 (bleu) représente les granulocytes, et de la Région 4 (violet) n'a pas encore été caractérisés. Enlèvement de débris de globules rouges à la pipette dans le protocole est également important lorsque cela est nécessaire. Ci-dessous à la figure 4 est un diagramme de dispersion montrant un excédent de débris de globules rouges. Bien que non opacification le nuage de points comme dans la figure 2, on doit tenir compte des événements ajoutée due aux débris érythrocytaires pendant l'analyse des données. <img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig4.jpg" alt="Figure 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 4"> Figure 4. Nuage de cytométrie en flux montrant les débris de globules rouges, considéré comme un pôledes événements dans la région 5 (cyan). Cellules de coloration pour certains marqueurs phénotype d'anticorps seront également de générer des résultats caractéristique. Dans les figures suivantes sont des taches phénotype anticorps pour trois populations leucocytaires distincts: les lymphocytes, des monocytes et des granulocytes. La figure 5 montre populations lymphocytaires comploté avec les axes CD3 et CD4. Les monocytes et les granulocytes sont présentés aux figures 6-7 avec axes comme le FSC par rapport CD14 et CD66b, respectivement. <img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig5.jpg" alt="Figure 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 5"> Figure 5. Nuage de points représentant la cytométrie de flux avec des lymphocytes CD3 et CD4 axes. <img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig6.jpg" alt="Figure 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 6"> Figure 6. Nuage de la cytométrie de flux illustrant les monocytes avec le FSC et CD14 axes. <img src="/files/ftp_upload/1656/1656fig7.jpg" alt="Figure 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 7"> Figure 7. Nuage de la cytométrie de flux illustrant les granulocytes avec le FSC et les axes CD66b.

<ol><li>White, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+application+of+microfluidic+leukocyte+enrichment+protocol+in+mild+phenotype+sickle+cell+disease+%28SCD%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD.</a> Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).</li>
<li>Sethu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+Flow+Microfluidic+Device+for+Rapid+Erythrocyte+Lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis.</a> Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).</li>
</ol>

Un protocole de microfluidique automatisée lyse de sang n&#39;a été rapporté. Dans le protocole sont des étapes importantes à noter. Dans la section P.2.1, il est important de jeter le flacon de sang recueillies pour la première que l&#39;échantillon contient des cellules endothéliales matures délogé agissant comme de faux positifs. De plus, assurez-vous d&#39;exécuter l&#39;échantillon de sang dans l&#39;heure de la collecte. Amorçage du dispositif microfluidique dans la section P.2.2, il est important de d&#39;abord é...

automated protocole microfluidiques lyse du sang pour l&#39;enrichissement de cellules circulantes nucléées

Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Dans ce rapport, le protocole d&#39;un dispositif automatisé de sang microfluidique lyse est détaillée. Circulants des cellules nucléées (CNC), y compris les leucocytes et les cellules endothéliales, de fournir une plateforme idéale pour une mise à jour le statut de la condition immunitaire d&#39;un individu. Le protocole permet microfluidique pour l&#39;enrichissement de CNC, sans perte de cellules sélectives et de la variabilité due à la préparation d&#39;échantillons par l&#39;utilisateur médiation étapes. Brièvement, le protocole comprend la fabrication de dispositifs, de la collecte de l&#39;échantillon, configuration de l&#39;appareil, et courir le sang dans la chambre microfluidique. Dans le dispositif de sang total est rapidement mélangé avec de l&#39;eau déminéralisée pendant environ 10 secondes dans un canal de 50 microns x 150 microns microfluidique. En ce moment érythrocytes sont lysés durée en raison des conditions hypotoniques. Structures chevrons sur le fond du canal d&#39;assurer un mélange complet et l&#39;exposition des cellules à un environnement constant. Cellules restantes sont retournés aux conditions isotoniques à la sortie de l&#39;appareil, fixe à l&#39;aide de paraformaldéhyde à 2%, centrifugé pour séparer les débris érythrocytaires du CNC, et en suspension dans du tampon de flux pour la coloration et l&#39;analyse par cytométrie en flux. Les résultats montrent propres parcelles de cytométrie en flux de dispersion avec les populations CNC sauvé. Signification de ce dispositif et le protocole vient à l&#39;étude et la compréhension de la pathogenèse de la maladie par l&#39;analyse des populations de CNC. Ainsi, l&#39;automatisation, l&#39;efficacité et la simplicité du protocole de microfluidique sont démontrés.

Un dispositif automatisé microfluidique a été développé pour faire circuler l&#39;enrichissement de cellules nucléées du sang périphérique via lyse des globules rouges qui assure l&#39;isolement de l&#39;échantillon de haute qualité sans perte de cellules.

Automated Protocole microfluidiques lyse du sang pour l&#39;enrichissement de cellules circulantes nucléées

Dans ce rapport, le protocole relatif à un dispositif microfluidique automatisé de lyse sanguine est détaillé. Les cellules nucléées circulantes (CNC), notamment les leucocytes et...

Pour enrichir les cellules nucléées circulantes à partir de sang. Le dispositif microfluidique est d'abord amorcé avec un XPBS afin d'éliminer les bulles, puis de l'eau déionisée et du paraldéhyde à 2 % dans deux volumes d'XPBS sont ensuite passés à travers le dispositif à l'aide de pompes à seringue avant le chargement de l'échantillon sanguin. Le sang est ensuite traité à travers le dispositif microfluidique et, après traitement de l'échantillon, la collecte comprend une centrifugation et l'élimination du surnageant.Enfin, l'échantillon est analysé par cytométrie en flux afin de produire des graphiques en fax. Bonjour, je suis William White du laboratoire de biotechnologie à micro-échelle du département de génie biomédical de l'Université de Wool. Aujourd'hui, nous allons vous montrer une procédure d'enrichissement des cellules nucléées circulantes par lyse du sang total à l'aide de la microfluidique.Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier l'inflammation dans divers processus pathologiques afin de garantir l'enrichissement des leucocytes et des autres cellules nucléées circulantes sans perte ni activation. Commençons donc. Pour commencer cette procédure, insérez fermement un tube d'accès dont le diamètre est légèrement supérieur à celui des orifices d'accès aux canaux dans les entrées et sorties.Ensuite, pour assurer l'interface entre le macro et le micro, fixez une aiguille de seringue de calibre 30 au tube sur chacune des entrées. Remplissez ensuite une seringue d'un millilitre avec un XPBS, en veillant à éliminer les bulles d'air. Connectez la seringue à l'entrée un et poussez doucement la seringue à la main jusqu'à ce que l'XPBS s'écoule par l'entrée deux.Ensuite, pincez immédiatement l'entrée deux à l'aide d'un trombone de bureau. Continuez à pousser la seringue jusqu'à ce qu'une solution XPBS atteigne le port de sortie du dispositif microfluidique. Une fois la solution écoulée par la sortie, pincez le tube de sortie à l'aide d'un autre trombone.Continuer à pousser la seringue d'un millilitre jusqu'à ce qu'un XPBS sorte de l'entrée trois, puis pincer le port de l'entrée trois avec une troisième pince à rabats. Le dispositif microfluidique est désormais complètement amorcé. Commencer l'étalonnage des pompes à seringue à l'aide de la grande pompe à seringue Harvard en réglant le diamètre sur 22,5 millimètres et le débit à 600 microlitres par minute.Pour la petite pompe à seringue Harvard, réglez le diamètre sur 4,61 millimètres et le débit sur 20 microlitres par minute. Ensuite, remplissez une seringue de 30 millilitres avec de l'eau déionisée en aspirant directement la solution à partir du tube conique de 50 millilitres.N'oubliez pas d'étiqueter la seringue, remplissez une autre seringue de 30 millilitres avec deux XPBS contenant une solution de paraformaldéhyde à 2 %. Retirez à nouveau directement depuis un tube conique et étiquetez la seringue. Connectez maintenant la seringue contenant de l'eau à l'entrée deux et la seringue contenant du paraformaldéhyde à 2 % dans deux XPBS à l'entrée trois, en veillant à ce qu'aucune bulle ne soit piégée dans le tube ou dans le dispositif microfluidique.Ensuite, retirez les pinces des tubulures d'entrée deux, d'entrée trois et de la tubulure de sortie, les trois seringues restant connectées. Assemblez ensuite les deux grandes seringues sur la pompe à seringue Harvard de grande taille et placez la seringue d'un millilitre sur la pompe à seringue Harvard de petite taille. Positionnez la tubulure de sortie dans un tube conique de 50 millilitres destiné à la collecte des déchets.Maintenant, allumez la pompe à seringue Harvard de grande taille contenant les seringues de 30 millilitres et laissez-la fonctionner pendant une minute. Vérifiez qu’il n’y a pas de bulles ni de fuites dans l’appareil ou dans les tubulures. Ensuite, allumez la pompe à seringue Harvard de petite taille et laissez-la également fonctionner pendant une minute supplémentaire.Vérification des bulles et des fuites. Arrêter les pompes après deux minutes. Étant donné que le dispositif microfluidique est désormais prêt à être utilisé avec des échantillons sanguins, les échantillons de sang à analyser ont été collectés comme décrit dans le protocole écrit d'accompagnement et sont utilisés dans l'heure suivant leur prélèvement.Le premier tube de sang prélevé est éliminé afin d'éviter les résultats faussement positifs. Retirez la seringue d'un millilitre de la petite pompe à seringue Harvard, puis injectez un XPBS à partir de la seringue d'un millilitre en remplissant l'aiguille de la seringue. Pour éviter l'introduction de bulles, remplissez une seringue d'un millilitre avec 50 microlitres de un XPBS sans piéger de bulles d'air.Ensuite, remplissez la seringue avec 0,5 millilitre de sang. Maintenez la seringue verticale pendant le remplissage afin d'éviter de mélanger le PBS avec le sang. Puis, reconnectez la seringue contenant le sang à l'entrée un.Essuyez tout excès de liquide et fixez la seringue verticalement sur la petite pompe à seringue Harvard. Veillez à ne pas faire passer le sang à travers le tube jusqu'à l'appareil. Retirez le tube de sortie du tube de rebut et placez-le dans un tube de centrifugation propre de 50 millilitres placé dans un seau à glace.Démarrez maintenant l'interrupteur de fonctionnement sur la grande pompe à seringue Harvard en premier et laissez-la fonctionner pendant une minute. Ensuite, activez la petite pompe à seringue Harvard. L'échantillon commencera à s'écouler par le tube de sortie vers le tube à centrifuger de 50 millilitres.Laisser l'échantillon de sang dans la seringue d'un millilitre traverser complètement le dispositif, ce qui prend environ 20 minutes. Ensuite, arrêter les deux pompes. Maintenant que l'analyse est terminée, centrifuger l'échantillon recueilli pendant cinq minutes à 350 ×g à température ambiante avec le frein désactivé.Éliminer le surnageant en plaçant la pointe de la pipette du côté opposé au culot blanc. Retirer autant de surnageant que possible, en particulier les débris de globules rouges, sans perturber le culot blanc. Resuspendre l'échantillon dans un millilitre de tampon d'écoulement contenant 1 % de BSA et 2 % de paraformaldéhyde dans un XPBS à l'aide d'une pipette.Haut et bas, transférez l'échantillon dans un tube microcentrifuge de 1,5 millilitre (eppendorf), puis centrifugez l'échantillon recueilli pendant cinq minutes à quatre fois g. À température ambiante, retirez le surnageant aussi soigneusement qu'à l'étape précédente de centrifugation. Enfin, ajoutez un millilitre de tampon d'écoulement et vortexez pour remettre en suspension l'échantillon, puis procédez à l'analyse de l'échantillon par cytométrie en flux.Nous allons maintenant présenter quelques résultats représentatifs sous forme de diagrammes Fax provenant d'un échantillon sanguin enrichi par le dispositif microfluidique, avec une analyse réalisée par cytométrie en flux. L'importance de l'enrichissement par lyse peut être observée sur un diagramme Fax où les globules rouges forment un nuage. Le nuage de points produit par le protocole d'enrichissement microfluidique est un nuage propre, avec des populations cellulaires nuclées bien définies présentes en circulation.La région rouge représente les lymphocytes, la verte représente les monocytes, la bleue représente les granulocytes, et la région violette n’a pas encore été caractérisée. L’incapacité à éliminer les débris de globules rouges dans le protocole produit un regroupement d’événements dans le tracé fax observé dans la région cyan. Les populations cellulaires peuvent être visualisées sur des tracés fax séparés.Les lymphocytes maintenus avec CD3 et CD4. Les monocytes maintenus avec CD14 et les granulocytes maintenus avec CD66b. Nous venons de vous montrer comment préparer et exécuter un échantillon sanguin à l’aide du dispositif microfluidique de lyse sanguine. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler d’analyser immédiatement l’échantillon sanguin afin d’éviter que le PBS ne se mélange au sang avant son entrée dans le dispositif, et de prévenir l’introduction de bulles dans les canaux du dispositif.Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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