Mammaires épithéliales procédure de greffe

Ce vidéo montre les procédures permettant de prélever des mémoires. Épithélium, éliminer la couche grasse de la mémoire et transplanter un épithélium exogène afin d'étudier le développement de la mémoire chez des souris âgées de trois semaines. La croissance de l'arbre épithélial de la mémoire est alors limitée à la région du mamelon, et la couche grasse est presque dépourvue d'épithélium mammaire. À mesure que la souris grandit, l'arbre épithélial s'étend à travers la couche grasse.

Vers l'âge de sept semaines, l'arbre canalaire épithélial s'étend dans tout le bourrelet adipeux. Si la petite portion du bourrelet adipeux contenant l'épithélium est retirée à l'âge de trois semaines, l'épithélium endogène n'envahira jamais le bourrelet adipeux greffé et le bourrelet est alors considéré comme débarrassé, et le restera à l'âge adulte. Les greffons épithéliaux, toutefois, possèdent la capacité de développer des arbres canaliculaires épithéliaux dans tout le bourrelet hôte débarrassé.

Glande adipeuse. L'histologie peut ensuite être utilisée pour surveiller la progression du développement de la mémoire dans les tissus transplantés provenant d'animaux transgéniques ou d'animaux de test. Bonjour, je m'appelle Joseph Jerry, et je travaille au Département des sciences vétérinaires et animales de l'Université du Massachusetts.

Bonjour, je m'appelle Karen Dunphy. Je travaille au laboratoire de Jerry. Aujourd'hui, nous allons effectuer une greffe d'épithélium mammaire.

Nous utilisons cette procédure pour étudier la base moléculaire et cellulaire de la genèse des tumeurs mémoire et pour modéliser le cancer du sein. Commençons donc. La première étape de la procédure de transplantation consiste à prélever un tissu épithélial mémoire de la souris donneur.

Commencez par laver une souris femelle récemment euthanasiée avec de l'éthanol à 70 % sans percer les membranes des SRU de la cavité abdominale. Effectuez une incision médiane sagittale à travers la peau, de la symphyse pubienne jusqu'au sternum. Ensuite, pratiquez une incision oblique à partir de l'incision initiale au niveau du pubis vers chaque membre postérieur.

À l’aide de pinces courbes, saisir les membranes des SRU. Puis, à l’aide de pinces droites cannelées, saisir le bord coupé de la peau et détacher soigneusement la paroi corporelle des membranes des S cs.

Pour exposer la quatrième glande inguinale associée à la face inférieure de la paroi corporelle, localisez le ganglion lymphatique situé dans la glande mammaire à l'intersection de trois vaisseaux sanguins proéminents ; il peut être perçu au toucher comme un nodule dense au sein du bourrelet adipeux. À l’aide de la pointe d’une paire de ciseaux oculaires, sectionnez délicatement le tissu adipeux entourant le ganglion lymphatique. Ensuite, en appliquant une pression avec l’index sur la face épidermique de la peau, faites émerger le ganglion du bourrelet adipeux et pincez-le pour le détacher.

Avec une paire de forceps courbes, éliminer le ganglion lymphatique. Maintenant, tout en tenant les bords de la peau, saisir le bourrelet adipeux avec le bord courbe d'une paire de forceps courbes et détacher progressivement le bourrelet de la paroi abdominale. En suivant la direction du bourrelet vers la surface dorsale de la souris, retirer complètement la glande mammaire en un seul morceau.

Placer la glande mammaire sur un bloc de découpe en plastique stérile avec une petite quantité de milieu, environ 200 microlitres appliqués à la surface de la glande pour la maintenir humide. Ensuite, hacher finement la glande en morceaux d'un millimètre à l'aide d'un nouveau scalpel. Répartir la glande hachée en quatre portions.

Ensuite, à l’aide de pinces, répartir dans quatre cryotubes contenant le milieu de congélation. Placer les cryotubes dans un congélateur cellulaire Nalgene contenant 250 millilitres d’alcool isopropylique dans le compartiment extérieur. Puis placer le congélateur cellulaire à moins 70 degrés Celsius pendant 24 heures.

Après 24 heures, transférez les cryotubes contenant les fragments de mémoire dans l'azote liquide jusqu'à ce qu'ils soient nécessaires pour la transplantation. Chaque cryotube contient suffisamment de fragments de glandes de mémoire pour être transplantés dans les bourrelets graisseux vidés de quatre à huit souris hôtes. Après avoir vérifié la profondeur de l'anesthésie d'une souris hôte âgée de trois semaines par une pincée ferme du orteil, immobilisez fermement la souris en position dorsale, les membres étendus sur un plateau chirurgical, de manière à ce que son abdomen soit tendu.

Un analgésique préopératoire, la bupivacaïne ou la buprénorphine, doit être administré par voie sous-cutanée. Désinfecter la zone chirurgicale à l’aide d’alcool et d’un antiseptique à base d’iode en utilisant une pince. Saisir la peau à quelques millimètres au-dessus du pelvis et la soulever depuis l’abdomen.

Incisez soigneusement la peau, en veillant à ce que l'incision initiale ne soit pas trop proche de l'urètre, car la pose de clips de plaie pourrait alors gêner la miction de la souris. Ensuite, en prenant soin de ne pas percer les membranes des SRU, effectuez une incision midsagittale à travers la peau, de la symphyse pubienne jusqu'au sternum.

À partir de l'incision initiale, pratiquez maintenant des coupes obliques à travers la peau depuis la ligne médiane en traversant le pelvis vers chaque membre postérieur. À l’aide de pinces courbes, saisissez délicatement les membranes séreuses de la paroi ventrale du corps. Puis, utilisez des pinces à tissus pour saisir la marge découpée de la peau et détacher la paroi corporelle des membranes séreuses.

Pour exposer la quatrième glande inguinale mammaire, identifier la quatrième glande mammaire. Identifier la cinquième glande mammaire, cautériser le nœud du mamelon et les deux artères menant au nœud. Séparer la quatrième et la cinquième glande, puis cautériser la marge de la cinquième glande.

Ensuite, à l’aide de ciseaux, couper transversalement le bourrelet adipeux juste au-dessous du ganglion pour diviser le bourrelet adipeux de la quatrième glande mammaire. À l’aide de pinces courbes, saisir fermement la portion ventrale du bourrelet adipeux et l’écarter de la paroi abdominale. Il est conseillé de comprimer le tissu excisé entre deux lames portant une étiquette et de le fixer dans un fixateur au carnoy.

Ensuite, le tissu peut être coloré, monté et examiné afin de vérifier l'absence de marges tumorales. À l'aide de pinces, éliminer toutes les traces de la glande mnésique autour de la région où la portion de la couche adipeuse a été retirée. L'animal est désormais prêt pour une transplantation tissulaire ou cellulaire.

On peut transplanter du tissu épithélial de donneur frais ou congelé instantanément dans le bourrelet adipeux vidé. Alternativement, on peut transplanter des lignées cellulaires épithéliales immortalisées, des tumeurs mémoire, des lignées cellulaires ou des cellules primaires. Pour plus de détails sur la préparation des cellules, veuillez consulter le protocole écrit accompagnant la transplantation des fragments d'épithélium. Préparé.

Ce vidéo commence par la décongélation d'un flacon cryogénique d'épithélium et le transfert des fragments dans une boîte de Pétri contenant un milieu frais. Pour diluer le DMSO à l'aide de ciseaux, réalisez une poche dans l'épithélium du bourrelet adipeux dégagé de la souris receveuse. Puis, à l'aide de pinces à aiguille, insérez un fragment d'épithélium donneur d'un millimètre de long dans la poche.

S'il est nécessaire, maintenir la poche fermée avec une pince à tissus et retirer la pince à aiguille afin que le tissu reste en place. Saisir les bords opposés de la peau. Les maintenir ensemble avec la pince.

Les soulever loin des membranes céreuses de la cavité corporelle ventrale et refermer avec des agrafes chirurgicales. Utiliser deux agrafes pour fermer l'incision midsagittale et une agrafe pour chaque incision oblique. Éviter d'obstruer l'urètre si nécessaire.

Fermer les éventuels espaces cutanés au niveau de l'intersection des incisions midsagittale et obliques à l’aide d’un point de suture. Placer la souris dans sa cage et maintenir la cage sous une lampe chauffante jusqu’à ce que la souris ait repris connaissance. Les agrafes de fermeture doivent être retirées après deux semaines.

Les diapositives suivantes montrent des images représentatives de ce que l'on peut s'attendre à trouver dans la glande mammaire de l'hôte après le dégagement du bourgeon nourricier et la greffe d'épithélium ; cette image montre l'épithélium mammaire endogène prélevé d'une souris âgée de trois semaines. Lors de la procédure de dégagement de la glande, observez les marges nettes au niveau du bord de section. Un montage complet comme celui-ci doit être préparé après chaque procédure afin d'évaluer la présence de marges dégagées.

Cette image montre le bourrelet adipeux éliminé de la souris sept semaines après la procédure d'élimination. Notez que l'ensemble du bourrelet adipeux est dépourvu de mémoire, d'épithélium, d'hématine et d'asin. La coloration d'un bourrelet adipeux éliminé sept semaines après la procédure d'élimination démontre également que la glande est dépourvue d'épithélium de mémoire.

Un exemple de montage complet d'un bourrelet adipeux clarifié transplanté avec un épithélium mémoire donneur provenant d'une souris âgée de 10 semaines est présenté. Remarquez que l'épithélium transplanté a produit des arbres ductaux épithéliaux normaux, de l'hématine et de l'asin. Coloration d'un bourrelet adipeux clarifié et de l'épithélium mémoire.

La greffe d'épithélium au même âge révèle la production normale de canaux épithéliaux à partir de l'épithélium exogène. Ici, l'hématine et l'asin, coloration d'un bourrelet adipeux éclairci, montrent une greffe épithéliale ayant donné lieu à une tumeur de mémoire. Nous venons de vous montrer comment prélever l'épithélium mammaire et réaliser une greffe d'épithélium mammaire.

Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de sectionner les connexions entre la quatrième et la cinquième glande afin de cautériser le nœud et le mamelon, et d'éliminer toute trace d'épithélium endogène. Vous devez vous assurer qu'il n'existe aucune possibilité que l'épithélium endogène puisse envahir le bourrelet adipeux évidé. En outre, il est conseillé de conserver intacte la totalité de la portion de glande mammaire prélevée afin de vérifier l'absence de marges résiduelles.

Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.