Récupération des ovocytes de souris

Je m'appelle Amanda dli. Je viens du laboratoire du Dr Paul Verana à l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, je vais vous montrer la procédure de prélèvement des ovocytes.

Cela consiste à isoler le videx de la femelle. Une fois les ovex isolés, nous injecterons un milieu FHM à travers le videx, puis les cytes devraient sortir de l'utérus. Une fois cette étape terminée, nous isolerons les cytes dans le milieu et utiliserons ceux-ci pour des expériences futures.

Ce que vous pourriez vouloir utiliser cette procédure pour, en plus de l'isolement des cytes, est l'isolement d'embryons à des points temporels spécifiques. Une raison pour laquelle vous souhaiteriez voir cette procédure en format vidéo est que les différentes parties de l'oviducte peuvent être très difficiles à reconnaître. Dans cette vidéo, je vais indiquer l'infundibulum, où vous allez injecter le milieu FHM.

Les outils de dissection que vous utiliserez sont deux paires de pinces fines et une paire de ciseaux pointus. Les ovaires prélevés chez la femelle seront placés dans du milieu FHM, contenu dans une boîte de culture tissulaire de 35 millimètres. Les œufs seront récupérés à l’aide d’une aiguille de 30 millimètres à extrémité émoussée fixée à une seringue d’un millilitre, et l’uc sera stabilisé à l’aide d’une pince fine.

Le milieu de maintien (FHM) est un milieu utilisé pour recueillir les cellules. Le KSOM est le milieu utilisé pour permettre la croissance des cellules dans l'incubateur si elles sont fécondées. Une fois les ovules et les embryons prélevés du tube oviducte, nous utiliserons une pipette de transfert en verre, fabriquée à partir d'un tube capillaire, munie d'un tube souple, et nous les aspiretons à la bouche vers un milieu de maintien.

Un plat concave en verre est utilisé pour contenir les embryons et les œufs. Ceux-ci peuvent être placés dans chaque cercle concave afin d'être situés en un endroit précis, ce qui facilite leur repérage. Ce plat est placé dans ce récipient afin de pouvoir être mis dans une étuve à CO2 sans utiliser d'huile.

Au-dessus du milieu FHM ou du KSOM, selon le milieu utilisé, on ajoute de l'eau à la base, puis on ferme le robinet afin que le liquide reste en place. On utilise de l'éthanol à 70 % pour s'assurer que les poils ne gênent pas. On effectue une petite incision dans la région abdominale et une incision dans la cavité abdominale.

Nous allons agrandir une incision pour exposer la région abdominale. Une fois cela fait pour mettre l'utérus en évidence, nous déplacerons les intestins, et ensuite l'utérus se trouve bien en dessous. L'utérus a une forme en Y et ils tournent violemment en emportant une partie de l'utérus.

Quand on le coupe, l'oviducte ressemble à des spaghettis. Je vais prélever un fragment de l'oviducte. Je prendrai l'UCT et une partie des ovaires, qui sont entourés de graisse.

L'autre côté va être prélevé. À ce stade, nous allons de nouveau saisir l'ovaire ou l'utérus. Saisissez l'utérus ici, puis coupez en dessous de notre point d'attachement. Les canaux viductaires se trouvent à ce niveau.

Je vais prélever une partie de l'ovaire OV avec nous. Celle-ci sera ensuite placée dans un milieu. L'utérus continue de se contracter.

L'utérus est composé de muscle lisse ; ainsi, même s'il est détaché du corps, les neurones continuent de s'activer. L'utérus est montré ici. Alors que le canal OV ressemble à des spaghettis et que l'ovaire se trouve au-dessus, le canal OV n'est en réalité pas attaché à l'ovaire.

Bien que nous n'ayons montré qu'une partie de l'ovaire à ce stade, ma main dominante est la main droite, avec laquelle je tiens l'aiguille de calibre 30 à extrémité émoussée. Je m'en sers comme d'une pince pour isoler l'in fibula. Une fois cet élément isolé, j'insère l'extrémité émoussée de l'aiguille dans l'in fibula et j'injecte un liquide qui s'écoulera ensuite hors de l'utérus.

Ma main gauche tient une pince fine. Cet outil sert à isoler la fibula et à maintenir l'ensemble en place. L'am dula est une structure en forme de trompette isolée ici.

L'extrémité de mon aiguille se trouve dans le tibia, qui traverse la couche de tissu. Très bien. Pour m'assurer d'avoir isolé tous les embryons et œufs, j'aime comprimer l'utérus comme un tube de dentifrice. Une fois que vous vous concentrez sur les bourrelets graisseux, recherchez des gouttelettes de graisse qui présentent une symétrie parfaite.

Il y en a un juste à gauche de ce long cordon adipeux. C'est un seul œuf. Ce que je vais donc faire, c'est prendre la pipette, prélever l'œuf et le placer dans un autre milieu de conservation afin que nous puissions isoler les œufs eux-mêmes.

Aujourd'hui, je vous ai montré comment isoler les cytes du tractus reproducteur féminin. De plus, je vous ai présenté les différentes structures de l'oviducte. En particulier, l'infundibulum, qui est la seule structure dans laquelle vous pouvez injecter le milieu FHM.

Avec une aiguille de calibre 30. Grâce à cette technique, j'ai isolé des cytes et tous les embryons présents dans le tractus reproducteur femelle. Je peux utiliser ces échantillons pour des études d'expression génique ou des travaux transgéniques.