Name: Hind-Limb orthotopique transplantation chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Découvrez la transplantation orthotopique du membre postérieur chez le rat, modèle standard pour étudier les allotransplantations de tissus composites. Cette méthode permet d'analyser les blessures d'ischémie-reperfusion et les réponses immunologiques.

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Fonctionnement des donateurs et Hind-Limb récolte <ol><li> Pour la procédure opératoire d&#39;un ensemble d&#39;instruments de microchirurgie stériles sont utilisées. Le chirurgien doit porter des vêtements appropriés, y compris des gants stériles, qui doivent être modifiés avant le début de la procédure chirurgicale. </li><li> Le rat est anesthésié par une injection intrapéritonéale de pentobarbital (50mg/kg IP) et placé en décubitus dorsal sur un champ d&#39;opération chauffée, ce qui facilite une température corporelle des animaux stables pendant toute la procédure chirurgicale. </li><li> Avant l&#39;incision de la peau a déposé de l&#39;opération est aseptisée trois fois avec les deux, un désinfectant et de l&#39;alcool. Pour éviter les cornées des animaux de se dessécher, les yeux sont lubrifiés avec une pommade ophtalmique (Vidisic) avant la chirurgie. </li><li> Une incision cutanée est faite à travers l&#39;aine droite à peu près au niveau du ligament inguinal. Les vaisseaux fémoraux sont disséqués avec bipolaire et la dissection; branches profondes sont ligués avec 8-0 soie. </li><li> 300μl (50 UI) d&#39;héparine sont injectées dans la veine du pénis pour l&#39;anti-coagulation. </li><li> Vaisseaux fémoraux sont ligaturées au niveau du ligament inguinal et couper en aval de la ligature. </li><li> Le membre postérieur est rincée avec de la glace-froid (4 ° C) HTK solution (5 ml) par l&#39;artère fémorale de plus de 5 minutes. </li><li> Tous les groupes musculaires sont très divisés avec des ciseaux et une ostéotomie est réalisée avec un électrique tournante vu au niveau du tiers distal du fémur. </li><li> Le membre récolté est ensuite immergée dans 20 ml de solution glacée HTK pour la préservation et de stockage à froid jusqu&#39;à la transplantation. </li></ol> Récipiendaire de fonctionnement et la transplantation <ol><li> Le rat est anesthésié par une injection intrapéritonéale de pentobarbital et placé en position couchée sur le champ opératoire. </li><li> Une incision cutanée est faite à travers l&#39;aine droite à peu près au niveau du ligament inguinal. Les vaisseaux fémoraux sont disséqués avec bipolaire et la dissection. </li><li> Vaisseaux fémoraux sont ligués en distal que possible, mais en amont de la cuve décollage épigastrique. Clamps vasculaires sont placés au niveau du ligament inguinal sur l&#39;artère et la veine. </li><li> Un brassard polyéthylène est tiré sur l&#39;artère (diamètre intérieur du brassard: 0.912 mm, boutons de manchette épaisseur de paroi: 0.010 mm, longueur du brassard: 2,0 mm) et la veine (diamètre intérieur du brassard: 1.151 mm; manchette épaisseur de paroi: 0.010 mm, longueur manchette : 2,0 mm). Le bord de la lumière du vaisseau est alors tiré avec un dilatateur des navires et l&#39;artère et la veine fémorales sont éversée sur tout le corps de la coiffe (environ 2mm) et fixé avec un circonférentielle 8-0 ligature de soie. </li><li> Pour faire place à la branche des bailleurs de fonds du membre destinataire est enlevé avec dissection des groupes musculaires et ostéotomie est effectuée à la mi-fémur. </li><li> Le membre donateur est retirée de la solution HTK et de la transplantation débute avec ostéosynthèse du fémur à l&#39;aide d&#39;une aiguille de calibre 18 (longueur: 1.5-2.0 cm) comme une tige intramédullaire. </li><li> Groupes de muscles ventraux sont étroitement approchée avec Vicryl 4-0 ou Prolène sutures interrompues. </li><li> Anastomoses vasculaires sont réalisées en tirant la veine des bailleurs de fonds et de l&#39;artère de la veine des bénéficiaires et complexe brassard. Un circonférentielle 8-0 ligature de soie est de nouveau placé pour sécuriser l&#39;anastomose. </li><li> La pince est relâchée veineuse suivie par la pince artérielle, et la reperfusion est visualisée par le retour de la couleur à l&#39;extrémité du membre et du pied, ainsi que le flux pulsatile dans l&#39;artère. </li><li> Les autres groupes musculaires dorsales sont ré-approchée avec Vicryl 4-0 ou Prolène sutures interrompues. </li><li> La peau est fermée avec Vicryl 4-0 ou prolène sutures interrompues. </li><li> Le rat receveur est placé sur un coussin chauffant et surveillé de près jusqu&#39;à la guérison. </li><li> Animaux bénéficiaires reçoivent des antibiotiques prophylactiques (céfazoline, 20 mg / jour, IM) et Buprenex (0,1 mg / kg, SC) pendant trois jours après la greffe. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Des décennies de recherches expérimentales ont précédé et permis la transplantation réussie main de l&#39;homme dans le passé récent. En 1978, Shapiro et al. développé un modèle orthotopique postérieurs greffe des membres chez le rat, bien adapté à l&#39;étude de divers aspects pathologiques, physiologiques et immunologiques ainsi que les résultats fonctionnels des greffes de tissus composites. Nous avons modifié la partie la plus difficile de la procédure, à savoir l&#39;anastomose vasculaire, en introduisant une techn...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Héparine Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solution Custodiol HTK</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux pour adventice</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Pinces</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Pinces dilatatrices</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Tubes en polyamide</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

hind-limb orthotopique transplantation chez le rat

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Allotransplantation de tissus composites (ATC) représente désormais une option thérapeutique valable après la perte d&#39;une main, l&#39;avant-bras ou de chiffres et est devenu une entité thérapeutique nouvelle dans la chirurgie reconstructrice. Cependant, à long terme de fortes doses de plusieurs médicaments immunosuppresseurs est nécessaire pour assurer la survie du greffon, portant le risque d&#39;effets secondaires graves qui licols application plus large. Progression de plus dans ce domaine peuvent dépendre meilleure compréhension de l&#39;immunologie fondamentale et de lésions de reperfusion d&#39;ischémie dans les greffes de tissus composites. À ce jour, la transplantation orthotopique des membres postérieurs chez le rat a été le modèle de rongeur préféré pour la reconstruction de transplantation (RT), cependant, il est une procédure extrêmement exigeant qui demande des compétences de microchirurgie extraordinaire pour le rattachement de la vascularisation, les os, les muscles et les nerfs. Nous avons introduit la technique de la coiffe des anastomosés à ce modèle, offrant une approche rapide et fiable à la transplantation chez le rat des membres postérieurs. Cette technique simplifie et raccourcit la procédure chirurgicale et permet aux chirurgiens ayant l&#39;expérience de microchirurgie de base pour réaliser avec succès l&#39;opération avec la survie élevé et faible taux de complications. La technique semble être bien adapté pour immunologiques ainsi que l&#39;ischémie reperfusion (IRI) des études.

Nous décrivons ici le rat procédure de transplantation orthotopique arrière-membre, ce qui semble être l&#39;étalon-or<em&gt; In vivo</em&gt; Modèle pour la recherche sur les tissus allotransplantation composite.

Hind-Limb orthotopique transplantation chez le rat

L'allotransplantation de tissus composites (ATC) représente désormais une option thérapeutique viable après la perte d'une main, d'un avant-bras ou de doigts, et est devenue une nouvelle...

Je suis Robert Suha du laboratoire de recherche Daniels Roski du Département de chirurgie viscérale, de transplantation et de chirurgie thoracique de l'Université médicale d'Innsbrook. Aujourd'hui, nous allons vous montrer la procédure de transplantation de membre chez le rat, en introduisant une technique de manchon pour la revascularisation. Cette chirurgie de transplantation de membre chez le rat est réalisée par nos chirurgiens résidents, dont je fais partie.Nous utilisons ce modèle animal pour étudier les lésions associées à l'ischémie et à la reperfusion dans une greffe allogénique de tissu composite. De plus, nous utilisons cette procédure pour étudier les événements immunologiques liés au rejet de greffe allogénique de tissu composite, ainsi que les stratégies permettant d'empêcher ce rejet. Ces stratégies incluent la réduction, voire l'éviction, de l'immunosuppression d'entretien grâce à l'utilisation de protocoles immunomodulateurs ciblés.La procédure de transplantation de la patte postérieure rouge commence par la récolte de la greffe de tissu composite du donneur, au cours de laquelle la patte postérieure droite est prélevée sur le rat donneur et conservée sur de la glace. Ensuite, la patte postérieure droite est retirée du rat receveur afin de faire de la place pour la patte du donneur. La patte du donneur est alors retirée de la glace et transplantée sur le rat receveur.Dans ce modèle, les anastomoses vasculaires sont réalisées à l'aide d'une technique par manchon. Pour nos expériences, des rats mâles Louis Reds pesant 250 grammes ont été utilisés. L'anesthésie a été induite par une injection intrapéritonéale de pentobarbital à raison de 50 milligrammes par kilogramme.Le rat anesthésié est épilé et désinfecté au niveau de l'aine et du pénis flasque pour la procédure. Un ensemble complet d'instruments microchirurgicaux est nécessaire, comprenant des ciseaux microchirurgicaux droits, des dilatateurs de vaisseaux et deux pinces courbes. En outre, les instruments les plus importants sont les pinces microchirurgicales pour vaisseaux montrées ici.Pour tester la profondeur de l'anesthésie, on utilise le réflexe de pincement des orteils. Le rat est placé sur une plateforme stérile et fixé avec les quatre membres en extension complète avant l'incision. Le membre est dégagé de tout axe présent afin d'éviter toute contamination.Une incision est pratiquée au niveau du pli de l'aine droit, environ au niveau du ligament inguinal. Les vaisseaux fémoraux apparaissent immédiatement sous la peau et sont disséqués à l’aide d’un bistouri bipolaire et d’une dissection émoussée. Les vaisseaux épigastriques sont ensuite libérés par dissection et cautérisés.Un point de suture simple en boucle est placé autour de la veine et de l'artère afin d'assurer une traction sans manipuler directement les vaisseaux avec des instruments après leur dissociation. Les branches profondes de l'artère et de la veine sont ligaturées par un fil de soie 8/0 en position proximale et cautérisées en position distale avant la récolte du membre donneur. 50 unités d'héparine sont administrées par voie veineuse pénielle.Après une minute, l'attention est reportée sur les vaisseaux fémoraux. L'artère fémorale est ligaturée aussi précisément que possible à l'aide de fil de soie 8/0, et la même procédure est répétée pour la Vf. Les deux vaisseaux sont ensuite sectionnés en direction distale par rapport à la ligature, et le membre postérieur est perfusé par l'artère avec une solution HDK froide héparinée pendant cinq minutes.Ensuite, tous les groupes musculaires sont soigneusement divisés à l’aide de ciseaux. L’ostéotomie est réalisée à l’aide d’une scie électrique rotative au niveau du tiers distal du fémur. Le membre prélevé est ensuite immergé dans 20 millilitres de solution HDK glacée pour sa préservation et son stockage au froid jusqu’à la transplantation.L'opération du receveur commence de manière similaire à celle du donneur, par l'isolement et la dissection des vaisseaux fémoraux. Après une dissection minutieuse, les vaisseaux sont ligaturés à l'aide d'un fil de soie 8/0 aussi distalement que possible, mais en position proximale par rapport à l'origine des vaisseaux épigastriques. Nous procédons ensuite au montage de la veine du receveur en faisant glisser le manchon en polyligne sur le vaisseau.Une pince à une seule branche est appliquée en position proximale par rapport au manchon, au-dessus de la veine et de la poignée du manchon, afin d'assurer une hémostase complète. La ligature située à l'extrémité distale de la veine est coupée, puis la veine est retournée par-dessus le manchon. Une ligature en forme de huit est nouée de façon circulaire autour du vaisseau et du manchon, fixant ainsi la veine du receveur en place.La même procédure exacte est réalisée pour l'artère munie du manchon de diamètre inférieur. Le membre receveur est disséqué de manière similaire au membre donneur, avec une dissection précise des groupes musculaires et une ostéotomie pratiquée au milieu du fémur. Nous sommes maintenant prêts à transplanter le membre postérieur.Le membre donneur est retiré de la solution HDK. La transplantation commence par l'ostéosynthese du fémur à l'aide d'une aiguille de calibre 18 servant de tige intramédullaire. La pointe est coupée et l'aiguille restante est sectionnée à une longueur d'un centimètre et demi à deux centimètres.Les groupes musculaires ventraux sont rapprochés étroitement à l’aide de quatre sutures séparées en Vicryl ou en proline afin de stabiliser le membre et de préparer l’anastomose vasculaire. Pour l’anastomose par manchon, la veine du donneur est dilatée, tirée par-dessus la veine et le manchon du receveur, puis fixée à l’aide d’une autre ligature périphérique de huit points. La même procédure est réalisée pour l’artère du donneur.Enfin, une fois que les deux vaisseaux sont stables, on relâche d'abord la pince veineuse, puis la pince artérielle. La reperfusion est immédiate et facilement visible par la récupération de la couleur du membre distal et du pied, ainsi que par un flux pulsatile dans l'artère. Les groupes musculaires dorsaux restants sont alors réapproximés.La peau est fermée par quatre points séparés en Vicryl ou en proline, et la greffe est terminée. Postopératoirement, le rat est maintenu au chaud sur un coussin chauffant, et des analgésiques ainsi que des antibiotiques sont administrés. Le rat est surveillé attentivement pendant 48 à 72 heures afin de détecter tout signe de détresse ou de complications chirurgicales.La technique de l'anneau pour la réanastomose a été largement utilisée dans divers domaines de recherche chirurgicale au cours des dernières décennies, allant des modèles de transplantation rénale chez les marins aux modèles de transplantation cardiaque hétérotopique. Elle permet d'étudier divers aspects de la chimie, des lésions associées à la reperfusion, ainsi que des phénomènes immunologiques. Après notre transplantation.Ici, nous présentons la première application de cette technique de manchon unique à la transplantation de tissus composites de membre. Dans un modèle animal de petite taille, la technique de manchon réduit de manière significative la durée opératoire, le niveau d'expertise microchirurgicale requis par l'opérateur et la perte sanguine peropératoire, par comparaison avec les techniques de suture conventionnelles pour l'anastomose.

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