Préparation pulmonaire de souris pour la cytométrie en flux : génération d’une suspension cellulaire à partir de tissu pulmonaire pour l’analyse par cytométrie en flux

- Commencez par prendre une souris euthanasiée et fixez-la sur une planche de dissection avec du ruban adhésif de laboratoire. Utilisez des ciseaux pour ouvrir la peau. Faites une incision verticale à travers le diaphragme et coupez les côtes pour atteindre la cavité thoracique, exposant le cœur et les poumons. Ensuite, faites une petite incision dans le ventricule gauche du cœur. Par la suite, localisez le ventricule droit et insérez une seringue contenant du PBS dans la lumière du ventricule. Perfuser le PBS à travers le ventricule droit, laissant le sang s’écouler de l’incision prédéfinie au ventricule gauche jusqu’à ce que les poumons deviennent blancs. Retirez le tissu pulmonaire contenant les nodules tumoraux et coupez-le en petits morceaux.

Incuber les morceaux dans le tampon de digestion pulmonaire. La collagénase dans le tampon de digestion pulmonaire aide à isoler les cellules, et l’ADN aide à éliminer l’ADN des cellules mortes. Filtrez la suspension résultante à travers une crépine cellulaire pour éliminer les grumeaux et uniformiser la suspension cellulaire. Centrifugez et mettez à nouveau en suspension la pastille dans le tampon de chlorure d’ammonium et de potassium p