Coloration immunofluorescente des sphéroïdes : une technique pour analyser les sphéroïdes pour l’expression de l’expression intra- et extracellulaire de l’antigène

- Les sphéroïdes sont des modèles de culture cellulaire in vitro tridimensionnels. Pour la coloration immunofluorescente, générez d’abord une culture de sphéroïdes du type cellulaire requis dans une plaque multipuits. À l’aide d’une micropipette à pointe à large orifice, prélevez les sphéroïdes en prenant soin d’éviter les ruptures dues aux forces de cisaillement.

Ensuite, fixez et perméabilisez les sphéroïdes pour rendre les cellules individuelles perméables. Maintenant, incubez avec une solution contenant des protéines pour bloquer les sites d’interaction protéiques non spécifiques à la surface de la cellule. Traitez les sphéroïdes avec un cocktail d’anticorps primaires souhaité. Incuber pour que les anticorps se lient aux molécules cibles à la surface de la cellule.

Ensuite, marquez les sphéroïdes avec une solution d’anticorps secondaires marquée par fluorescence spécifique aux anticorps primaires. Enfin, traitez les sphéroïdes avec un colorant fluorescent de liaison à l’ADN approprié pour colorer les noyaux cellulaires. À l’aide d’un microscope à fluorescence à balayage laser, imagez plusieurs sections efficaces optiques du sphéroïde dans différents plans optiques.

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