Dosage de la formation de sphères : une méthode in vitro pour identifier les cellules souches du cancer du pancréas et dépister les thérapies

- L’adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC) contient un sous-ensemble de cellules souches cancéreuses (CSC) exclusivement tumorigènes. Les CSC sont auto-renouvelables, pluripotents et capables de former des tumeurs. Ils expriment des protéines anti-apoptotiques et contiennent également des gènes multirésistants, ce qui les rend résistants à la chimiothérapie. Pour identifier les cellules souches cancéreuses et étudier l’effet des médicaments sur celles-ci, nous effectuons un test de formation de sphères.

Tout d’abord, suspendez les cellules souches cancéreuses extraites dans le milieu de culture cellulaire souhaité. Ensuite, ensemencez la suspension cellulaire dans une plaque multi-puits et incubez pendant la durée souhaitée. Ajoutez une quantité requise de médicament d’intérêt dans quelques puits et un placebo dans d’autres puits comme contrôle négatif. Incuber les cellules pendant la durée souhaitée. Les cellules souches cancéreuses forment des colonies en forme de sphère dans un environnement de culture non adhérent.

Après l’incubation, pipetez une petite quantité de suspension cellulaire sur un hémocytomètre et placez-la dans un compteur de cellules automatisé. Maintenant,