Name: In vivo la micro-circulation de mesure dans le muscle squelettique par voie intra-vitale microscopie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Découvrez une méthode de microscopie intravitale pour mesurer la microcirculation dans le muscle squelettique. Cette technique permet l'observation continue du flux sanguin capillaire et des paramètres hémodynamiques chez l'animal vivant.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous tenons à remercier JW Lichtman pour ses conseils en observation in vivo de muscles.

Coloration de la membrane de RBC <ol><li> Cellules rouges du sang de souris ont été corrigées à partir de la souche de souris même avec héparinisation. </li><li> Souris RBC ont été colorés avec PKH26 colorant (551/567 nm; rouge kit fluorescentes linker cellulaire, Sigma, USA). </li><li> RBC ont été lavés dans du PBS et incubées avec une solution de 2 pm PKH26 colorant pendant 5 minutes à température ambiante. La réaction a été stoppée par l&#39;addition de plasma (inactivé par la chaleur pendant 1 heure à 65 ° C à l&#39;avance) et incubées pendant 1 minute. </li><li> Les vitraux de RBC ont été lavées 5 fois avec du PBS. </li></ol> Préparation de la souris <ol><li> Trois à six mois masculine C57BL/10 souris ont été utilisées dans cette étude. Nous souris anesthésiés par injection intrapéritonéale de pentobarbital (50mg/kgBW). </li><li> Souris ont ensuite été intubé avec un tube de polyéthylène 20-Gage, ventilé mécaniquement et chauffé à 37 ° C sur un chauffe-feuille de Kapton relié à un capteur à thermocouple et contrôleur de système rétroaction de la température. </li><li> La face ventrale du cou a été rasé. Les muscles sterno-droite et de gauche ont été exposés. Les muscles ont été soutenus par un support en acier inoxydable et perfusées avec stériles Krebs Ringer solution. </li></ol> Injection <ol><li> Globules rouges colorées ont été réchauffée à 37 ° C, dilué avec de Krebs Ringer. 50ul de vitraux RBC (hématocrite de 12%) a été injecté dans la souris dans la veine du pénis. </li></ol> Dans l&#39;observation microscopique in vivo des muscles squelettiques Nous avons suivi la méthode de Jeff W. Lichtman &#39;s avec modification 1: <ol><li> Les animaux ont été placés sur un coussin chauffant au-dessus d&#39;un stade de fer fait à la main d&#39;un Nikon Eclipse-800 microscope. Eau-trempage des lentilles d&#39;objectif ont été utilisés pour vivre épi-fluorescence observation. Nous avons observé l&#39;intérieur teinté PKH26 RBC écoulement du vasculaires sous la lumière fluorescente d&#39;une lampe au mercure. Nous avons identifié les artérioles primaire, secondaire, artérioles, capillaires et les veines de leurs directions d&#39;écoulement des globules rouges et les architectures. </li><li> Une caméra SIT intensifié (Hamamatsu Photonics, C2400, Japon) et la vidéo-frame grabber ont été installés pour capter le signal de faible intensité à la cadence vidéo en temps réel (30 images par seconde). Les images ont été enregistrées sur un DVD sous forme de fichiers vidéo. </li></ol> Stimulation musculaire <ol><li> Une impulsion électrique est généré en utilisant un stimulateur nerveux périphérique (Innervator 252, Fisher &amp; Paykel Healthcare, la Nouvelle-Zélande), et livrés à la surface musculaire via une sonde revêtement inoxydable. Une extrémité de la sonde minus a été placé sur la partie proximale du muscle et une fin plus a été placé sur la partie distale du muscle. Stimulations tétanos ont été donnés au taux de 50Hz pendant 5 secondes. Les stimuli électriques ne causent pas de dommages fibres musculaires direct sur le voisinage de la surface de contact. </li></ol> RBC flux de l&#39;analyse <ol><li> Enregistré images vidéo de DVD ont été transférés les fichiers vidéo via un logiciel d&#39;image Savant frame grabber (Video Savant, USA). Les images vidéo ont été examinés dans la vitesse ajustée afin de visualiser différents teinté RBC. RBC flux est mesuré par comptage de RBC, qui volait à travers une artériole concentré primaires par minute. </li></ol>

<ol><li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).</li>
</ol>

Toutes les procédures liées à l&#39;expérimentation animale ont été examinés et approuvés par le Sous-Comité de protection des animaux de recherche du Massachusetts General Hospital.

Parmi les points techinical sont comme suit: (1) maintien de l&#39;état physiologique de l&#39;animal (aération, pH de la solution de la température du corps perfusative,), le volume d&#39;injection (2) de l&#39;tachés de RBC, et (3) les conditions d&#39;observation (optique optimale sélection, l&#39;intensité de fluorescence). Applications potentielles futures sont les suivants: (a) combinaison avec pharmacophysiological et / ou moléculaires interventions biologiques, (b) observation à long terme des artério / artériolo-sclérose et de la n...

<table><tbody><tr><td>Tissu PKH26 </td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>551/567 nm ; kit de marquage cellulaire fluorescent rouge</td></tr><tr><td>Souris C57BL/10 </td><td>Animal</td><td></td><td></td><td>Mâles âgés de trois à six mois</td></tr><tr><td>Pentobarbital </td><td></td><td></td><td></td><td>Anesthésique, 50 mg/kg de poids corporel, i.p.</td></tr></tbody></table>

in vivo la micro-circulation de mesure dans le muscle squelettique par voie intra-vitale microscopie

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

CONTEXTE: Les facteurs réglementaires et de la physiologie de la microcirculation détaillée des vivo sont restés pas totalement clarifiée après de nombreuses différentes modalités d&#39;imagerie avait inventé. Alors que de nombreux paramètres macroscopiques de l&#39;écoulement sanguin reflète la vitesse d&#39;écoulement, des changements dans la vitesse d&#39;écoulement du sang et de globules rouges (GR) de flux ne tient pas de relation linéaire dans les observations microscopiques. Il ya des rapports de divergence entre RBC et RBC vitesse de flux, de flux et le volume de RBC flux de plasma, et de l&#39;hétérogénéité spatiale et temporelle de la régulation du débit dans les tissus périphériques dans les observations microscopiques, une base scientifique pour l&#39;exigence d&#39;études plus détaillées en matière de réglementation microcirculatoire aide microscopie intravitale. Méthodes: Nous avons modifié la méthode de Jeff Lichtman de l&#39;observation microscopique in vivo dans des muscles sterno-souris. Les souris sont anesthésiées, aéré, et injecté avec PKH26L-fluorescence globules rouges marqués pour l&#39;observation microscopique. RESULTAT ET CONCLUSIONS: globules rouges marqués par fluorescence sont détectées et distinguées ainsi par un microscope à champ large. La contraction musculaire provoquée par augmentation de la stimulation électrique induite dans le flux de RBC. Quantification des autres paramètres, y compris la vitesse de RBC et de la densité capillaire étaient réalisables. Souris bien toléré la chirurgie, injection de globules rouges colorés, l&#39;observation microscopique, et la stimulation électrique. Aucun muscle ou endommager les vaisseaux sanguins a été observée, suggérant que notre méthode est relativement moins invasive et adaptée aux observations à long terme.

Une nouvelle méthode polyvalente pour l&#39;observation de la microcirculation est présenté. Il est considéré comme convenable pour observation à long terme, et pour la combinaison avec pharmacophysiological ou moléculaire interventions biologiques.

In vivo la micro-circulation de mesure dans le muscle squelettique par voie intra-vitale microscopie

CONTEXTE : Les facteurs de régulation et la physiologie détaillée de la microcirculation in vivo ne sont pas encore pleinement élucidés, malgré l'utilisation de nombreuses modalités différentes de...

Bonjour, je m'appelle Aki, chercheur associé à la Harvard Medical School, au Massachusetts General Hospital. Dans ce journal vidéo, je vais présenter une nouvelle méthode de microscopie in vivo. Grâce à cette technique, nous pouvons mesurer quantitativement le débit sanguin dans la microcirculation.Le but de notre expérience est de mettre en place un système de mesure continue de la microsécrétion in vivo. Nous avons conçu ce projet afin de visualiser le flux sanguin au niveau des capillaires et de l'antérieur des muscles d'un animal vivant au microscope, comparé à la méthode classique de mesure ionique in vivo telle que l'échographie sanguine ou la tension en oxygène ; notre méthode permettra la mesure de plusieurs paramètres du flux sanguin, à savoir le flux des globules rouges, la vitesse d'obésité et le flux plasmatique. La mesure de ces paramètres permettra de révéler en détail les modifications de la microcirculation.Ensuite, notre méthode est appliquée pour détecter les changements du débit sanguin en réponse à une stimulation physiologique dans des tissus musculaires vivants. Notre méthode est plus simple et moins invasive que la microscopie conventionnelle in vivo, ce qui

in-vivo-micro-circulation-measurement-skeletal-muscle-intra-vital

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Microscopie intravitale à suivre spatiale et temporelle des événements hémodynamiques et inflammatoires dans la microcirculation piales.

Microscopie intravitale de la microcirculation cérébrale souris en utilisant une fenêtre fermée crânienne

La couche de surface endothéliale glycocalyx / endothéliale est idéalement étudiées par microscopie intravitale. Microscopie intravitale est techniquement difficile dans un organe en mouvement, comme le poumon. Nous montrons comment fond clair simultanée et la microscopie à fluorescence peut être utilisée pour estimer endothéliale épaisseur de la couche de surface dans un mouvement...

La mesure in vivo de la surface de la couche de souris pulmonaire endothéliale

Dans cet article, nous présentons une méthode pour analyser les microvaisseaux tumoraux in vivo en utilisant la fluorescence dynamique vidéomicroscopie de contraste amélioré. Deux paramètres quantitatifs ont été acquises: densité capillaire fonctionnelle réfléchissant la vascularisation de la tumeur, et les fuites d'index reflétant la perméabilité de la paroi endothéliale.

Dans l&#39;imagerie in vivo de angiogenèse tumorale en utilisant la fluorescence confocale vidéomicroscopie

Microscopie intravitale de la microcirculation souris crémaster M. offre un service unique et bien normalisé modèle in vivo pour l'analyse de la moelle osseuse migration de cellules souches périphériques.

Microscopie intravitale de la microcirculation dans le muscle de souris Cremaster pour l&#39;analyse des souches périphériques migration cellulaire

Cet article présente une méthode détaillée pour la mesure dynamique et la quantification de la vitesse du flux sanguin dans les vaisseaux sanguins individuels du système vasculaire hépatique de la souris à l’aide de l’imagerie par microscopie intravitale en combinaison avec une méthodologie spécifique pour l’acquisition et l’analyse d’images.

Microscopie intravitale imagerie du foie suivante<em&gt; Leishmania</em&gt; Infection: Une évaluation de l&#39;hémodynamique hépatiques

Cette méthode décrit l’utilisation de la microtomodensitométrie quantique (MicroCT) pour évaluer la morphologie, la fonction, la perfusion, le métabolisme et la viabilité cardiaques avec un agent de contraste iodé chez des souris atteintes d’ischémie myocardique induite expérimentalement. La technique peut être appliquée pour l’imagerie longitudinale in vivo non destructive à haut débit de divers modèles animaux de maladies cardiaques humaines.

In Vivo évaluation quantitative de la structure du myocarde, Fonction, perfusion et la viabilité utilisant la tomographie cardiaque Micro-calculées

Vasodilatation induite par l’insuline régule la perfusion musculaire et augmente la microvasculaire surface habitable (recrutement microvasculaire) disponible pour échange soluté entre interstitium de sang et de tissus. La microscopie intravitale combinée et échographie de contraste accentué est présenté Evaluer simultanément l’action de l’insuline à des gros vaisseaux et la microcirculation in vivo.

Combiné la microscopie intravitale et échographie de contraste accentué des membres postérieurs souris pour étudier la vasodilatation induite par l’insuline et la Perfusion du Muscle

Vidéomicroscopie systèmes sont utilisés pour étudier les propriétés fonctionnelles des artérioles isolée du tissu adipeux en réponse à des stimuli physiologiques et pharmacologiques. Cette technique permet d’examiner des phénotypes microvasculaires dans des domaines différents du tissu adipeux chez les humains obèses.

Évaluation de la fonction microvasculaire tissu adipeux humain en utilisant la vidéomicroscopie

Nous décrivons ici une approche simple et non invasif, à l’aide de la spectroscopie proche infrarouge pour évaluer l’hyperémie réactive, couplage neurovasculaire et la capacité oxydative du muscle squelettique en une seule visite clinique ou un laboratoire.

Couplage neurovasculaire Muscle squelettique, la capacité oxydative et microvasculaire fonction avec « One Stop Shop » de spectroscopie proche infrarouge

Le présent protocole décrit des détails expérimentaux concis sur l’évaluation et l’interprétation des données de couple in vivo obtenues par stimulation électrique du nerf péronier commun chez les porcs anesthésiés.

In vivo Mesure du couple isométrique du dorsiflexeur des membres postérieurs du porc

La microscopie à fluorescence intravitale peut être utilisée pour étudier les interactions leucocytaires-endothéliales et la perfusion capillaire en temps réel. Ce protocole décrit des méthodes pour imager et quantifier ces paramètres dans la microcirculation pulmonaire à l’aide d’un système d’imagerie pulmonaire stabilisé sous vide.

Microscopie à fluorescence intravitale à grand champ de la microcirculation pulmonaire dans une lésion pulmonaire aiguë expérimentale à l’aide d’un système d’imagerie stabilisé sous vide

Découvrez une méthode de microscopie intravitale pour mesurer la microcirculation dans le muscle squelettique. Cette technique permet l'observation continue du flux sanguin capillaire et des paramètres hémodynamiques chez l'animal vivant.

In vivo la micro-circulation de mesure dans le muscle squelettique par voie intra-vitale microscopie

Explorer plus de vidéos