Name: Le maintien de Wolbachia dans la cellule sans moyen (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Découvrez la purification de Wolbachia pipientis à partir de cellules d'Anopheles gambiae par lyse aux billes de verre et centrifugation différentielle. Cette méthode permet d'obtenir des bactéries viables pour des études en biologie des vecteurs.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

le maintien de wolbachia dans la cellule sans moyen

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

Dans ce protocole vidéo, des procédures sont mises en évidence (1) d&#39;épurer les symbiotes Wolbachia hors des cellules de moustique cultivé, (2) utiliser un test de fluorescence pour déterminer la viabilité de la bactérie Wolbachia purifiée et (3) maintenir les Wolbachia désormais extracellulaire dans la cellule du milieu sans . Purifié par Wolbachia rester en vie dans la phase extracellulaire mais ne répliquent pas jusqu&#39;au re-inoculée dans les cellules eucaryotes. Wolbachia extracellulaires purifiés de cette manière restera viable pour au moins une semaine à température ambiante, et peut-être plus. Purifié par Wolbachia sont adaptés à la micro-injection, extraction d&#39;ADN et d&#39;autres applications.

Cette vidéo décrit un procédé de purification Wolbachia pipientis partir d&#39;une ligne de cellules Anopheles gambiae et la culture de la endosymbiote dans la cellule sans moyen. Un test pour la viabilité de la bactérie est démontrée.

Le maintien de Wolbachia dans la cellule sans moyen

Dans ce protocole vidéo, les procédures sont démontrées pour (1) purifier les symbiontes Wolbachia à partir de cellules de moustiques cultivées, (2) utiliser un essai fluorescent pour...

Je m'appelle Courtney Ston. Je travaille à la faculté de santé publique Johns Hopkins Bloomberg, dans le laboratoire du Dr Jason Rascon. Aujourd'hui, nous allons effectuer une purification bactérienne à partir de cellules d'insectes en culture.Il s'agit en réalité d'une procédure très simple. Nous commençons par récolter nos cellules, puis nous rompons physiquement les membranes des cellules hôtes eucaryotes par lyse avec des billes de verre. Ensuite, nous utilisons une centrifugation différentielle pour séparer les bactéries des débris cellulaires de l'hôte.Ensuite, nous utilisons une série d'étapes de filtration pour éliminer davantage les particules des cellules hôtes afin que, à la fin, il ne reste que le culot bactérien purifié. C'est en réalité l'une des principales exigences. Il s'agit d'une hotte de culture cellulaire, utilisée pour maintenir des conditions stériles, car les cultures cellulaires sont particulièrement sensibles à la contamination.Nous avons également besoin de milieu de culture cellulaire, des cellules elles-mêmes que nous cultivons dans des flacons en plastique. Nous avons également besoin de billes de soufflage de trois millimètres, de tubes coniques de 50

maintaining-wolbachia-in-cell-free-medium

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wolbachia infection bactérienne chez la drosophile

Quantitatifs et automatisé à haut débit du génome à l&#39;échelle écrans ARNi dans C. elegans</em

Isolation vampirique de fluide extracellulaire d&#39;<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Cette vidéo présente une méthode permettant d’isoler et de cultiver stérilement des cellules embryonnaires de C. elegans  in vitro.

Digestion enzymatique et dissociation manuelle : une méthode pour préparer les embryons de C. elegans pour la culture cellulaire

C. elegans est généralement cultivées sur des plaques de gélose solide ou dans des cultures liquides ensemencés avec E. coli. Pour éviter des sous-produits bactériens de confondre les études toxicologiques et nutritionnels, nous avons utilisé un milieu liquide axénique, CEHR, de croître et de synchroniser un grand nombre de vers pour une gamme d'applications en aval.

Culture Caenorhabditis elegans En Axenic Liquid Media et création d'transgéniques Worms par bombardement de microparticules

Les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia sont libérés dans les populations naturelles de supprimer la transmission des arbovirus. Nous décrivons des méthodes arrière Ae. aegypti Wolbachia infections en laboratoire pour des expériences et sortie de terrain, prendre des précautions pour réduire au minimum la sélection et l’adaptation de laboratoire.

Maintenir les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia

Ce protocole décrit comment établir une infection virale in vivo chez Drosophila melanogaster en utilisant la méthode de nano-injection et les techniques de base pour analyser l’interaction virus-hôte.

Mise en place d’une Infection virale et analyse de l’Interaction hôte-Virus chez Drosophila Melanogaster

Quatre méthodes ont été utilisées pour détecter les Wolbachia intracellulaires, qui se complétaient et amélioraient la précision de la détection de l’infection à Wolbachia de aa23 dérivé d’Aedes albopictus et de l’Aa23-T guéris de l’infection native de Wolbachia à l’aide d’antibiotiques.

Détection de la souche wAlbB de Wolbachia dans les lignées cellulaires d’Aedes albopictus

Un protocole optimisé pour la culture de nématodes individuels isolés sur des milieux solides dans des dispositifs multipuits microfabriqués est présenté ici. Cette approche permet de surveiller chaque animal tout au long de sa vie pour une variété de phénotypes liés au vieillissement et à la santé, y compris l’activité, la taille et la forme du corps, la géométrie du mouvement et la survie.

Culture à long terme et surveillance de Caenorhabditis elegans isolés sur des milieux solides dans des dispositifs multipuits

Ici, nous présentons un protocole de culture de nématodes individuels isolés sur des milieux solides pour le suivi des paramètres physiologiques tout au long de la vie et la quantification de la fluorescence. Ce système de culture comprend une barrière d’acide palmitique autour des puits à ver unique pour empêcher les animaux de fuir, ce qui permet l’utilisation d’interventions aversives, y compris des bactéries pathogènes et des facteurs de stress chimiques.

Culture à long terme de Caenorhabditis elegans individuelle sur milieu solide pour la surveillance longitudinale de la fluorescence et les interventions aversives

Les lignées cellulaires sont utiles dans les études sur les organismes intracellulaires qui ne peuvent pas être cultivés en dehors de leurs cellules hôtes. Bien que les lignées infectées par Wolbachia aient permis de nombreuses découvertes, l’hétérogénéité au sein de ces lignées peut conduire à des résultats expérimentaux variables. Nous présentons un protocole pour générer des clones unicellulaires et des cultures continues à partir de cellules JW18 infectées par Wolbachia.

Génération de cultures monoclonales à partir de la lignée cellulaire de Drosophila melanogaster JW18 infectée par Wolbachia

Découvrez la purification de Wolbachia pipientis à partir de cellules d'Anopheles gambiae par lyse aux billes de verre et centrifugation différentielle. Cette méthode permet d'obtenir des bactéries viables pour des études en biologie des vecteurs.

Le maintien de Wolbachia dans la cellule sans moyen

Explorer plus de vidéos