Name: Induction et notation clinique de chronique récurrente encéphalomyélite allergique expérimentale (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Découvrez l'induction et la notation clinique de l'encéphalomyélite allergique expérimentale chronique récurrente chez les rats DA. Cette méthode permet d'étudier la sclérose en plaques et d'évaluer la progression de la maladie.

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L&#39;induction et la surveillance des maladies chroniques récurrente EAE L&#39;émulsion est un mélange 1:1 de l&#39;antigène en solution aqueuse ajoutée à compléter l&#39;adjuvant complet de Freund. Il est très important d&#39;ajouter l&#39;antigène à l&#39;adjuvant et non l&#39;inverse! Il ya beaucoup de déchets lors de l&#39;injection et une émulsion. Toujours préparer 1,5 ou 2 fois plus que ce dont vous avez besoin. Utiliser le mortier autoclavés, pilon, seringues en verre, et les ponts. Tous les plastiques doivent être stériles. La préparation peut être faite sur une paillasse de laboratoire régulières. 1. Préparation de l&#39;adjuvant complété Peser 30 mg de Mycobacterium tuberculosis (catalogue # 231141 Difco) et mettre dans un mortier. Faire en poudre fine sans appuyer trop fort pour éviter de casser les bactéries. Ajouter 10 ml d&#39;adjuvant complet de Freund H37Ra (Difco catalogue # 231131) et mélanger. Cet adjuvant contient maintenant complété 4 mg / ml de Mycobacterium tuberculosis. Transférer dans un tube. 2. Préparation de l&#39;homogénat de la moelle épinière Recueillir la moelle épinière des rats de DA (âge / sexe indifférent) et de conserver congelés à -80 ° C. Peser les cordons congelés épinière d&#39;avoir assez pour mélanger 1:1 (poids: volume) avec l&#39;adjuvant complété. Emincez les moelles épinières aussi fine que possible avec une lame de rasoir, le transfert au mortier utilisé dans la section 1, et faire une pâte avec le pilon. 3. Préparation de l&#39;émulsion <ol><li> Placez complété adjuvant complet de Freund dans un tube. Vortex à vitesse élevée. Ajouter la chute de la moelle épinière homogénat à goutte tout en vortex. Lorsque tous les homogénat de la moelle épinière est ajouté, vortex pendant 5 minutes. Le mélange doit tourner rose pâle. </li><li> Mettez l&#39;émulsion dans une seringue de 5 ml en verre et le lier à une autre seringue en verre de 5 ml à l&#39;aide d&#39;un pont 18G (catalogue Fisher n ° 14-825-17L). Envoyer l&#39;émulsion d&#39;une seringue à l&#39;autre jusqu&#39;à ce qu&#39;il devienne dur (5-10 min). Si plus de 5 ml d&#39;émulsion est préparée, l&#39;utilisation de plusieurs seringues de 5 ml NE PAS utiliser de plus grandes seringues. </li><li> L&#39;émulsion peut être stockée dans les seringues à 4 ° C pendant 3 semaines. Je recommande le préparer au moins 12 heures à l&#39;avance pour vérifier qu&#39;il ne se décompose pas. Il devrait rester épaisse et non séparée en 2 phases. La couleur va changer du jour au lendemain d&#39;une lumière jaune ou beige. </li></ol> 4. L&#39;immunisation des rats <ol><li> Mélanger l&#39;émulsion dans les seringues pendant quelques minutes et le transfert à la seringue utilisée pour l&#39;injection. Injecter 200 pi sous-cutanée à la base même de la queue à l&#39;aide d&#39;aiguilles 23G et 3 ml Luer-Lock seringues sous anesthésie de courte durée. </li><li> Les récipiendaires sont 7-9 semaines vieilles femelles rats DA. Nous obtenons nos rats de Harlan-Sprague-Dawley. </li><li> Les rats doivent être observées deux fois par jour et pesés quotidiennement. Les signes cliniques sont attendus 7-15 jours après l&#39;injection de l&#39;émulsion. </li></ol> Score clinique: 0: pas de maladie 0.5: la queue distale boite 1: la queue molle 2: paraparésie doux, une ataxie 3: paraparésie modérée, les déplacements des rats de temps en temps 3.5: un des membres postérieurs est paralysé, l&#39;autre se déplace 4: paralysie complète des membres postérieurs 5: paralysie complète des membres postérieurs et de l&#39;incontinence 6: moribonde difficulté à respirer, ne pas manger ni boire. Euthanasier immédiatement.

CB et KGC sont co-fondateurs et des consultants pour Airmid Inc

Il ya quelques considérations importantes pour ce protocole. Génétique de rats DA diffèrent légèrement selon le sélectionneur, ils sont achetés à partir. Ces différences peuvent augmenter ou diminuer la sensibilité des rats à l&#39;EAE induction. Si vos rats sont plus sensibles à l&#39;EAE, vous voulez réduire la force de la vaccination en utilisant non complétées adjuvant complet de Freund ou encore l&#39;adjuvant incomplet de Freund. Vous pouvez également envisager de réduire la quantité d&#39;émulsion injectée ou de dilution de l...

<table><tbody><tr><td>Adjuvant complet de Freund&amp;rsquo;s</td><td>Réactif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Produit par Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Réactif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Produit par Difco</td></tr><tr><td>Rat DA</td><td>Animal</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Femelles, âgées de 7 à 9 semaines.</td></tr><tr><td>Seringues en verre - 5 ml</td><td>Outil</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Canule métallique - 18G</td><td>Outil</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Seringues en plastique Luer Lok - 3 ml</td><td>Outil</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles - 20G 1 1/2</td><td>Outil</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

induction et notation clinique de chronique récurrente encéphalomyélite allergique expérimentale

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire chronique du système nerveux central (SNC) qui touche généralement les jeunes adultes. Elle se caractérise par une démyélinisation et effrayer gliales dans les zones diffusées dans le cerveau et la moelle épinière. Ces lésions modifient la conduction nerveuse et provoquer des déficits neurologiques invalidantes qui varient avec l&#39;emplacement des plaques démyélinisées dans le SNC (paraparésie par exemple, paralysie, cécité, incontinence). Auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle pour la SEP. EAE a été induite par accident chez les êtres humains lors de la vaccination contre la rage, en utilisant des virus cultivés sur la moelle épinière de lapin. Les résidus de la colonne vertébrale avec injecté le virus inactivé induit la maladie du SNC. Suite à ces observations, un premier modèle de l&#39;EAE a été décrit dans des primates non humains immunisés avec un homogénat SNC par Rivers et Schwenther en 1935. EAE a depuis été générés dans une variété d&#39;espèces et peut suivre des cours différents en fonction de l&#39;espèce / souche et les immunisant antigène utilisé. Par exemple, en immunisant des rats Lewis avec la protéine de myéline de base dans l&#39;émulsion avec un adjuvant induit un modèle aigu de l&#39;EAE, tandis que le même antigène induit une maladie chronique chez les porcs Guinée. Le modèle décrit ici est l&#39;EAE induite par la vaccination contre la moelle des rats DA DA épinière du rat en émulsion dans l&#39;adjuvant complet de Freund. Les rats développent une paralysie ascendante flasque dans les 7-14 jours post-vaccination. Les signes cliniques suivent un cours rémittente pendant plusieurs semaines. Pathologie montre de grandes s&#39;infiltre immunitaires dans le SNC et des plaques de démyélinisation. Considérations particulières pour prendre soin des animaux avec l&#39;EAE sont décrits à la fin de la vidéo.

Cette vidéo montre le score d&#39;induction et cliniques d&#39;un modèle animal de sclérose en plaques: chronique récurrente encéphalomyélite allergique expérimentale chez des rats DA. La maladie, provoquée par les rats immunisant avec une émulsion contenant la moelle épinière de rats et de toute l&#39;adjuvant complet de Freund, présente des signes cliniques ressemblant à la maladie humaine.

Induction et notation clinique de chronique récurrente encéphalomyélite allergique expérimentale

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire chronique du système nerveux central (SNC) qui affecte couramment les jeunes adultes. Elle se caractérise par ...

Je suis Christine Beaton. Je suis chercheuse assistante dans le laboratoire de George Chen au Département de physiologie et de biomécanique de l'Université de Californie à Irvine. Ce que je vais vous montrer au cours des prochains jours, c'est comment induire et surveiller l'EAE chronique récidivant, qui signifie encéphalomyélite auto-immune expérimentale, chez les rats DA.Ceci est un modèle animal de la sclérose en plaques, ou devrais-je dire, l'un des modèles animaux de la sclérose en plaques. Il se caractérise par une paralysie flasque ascendante chez ces animaux ainsi que par des caractéristiques histologiques qui ressemblent à la maladie humaine. Cette procédure prendra donc plusieurs jours.Ainsi, le premier jour, je vais vous montrer comment préparer l'émulsion génique avec un homogénat de moelle épinière rouge naïf dans un adjuvant complet de Freund. Le deuxième jour, je vais vous montrer comment immuniser les rats contre l'EAE, puis nous allons attendre entre sept et quinze jours pour observer les premiers signes cliniques chez ces animaux, moment auquel je vous présenterai les différents stades de progression de l'EAE chez les différents animaux. Je vais donc d'abord vous

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Dans cette vidéo, nous démontrons comment isoler les cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec encéphalomyélite allergique expérimentale.

Isolement de cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec EAE

La vidéo démontre l’induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin en injectant une combinaison de glycoprotéines oligodendrocytaires de myéline et de Mycobacterium tuberculosis inactivé. Le modèle permet aux chercheurs d’étudier les mécanismes de la maladie et de tester des interventions thérapeutiques.

Induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin

Dans cette vidéo, un modèle murin de sclérose en plaques est établi à l’aide d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). On injecte à la souris une émulsion contenant un peptide neuronal et un adjuvant, déclenchant une réponse immunitaire qui active les lymphocytes T autoréactifs. Ceci est suivi d’une injection de toxine coquelucheuse (PTX) pour augmenter la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique, permettant aux lymphocytes T autoréactifs d’infiltrer le cerveau. Cette...

Ce manuscrit décrit les méthodes d’induction et de notation du modèle expérimental d’encéphalomyélite auto-immune (EAE), ainsi que l’évaluation de la distribution des cellules immunitaires et des niveaux de cytokines à ARNm dans les ganglions lymphatiques, la rate, le sang et la moelle épinière à l’aide de la cytométrie en flux et de la PCR quantitative, respectivement, à diverses phases de la maladie.

Induction of Experimental encéphalomyélite allergique chez la souris et l&#39;évaluation de la distribution des maladies dépendant des cellules immunitaires dans divers tissus

Nous présentons ici les protocoles pour enquêter sur la dépréciation de l’unité neurovasculaire au cours de l’encéphalomyélite allergique expérimentale in vivo. Nous abordons plus précisément comment déterminer la perméabilité de la barrière hémato - encéphalique et activité de gélatinase impliquée dans la migration des leucocytes à travers la glia limitans.

Visualiser l’altération des barrières endothéliales et gliales de l’unité neurovasculaire au cours de l’encéphalomyélite allergique expérimentale In Vivo

Ce manuscrit présente un protocole pour induire l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale active (EAE) chez les souris. Une méthode pour l’isolement et la caractérisation des lymphocytes infiltrés dans le système nerveux central (SNC) est également présentée pour montrer comment les lymphocytes sont impliqués dans le développement de la maladie auto-immune de CNS.

Analyse cytométrique du flux de l’infiltration de lymphocytes dans le système nerveux central pendant l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale

Le présent protocole décrit l’induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin utilisant la glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline et la surveillance du processus de la maladie à l’aide d’un système de notation clinique. Les symptômes expérimentaux liés à l’encéphalomyélite auto-immune sont analysés à l’aide d’une micro-tomodensitométrie du fémur de souris et d’un test en plein champ pour évaluer le processus de la maladie de manière exhaustive.

Induction et divers indicateurs d’évaluation de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) sert de modèle animal de la sclérose en plaques. Cet article décrit une approche permettant d’évaluer l’inflammation, la démyélinisation et les lésions axonales de la moelle épinière dans l’EAE. De plus, une méthode permettant de quantifier les niveaux de lumière des neurofilaments solubles dans le sérum de souris est présentée, facilitant l’évaluation des lésions axonales chez les souris vivantes.

Évaluation de l’inflammation, de la démyélinisation et des lésions axonales du système nerveux central dans l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale est l’un des modèles murins les plus utilisés de la sclérose en plaques. Dans le protocole actuel, les souris C57BL/6J des deux sexes sont immunisées avec le peptide glycoprotéique oligodendrocytaire de myéline, ce qui entraîne principalement une parésie ascendante de la queue et des membres. Nous discutons ici du protocole d’induction et d’évaluation de l’EAE.

Modélisation de la sclérose en plaques chez les deux sexes : encéphalomyélite auto-immune expérimentale induite par MOG35-55

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle animal de la sclérose en plaques (SEP), qui partage avec la maladie humaine une réponse auto-immune humorale robuste. Ici, nous rapportons un protocole ELISA simple et flexible pour quantifier les auto-anticorps dans le sérum de souris immunisées contre l’EAE.

Quantification des anticorps autoréactifs chez la souris lors d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale

Découvrez l'induction et la notation clinique de l'encéphalomyélite allergique expérimentale chronique récurrente chez les rats DA. Cette méthode permet d'étudier la sclérose en plaques et d'évaluer la progression de la maladie.

Induction et notation clinique de chronique récurrente encéphalomyélite allergique expérimentale

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