Name: Lutilisation de carboxyfluorescéine diacétate succinimidyl ester (CFSE) pour surveiller la prolifération des lymphocytes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-12T17:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: Découvrez le marquage des lymphocytes avec CFSE pour surveiller la prolifération cellulaire par cytométrie en flux. Cette méthode permet d'étudier les réponses immunitaires in vitro et in vivo chez la souris.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Le travail présenté dans cet article a été soutenu par une Santé nationale et du Medical Research Council (NHMRC) de l&#39;Australie du Programme de subventions (CRP) et une subvention de projet NHMRC (CRP et BJCQ). Aussi BJCQ est un NHMRC Peter Doherty boursier postdoctoral.

Configuration Réactif 1) 1.1) solution stock CFSE Le colorant CFSE est acheté comme carboxyfluorescéine diacétate succinimidyl ester (CFDA, SE) (MW 557.47 g / mol), généralement dans flacons de 25 mg. Dissoudre le 25 mg de 8,96 ml de DMSO pour une solution stock de finale de 5 mM (magasin que 50-100 aliquotes à -20 ° C pendant plusieurs mois). CFDA, SE va réagir avec une solution aqueuse il est donc essentiel que cette exposition soit évitée lors du stockage. 1.2) Lymphocytes Isoler les lymphocytes de la rate et des ganglions lymphatiques de souris et de remettre en suspension dans 1 ml de milieu de culture (par exemple RPMI) avec 5% inactivé à la chaleur (HI) sérum de veau foetal (FCS), avec une concentration cellulaire de 0,5 x 6 au 10 oct x 10 7 / mL. Étiquetage CFSE 2) 2.1 Méthode de routine): <ol class="lalpha"><li> Bien resuspendre les cellules dans le volume 1 ml de milieu et la place soigneusement dans le fond d'une fraîche (non mouillées) tube conique de 10 ml. </li><li> Posez le tube horizontalement (à l'aide d'un tube non mouillé empêchera l'1 ml de suspension de cellules de se déplacer et prématurément le mélange avec le CFDA, SE solutions). </li><li> Ajouter avec précaution 110 ul de PBS pour la partie non mouillée de la matière plastique au sommet du tube de s'assurer qu'il ne fait pas de contact avec la solution cellulaire. </li><li> Resuspendre 1,1 uL du stock de 5 mM de CFDA, SE dans le PBS 110 pi. </li><li> Vite hermétiquement le tube et inverser et le vortex ainsi d'obtenir rapidement uniformes mélange des solutions. Notez que le colorant est CFSE à une concentration finale de 5 uM, cependant, la concentration optimale peut être déterminée pour chaque lot préparé, puis vérifié tous les 6 mois pour s'assurer qu'il est efficace. </li><li> Incuber les cellules pendant 5 min à température ambiante. Notez que lors de la conversion du CFDA, SE CFSE (voir la discussion) le colorant devient fluorescent et donc sujettes à la décoloration par l'exposition à une lumière excessive. Ainsi, il est conseillé de protéger le tube de la lumière à partir de ce moment, par exemple en le couvrant avec du papier aluminium. </li><li> Laver les cellules en diluant dans 10 volumes de 20 ° C PBS contenant 5% de FCS HI, sédimentation par centrifugation à 300 g pendant 5 min à 20 ° C et jeter le surnageant. Répétez laver deux fois plus. </li></ol> 2.2 Méthode alternative), qui est également approprié pour le nombre de cellules plus élevée (10 - 30 x 10 7): <ol class="lalpha"><li> Préparer un 2 x (10 uM) CFDA, la solution de SE en ajoutant 2 ul du stock 5 mm à 1 mL de PBS et rapidement ajouter à 1 ml de cellules soigneusement remis en suspension, puis rapidement hermétiquement le tube et inverser et le vortex ainsi d'obtenir uniformes rapidement le mélange. </li><li> Incuber les cellules pendant 5 min à température ambiante et laver comme dans les étapes 2.1 (f) et 2.1 (g). </li></ol> 2.3) Les cellules peuvent ensuite être appliqués à un protocole d'intérêt pour l'induction de la division cellulaire. Les cellules marquées peuvent être utilisées dans les deux in vitro et in vivo. 2.4) À la fin de l'essai de prolifération, les cellules sont récoltées et analysées par cytométrie en flux (voir ci-dessous pour des exemples représentatifs). Résultats Représentant 3) Afin d'évaluer la prolifération des lymphocytes par dilution CFSE, il est utile de connaître la fluorescence des cellules indivise (soit un maximum de fluorescence) et non-étiquetées cellules (fluorescence soit un minimum). Par conséquent, votre design expérimental devrait prendre en compte ces contrôles. Voici des exemples d'études in vitro et in vivo utilisant CFSE pour mesurer CD8 + T division cellulaire par cytométrie en flux. 3.1) La stimulation in vitro La figure 1 montre les profils de CFSE CFSE marqué l'ovalbumine (OVA) T spécifiques des récepteurs des cellules transgéniques CD8 + T OT-je cellules après 3 jours de culture avec des cellules dendritiques pulsées avec différentes quantités d'OVA. Lymphocytes T CD8 + purifiées à partir des ganglions lymphatiques de la rate et le OT-je souris ont été marquées avec CFSE et 1 x 10 5 cellules en culture avec 3,3 x 10 4 DC. DC, où pulsées à l'OVA pendant 1 heure à 37 ° C et lavées deux fois avant de la culture. Après 3 jours, les cellules ont été récoltés et étiquetés avec des anti-CD8-APC anticorps et Hoechst 33258, puis analysées par cytométrie en flux (50 000 événements collectés). Live (Hoechst 33258 -) CD8 + sont présentés. Comme contrôles, les cellules CD8 + T cultivés seuls, montre l'intensité de la non-CFSE divisée cellules, tandis que les cellules non marquées montre l'auto-fluorescence des cellules et les limites de divisions cellulaires détectables. Notez que quatre sommets CFSE peut être vu dans chacun des panneaux, dans cet exemple, ce qui indique que les cellules ont subi jusqu'à 3 divisions. 3.2) stimulation in vivo La figure 2 montre les profils de CFSE CFSE marqués spécifiques de l'OVA récepteur des cellules T CD8 + transgéniques OT-I des cellules T après 3 jours in vivo in présence de 20 mg d'OVA. Lymphocytes T CD8 + purifiées à partir des ganglions lymphatiques de la rate et CD45.1 congéniques OT-je souris ont été marquées avec CFSE et 5 x 10 6 cellules injectées iv dans la veine latérale de la queue du C56BL/6J (CD45.2 +) les souris. Après les souris ont été injectés 2 h iv avec 20 ug d'OVA. Après 3 jours, les rates des souris ont été recueillies, faite dans une suspension cellulaire unique, étiqueté avec des anti-B220-PerCP, anti-CD8-APC-Cy7 et anti-CD45.1-PE-Cy7 anticorps et Hoechst 33258 et ensuite analysées par cytométrie en flux (1.000.000 événements collectés). Live (Hoechst 33258 -) B220-cellules sont affichés dans le panneau de gauche et fermée CD8 + CD45.1 + cellules montré dans le panneau de droite. Comme contrôles, non stimulées CFSE marqué cellules T CD8 +, montre l'intensité de la non-CFSE divisée cellules, tandis que les non-étiquetées cellules montre l'auto-fluorescence des cellules et les limites de divisions cellulaires détectables. Notez que l'utilisation de la différence CD45 allotypiques est essentiel pour résoudre les CD8 + transférées cellules T de l'hôte, car ils sont un sous-ensemble mineur de la totalité des cellules CD8 T + (panneau de gauche). Notez que la plupart des cellules tombent dans les 7 sommets CFSE dans cet exemple (à droite), indiquant que les cellules ont subi jusqu'à 6 divisions. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Possibilité de CFSE marqué l'ovalbumine (OVA) T spécifiques des récepteurs des cellules transgéniques CD8 + OT-I des cellules T à réagir in vitro à la DC pulsée avec différentes concentrations de l'OVA, les données présentées sont après 3 jours de culture. Remarque non divisée population de T CD8 + cellules en l'absence d'antigène (lumière histogramme gris) et l'auto-fluorescence de la population non-étiquetées (histogramme gris foncé). La figure illustre cellules T CD8 + qui ont divisé 1-3 fois basée sur des pics de dilution CFSE, avec plus de cellules T à la division concentrations d'antigène plus élevée. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Possibilité de CFSE marqué l'ovalbumine (OVA) T spécifiques des récepteurs des cellules transgéniques CD8 + OT-I des cellules T, quand adoptive transférées dans des souris C57BL / 6 pour répondre à l'OVA, les données présentées 3 jours après le transfert adoptif de gauche:. CD8 +, CD45. 1 + cellules T OT-1 dans les souris receveuses. Panneau de droite: profil de prolifération CFSE. Remarque non divisée population de cellules T CD8 + dans les souris receveuses ne recevant pas d'antigène (lumière histogramme gris) et l'auto-fluorescence des lymphocytes non-étiquetées (histogramme gris foncé). La figure illustre les cellules CD8 + T qui ont divisé 1-6 fois basée sur des pics de dilution CFSE. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Une représentation des différents événements moléculaires qui se produisent pendant le marquage des cellules avec des carboxyfluorescéine diacétate succinimidyl ester (CFDA, SE). Pour plus de détails sur le processus de voir le texte de discussion. Note: «CFSE« Le sigle générique, et non CFDA, SE, est utilisé pour décrire le réactif de marquage et de la procédure de labellisation en général. Chiffre basé sur Paroisse 4.

<ol><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 171, 131-137 (1994).</li>
<li>Parish, C. R., Glidden, M. H., Quah, B. J., Warren, H. S. Use of the intracellular fluorescent dye CFSE to monitor lymphocyte migration and proliferation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParish%2C+CR+%22Current+protocols+in+immunology%22">Current protocols in immunology</a>. Coligan, J. E. , (2009).</li>
<li>Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+with+the+intracellular+fluorescent+dye+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.</a> Nature Protocols. 2, 2049-2056 (2007).</li>
<li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li>
</ol>

Afin de comprendre comment fonctionne et pourquoi CFSE étiquetage uniforme rapide est nécessaire pour son utilisation dans l&#39;analyse de la prolifération, il est utile de comprendre les bases moléculaires de marquage des cellules CFSE. Ceci peut être divisé en deux phases, 1) entrée dans la cellule et l&#39;étiquetage des protéines 2) (figure 3). 1) entrée dans la cellule: entrée du colorant dans la cellule est médiée par la forme diacétylés de la teinture, le diacétate de carboxyfluorescéine succinimidyl ester (CFDA, SE). Les acétates rendre la membrane perméants colorant fortement en permettant à ses flux rapide à travers la membrane plasmique. Estérases, présentes dans la cellule, cliver les acétates du CFDA, SE et ainsi donner naissance à la forme CFSE du colorant qui est beaucoup moins pénétrants membrane, concentrant ainsi le colorant dans la cellule. Marquage des protéines 2): Alors que les deux CFDA, SE et CFSE ont aminés des chaînes latérales réactives succinimidyle, seul le CFSE est fluorescent. La forte concentration intracellulaire de CFSE facilite l&#39;étiquetage rapide et de haute niveau intracellulaire des protéines. L&#39;étiquetage des cellules CFSE doit être effectuée rapidement afin d&#39;obtenir une population homogène de cellules étiquetées, ce qui est essentiel pour résoudre les cellules qui ont subi plusieurs divisions, comme indiqué dans les résultats représentatifs (figure 1 et 2).

<table><tbody><tr><td>CFDA,SE</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Cambridge Isotope Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lympocytes</td><td>par exemple souris ou humain</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>SAFC Global</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes coniques de 10-15 ml</td><td>Falcon BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Feuille d’aluminium</td><td>Capral Aluminium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Scientific Industries Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytomètre en flux</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;utilisation de carboxyfluorescéine diacétate succinimidyl ester (cfse) pour surveiller la prolifération des lymphocytes

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

Carboxyfluorescéine succinimidyl ester (CFSE) est un moyen efficace et populaire pour surveiller la division des lymphocytes 1-3. CFSE étiquettes de façon covalente à long terme avec les molécules intracellulaires colorant fluorescent, carboxyfluorescéine. Ainsi, quand une cellule se divise CFSE-étiquetés, sa descendance sont doués de moitié le nombre de carboxyfluorescéine molécules étiquetées et donc à chaque division cellulaire peut être évaluée en mesurant la diminution correspondante de la fluorescence des cellules par cytométrie en flux. La capacité de CFSE pour étiqueter des populations de lymphocytes avec une haute intensité de fluorescence de la variance exceptionnellement faible, couplé à sa toxicité cellulaire faible, en font un colorant idéal pour mesurer la division cellulaire. Comme il est un colorant à la fluorescéine base, il est également compatible avec une large gamme d&#39;autres fluorochromes rendant applicable à la cytométrie de flux multi-couleurs. Cet article décrit les procédures généralement utilisées pour le marquage des lymphocytes de souris dans le but de surveiller jusqu&#39;à 8 divisions cellulaires. Ces cellules marquées peuvent être utilisées à la fois in vitro et in vivo.

CFSE étiquettes de façon covalente à long terme avec les molécules intracellulaires colorant fluorescent, carboxyfluorescéine. En tant que tel, quand une cellule se divise CFSE-étiquetés, sa descendance ont la moitié de la quantité de fluorescence, qui peut ainsi être utilisée pour évaluer la division cellulaire. Cet article décrit les procédures généralement utilisées pour le marquage des lymphocytes de souris avec CFSE.

L&#39;utilisation de carboxyfluorescéine diacétate succinimidyl ester (CFSE) pour surveiller la prolifération des lymphocytes

L'ester succinimidyl de la carboxyfluorescéine (CFSE) est un moyen efficace et courant pour suivre la division des lymphocytes1-3. Le CFSE marque par liaison covalente les...

L'objectif général de cette expérience est de marquer les lymphocytes avec le colorant fluorescent intracellulaire CFSE, afin de pouvoir suivre la division cellulaire des lymphocytes par cytométrie en flux. Cette étape est réalisée en mélangeant les lymphocytes avec le CFDA se, qui est la forme diacétylée du CFSE. Les deux groupes acétyle permettent au colorant de pénétrer rapidement à l'intérieur des cellules lymphocytaires.Les estérases retirent les groupes acétyle du C-F-D-A-S-E, formant la forme CFSE du colorant. En l'absence des groupes acétyle, le CFSE devient fluorescent et est également moins perméable à la membrane, ce qui concentre ainsi le colorant à l'intérieur des cellules. La chaîne latérale réactive AL du CFSE s'associe ensuite de manière covalente aux protéines intracellulaires, rendant ainsi les cellules presque permanentément fluorescentes.Le CFSE peut être utilisé pour surveiller la division des lymphocytes en fonction de la diminution séquentielle de l'intensité de fluorescence des cellules filles. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que l'incorporation de thymidine tritiée, est que chaque cellule individuelle peut être suivie pendant la division cellulaire. La procédure sera démontrée par Ben Qua, chercheur associé de mon laboratoire, afin de marquer les cellules.Commencez avec des lymphocytes fraîchement isolés de la rate ou des ganglions lymphatiques de souris, et ajoutez une concentration comprise entre un demi-million et dix millions de cellules par millilitre de milieu de culture, complété avec 5 % de sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur. Suspendez soigneusement les cellules et transférez délicatement un millilitre au fond d'un nouveau tube conique de 10 millilitres. Placez le tube horizontalement avec précaution.Ajouter 110 microlitres de PBS au sommet du tube dans la partie non mouillée du plastique, en veillant à ce qu'il n'entre pas en contact avec la solution cellulaire. Ajouter une solution fraîche de colorant composée de 1,1 microlitre de la solution mère de C-F-D-A-S-E à cinq millimolaire aux 110 microlitres de PBS. Fermer rapidement le tube, l'inverser puis le vortexer soigneusement afin d'obtenir un mélange homogène rapide, car le colorant devient fluorescent et est donc sensible au photoblanchiment.Protégez le tube de la lumière en le recouvrant de papier d'aluminium. Incubez les cellules pendant cinq minutes à température ambiante, puis lavez les cellules en les diluant dans 10 volumes de PBS à 20 degrés Celsius contenant 5 % H-I-F-C-S, en centrifugant à 300 ×g pendant cinq minutes à 20 degrés Celsius, puis en éliminant le surnageant. Répétez le lavage deux fois supplémentaires.Les cellules peuvent ensuite être soumises à un protocole d'intérêt pour induire la division cellulaire. Les cellules marquées peuvent être utilisées dans des tests in vitro et in vivo. À la fin du test de prolifération, les cellules sont récoltées et analysées par cytométrie en flux.Dans cet exemple, le marquage par CFSE est utilisé in vitro pour mesurer la manière dont les lymphocytes T provenant de souris transgéniques modifiées génétiquement réagissent à des cellules dendritiques sensibilisées avec différentes concentrations d'antigène. Les pics de dilution du CFSE non ombrés représentent des lymphocytes T transgéniques CD eight positifs qui se sont divisés de une à trois fois. On observe que davantage de lymphocytes T se divisent aux concentrations plus élevées de l'antigène.La méthode de marquage par CFSE convient également à des tests in vivo, comme les expériences de transfert adoptif. Ici, le fax est utilisé pour identifier la population de lymphocytes T d'intérêt chez les souris receveuses. Un profil ultérieur de prolifération par CFSE illustre les lymphocytes T positifs pour CD8 qui se sont divisés de une à six fois, selon les pics de dilution du CFSE après son développement.Cette procédure a ouvert la voie aux chercheurs en immunologie pour explorer la prolifération des lymphocytes durant une réponse immunitaire.

the-use-carboxyfluorescein-diacetate-succinimidyl-ester-cfse-to

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

De nombreuses infections provoquent une forte réponse CTL, mais parfois, la quantité de cellules répondant n'est pas en corrélation au contrôle de l'agent...

Specific Antigen In Vivo</emTuer Assay> en utilisant des cellules CFSE cible marquée

Ce protocole vidéo montre l'application de la teinture fluorescente carboxyfluorescéine succinimidylester (CFSE) pour l'identification et la séparation des différentes sous-populations de cellules de glioblastome humain basé sur la fréquence de la division cellulaire.

Identification et isolement des cellules ne se divisant lentement dans le glioblastome humain Utilisation carboxy fluorescéine succinimidyl ester (CFSE)

La vidéo présente un test basé sur la cytométrie en flux pour mesurer l’immunodominance dans les lymphocytes T cytotoxiques ou les réponses CTL. Les cellules cibles fluorescentes injectées présentent une fluorescence variable correspondant aux épitopes immunogènes. La collecte et le tri post-spléen révèlent une réduction des cellules fluorescentes de haute intensité, confirmant l’immunodominance dans les réponses CTL.

Un test pour évaluer l’immunodominance dans les réponses des lymphocytes T cytotoxiques

Cette vidéo présente un test in vitro visant à explorer l’influence immunomodulatrice des cellules souches mésenchymateuses (CSM) sur la prolifération des lymphocytes T effecteurs. Le test comprend la co-culture de CSM avec des PBMC pour induire la population de monocytes à acquérir un phénotype immunomodulateur, conduisant à la sécrétion d’interleukine-10 (IL-10). Après l’incubation avec des lymphocytes T CD4+ activés, les monocytes induits suppriment efficacement la prolifération des...

Un test in vitro pour évaluer l’impact immunomodulateur des monocytes sur la prolifération des leucocytes

La capacité de surveiller les réponses des cellules T en détail in vivo est importante pour le développement de la compréhension de la réponse immunitaire. Nous décrivons ici l'utilisation de réseaux de cibles fluorescentes (ALE) dans un test in vivo de cellules T en évaluant&gt; 250 paramètres simultanément par cytométrie de flux.

L&#39;utilisation des tableaux cibles fluorescentes pour l&#39;évaluation des réponses des cellules T<em&gt; In vivo</em

Les macrophages sont des cellules plastiques du système hématopoïétique qui jouent un rôle crucial dans l'immunité protectrice et l'homéostasie. Dans ce rapport, nous décrivons des techniques in vitro optimisées pour caractériser phénotypiquement et fonctionnellement les macrophages régulateurs infiltrants de greffe qui s'accumulent dans l'organe transplanté dans des conditions tolérantes.

Caractérisation fonctionnelle des macrophages réglementaires qui inhibent l&#39;immunité réactive du greffe

Les lymphocytes sont les principaux acteurs des réponses immunitaires adaptatives. Ici, nous présentons un protocole de purification des lymphocytes pour déterminer les fonctions physiologiques des molécules souhaitées dans l’activation des lymphocytes in vitro et in vivo. Les procédures expérimentales décrites conviennent pour comparer les capacités fonctionnelles entre les lymphocytes témoins et les lymphocytes génétiquement modifiés.

Isolement et activation de murins Lymphocytes

L'imagerie à cellules vivantes des cellules sanguines marquées dans la circulation oculaire peut fournir des informations sur l'inflammation et l'ischémie dans la rétinopathie diabétique et la dégénérescence maculaire liée à l'âge. Un protocole pour étiqueter les cellules sanguines et l'image des cellules marquées dans la circulation de la rétine est décrit.

Étiquetage des colorants fluorescents des érythrocytes et des leucocytes pour étudier la dynamique du flux dans la circulation de la rétine de la souris

Présenté ici est un protocole pour mesurer la prolifération des cellules CD4T en réponse à des protéines antigéniques ou des peptides en utilisant la dilution des colorants. Cet analyse est particulièrement sensible aux rares lymphocytes T spécifiques à l'antigène et peut être modifié pour faciliter le clonage des cellules spécifiques à l'antigène.

Quantification de la prolifération des cellules CD4et T spécifiques à l'antigène humain à l'aide de Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Un protocole pour évaluer la destruction quantitative des cellules tumorales par les cellules de Jurkat exprimant le récepteur de l’antigène chimérique (CAR) ciblant l’antigène tumoral unique. Ce protocole peut être utilisé comme plate-forme de criblage pour l’optimisation rapide des constructions de charnières CAR avant la confirmation dans les lymphocytes T dérivés du sang périphérique.

Évaluation rapide de la cytotoxicité in vitro du récepteur de l’antigène chimérique exprimant le jurkat à l’aide de l’imagerie fluorescente

Découvrez le marquage des lymphocytes avec CFSE pour surveiller la prolifération cellulaire par cytométrie en flux. Cette méthode permet d'étudier les réponses immunitaires in vitro et in vivo chez la souris.

L'utilisation de carboxyfluorescéine diacétate succinimidyl ester (CFSE) pour surveiller la prolifération des lymphocytes

Explorer plus de vidéos