Name: Une introduction au laboratoire Worm: La culture de Worms à la mutagenèse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-11T22:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: Découvrez les techniques de mutagenèse EMS et TMP/UV pour Pristionchus pacificus. Cette méthode permet de générer des mutants et d'identifier les fonctions géniques en neurosciences et biologie du développement.

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Ce travail a été financé par la NSF accorde IOB # 0615996.

Partie 1: Préparation de milieux de croissance des nématodes (NGM) boîtes de Pétri Nématodes expérimentale tels que C. elegans et P. pacificus sont généralement cultivées en laboratoire le 6 boîtes de Pétri contenant un milieu de croissance cm nématode (NGM) 1. Worms sont conservés à 20 ° C, mais peuvent être incubés à une gamme de températures (entre 4 ° C - 25 ° C), selon les espèces de nématodes et la conception expérimentale. Pour préparer les plaques avec le NGM, des techniques standard de stériles doivent être utilisés pour prévenir la contamination fongique et bactérienne. Voici le protocole pour préparer des plaques NGM: <ol><li> Peser 15 g d'agar, 2,4 g de NaCl, 2 g de tryptone, et 2,72 g de KH 2 PO 4 en 2 flacon L conique, faire du volume à 1 L avec de l'eau, l'autoclave et laisser refroidir à 60 ° C dans un bain d'eau. </li><li> Ajouter 0,8 ml de chacune des 1 M CaCl 2, le cholestérol (5 mg / ml dans l'éthanol), et 1 M MgSO 4. Pour éviter la contamination fongique et bactérienne, une ml de streptomycine (100 mg / ml) et la nystatine 1ml (10 mg / ml) peut être ajouté à chaque litre de milieu. </li><li> Utiliser une machine Unispense et le maintien des conditions stériles, versez les médias dans les plaques désiré. Les plaques doivent être remplis à environ 2 / 3 ème plein. Un standard de 60 mm de diamètre plateau nécessite environ 10 ml de la presse. Ne pas déplacer les plaques jusqu'à ce que l'agar est totalement gélifiée, sinon il y aura une surface inégale de la gélose, ce qui rend difficile de se concentrer vers sur le stéréomicroscope. </li><li> Une fois séchées, les plaques peuvent être ensemencées immédiatement ou conservés à 4 ° C jusqu'à l'ensemencement avec des bactéries. </li></ol> Partie 2: Préparation des bactéries OP50 et l'ensemencement des boîtes de Petri NGM P. pacificus est cultivée en laboratoire par l'alimentation sur la souche E. coli OP50. OP50 a une croissance limitée sur des plaques NGM, formant ainsi une pelouse fine qui facilite la visualisation des vers 1. Pour développer une culture de la OP50, utiliser LB-bouillon: <ol><li> Ajouter 5 g bactotryptone, 2,5 g extrait de levure et 2,5 g de NaCl à une bouteille de 500 ml bouchon à vis, faire monter le volume à 500 ml avec de l'eau distillée et autoclave. </li><li> Inoculer le bouillon avec une seule colonie de OP50 de la plaque de culture dans des conditions stériles et laisser pousser une nuit à 37 ° C. </li><li> LB-OP50 est prêt à être utilisé et peut être conservé à 4 ° C pendant plusieurs mois si la stérilité est maintenue. Chaque fois que les plaques doivent être ensemencées, versez une petite quantité de bouillon dans un petit bécher stérile et cela aidera à prévenir la contamination de la culture mère. </li><li> Pour plaques de graines, de distribuer 100 à 120 pl de la OP50 sur le 60 mm de diamètre NGM boîte de Pétri et agiter pour la répandre. </li><li> Incuber ces plaques ensemencées nuit à température ambiante pour la pelouse de croître. Ces plaques ensemencées peuvent désormais être conservés à 4 ° C pendant 3 semaines au maximum. Le stockage dans une position inversée permet d'éviter un séchage rapide. </li></ol> Partie 3: Faire un choix Dans cette section, nous décrivons comment faire un choix pour les vers. La pioche est utilisé pour transférer les vers d'un endroit à l'autre. La pioche est faite de calibre 30 en platine iridié de fil de 90% à 10%, bien que certains chercheurs préfèrent des compositions métalliques légèrement différente: <ol><li> Coupez environ 3-4 cm de fil de fer, placer 0,5 cm de l'intérieur de la pointe d'une pipette Pasteur (dont la pointe était cassée à une petite longueur), puis le sceller dans le verre sur un bec Bunsen. La longueur du fil qui dépasse du verre est d'environ 3-3,5 cm, mais peut varier en fonction des préférences individuelles. </li><li> Aplatir la fin du fil qui est en saillie à l'aide d'un marteau ou une pince. Puis plier la partie aplatie vers le haut pour former une boule. </li><li> Lisser les arêtes vives de la reprise avec un papier de sable pour éviter d'endommager le ver ou l'agar. </li></ol> Partie 4: Cueillette des vers <ol><li> Pour ramasser des vers, stériliser le fil de platine sur une flamme et faites glisser la pointe aplatie de la camionnette le long de la pelouse bactérienne pour bien enrober la pointe avec une épaisseur de bactéries collant, en prenant soin de ne pas percer ou d'endommager la surface de la gélose. </li><li> Utilisation de la loupe binoculaire, très légèrement collante brosse à la pointe contre les vers ver / être pris jusqu'à la vis sans fin sur les bâtons à la bactérie sur le pick. </li><li> Une fois que le ver est à la pointe de la pioche, le transférer immédiatement à la nouvelle plaque en touchant ou en faisant glisser la pointe de la reprise de la pelouse contre les bactéries de la plaque de nouveau, et le ver doit ramper hors tension. Des précautions doivent être prises pour ne pas endommager la surface de la gélose sur la plaque reste les vers rampent dans les trous qui rend difficile de les récupérer. Si le ver reste sur le pick pendant trop longtemps, il pourrait dessécher. </li></ol> Partie 5: EMS mutagenèse Méthanesulfonate d'éthyle (EMS) induit un large spectre de mutations dans le génome de la 2. Mutants peuvent être identifiés par des défauts comme la ponte, une anomalie musculaires, la détermination du sexe, de la formation dauer, le comportement et la formation des gonades. Le protocole d'EMS mutagenèse est similaire à celle décrite pour C. elegans 1. <ol><li> Préparer 500 ml (ou plus) de NaOH 1N. </li><li> Prenez 4-5, 6 cm de diamètre boîtes de Pétri pleine de vers, contenant quelques centaines de vers à la troisième juvéniles larvaire (J3) stade et laver les vers off en utilisant 2-3 ml de solution stérile M9 par plaque. </li><li> Ramassez tous les vers dans un stérile, jetable 15 ml tube à centrifuger. Centrifuger à 1500 xg pendant 5-7 minutes ou jusqu'à ce que les vers forment un culot. </li><li> Aspirer le liquide et l'utilisation de 2 ml de M9 à suspendre à nouveau les vers. Ajouter 20 ul EMS dans un tube contenant 2 ml de M9 et secouez-le pour le dissoudre. Puis ajouter cette solution à l'EMS 2ml de suspension ver et remuer doucement. La concentration finale de l'EMS sera de 47 mM. Attention: EMS est un mutagène très fort et doit être manipulé sous une hotte. Tous les matériaux (gants, pipettes, conseils) qui entrent en contact avec cet agent mutagène doivent être traités avec NaOH 1N à l'état inactif du SME. Porter des gants à double lors de la procédure de mutagenèse EMS entier. Éliminer les déchets dangereux, conformément aux directives de votre institution. </li><li> Placez le tube de centrifugeuse et couvrir le bouchon avec du parafilm, le placer horizontalement dans la hotte et de laisser les vers incuber pendant 3,5 heures. Le tube peut aussi être placé sur une bascule basse vitesse. </li><li> Tourner le tube et le bouchon couvercle avec du parafilm et placer en position verticale et incuber jusqu'à ce que le puits de vers. </li><li> Aspirer le surnageant et le jeter dans un bécher / fiole contenant du NaOH 1N. Ce sera inactiver les EMS. </li><li> Ajouter 5 ml M9 aux vers, inverser le tube de 25 à 30 heures pour se laver les vers, centrifuger à 1500 xg pendant 5-7 minutes ou jusqu'à ce que les vers forment un culot. Aspirer le surnageant et jeter dans le bécher de NaOH 1N. </li><li> Répéter l'étape de lavage au moins 3 fois. </li><li> Après le lavage final, remettre en suspension le culot à vis sans fin en quantité minime (~ 500 pi) de M9 et les pipettes sur des plaques à NGM contenant un tapis de bactéries OP50. À ce stade, vous n'avez plus besoin de travailler dans la hotte chimique. </li><li> Laissez le liquide sécher pendant quelques minutes et ensuite choisir et de transfert d'apparence saine J4 larves fraîches plaques ensemencées. Jeter la plaque d'origine, conformément aux directives de votre établissement des déchets dangereux. </li><li> Laissez l'auto mutagénisées vers fertiliser. En utilisant un microscope stéréoscopique, l'écran les phénotypes des mutants génération F2 récessive d'intérêt. </li></ol> Partie 6: psoralène mutagenèse Dans cette section, nous décrivons la procédure de mutagenèse utilisant TMP en conjonction avec grande longueur d'onde ultraviolettes (UV). TMP / UV méthode de mutagenèse est largement utilisé pour induire des mutations dans un génome de suppression 3. <ol><li> Recueillir les vers de 4-5, 6 assiettes cm de Pétri de diamètre dans un tube de 15 ml à centrifuger comme décrit dans la procédure précédente. </li><li> Ajouter 10 ml M9, inverser 20 fois pour laver les vers, et centrifuger à 1500 xg pendant 5 minutes. Jeter le surnageant et répéter le lavage pour un total de 3 fois. Aspirer le liquide et remettre en suspension les vers dans environ 10 fois leur volume d'M9 contenant 30 ug / ml de TMP. Pipeter 20 ul de TMP (3 mg / ml) dans 2 ml de M9. Comme EMS, TMP est un puissant cancérigène et doit être manipulé en prenant les mesures de sécurité appropriées. Afin de prévenir de tout risque potentiel de l'oeil aux UV bonne lumière porte doit être utilisé. Les produits jetables doivent être jetés dans des sacs appropriés Biohazard. </li><li> Incuber le tube dans l'obscurité pendant 15 minutes à température ambiante sur une bascule basse vitesse (40 UPM). Réglez le tube vertical recouvert pendant 10 minutes pour permettre à tous les vers l'évier. </li><li> Retirez les vers du fond du tube avec une pipette Pasteur et de les transférer sur une plaque non ensemencée NGM. Jeter le surnageant suivant les directives de votre établissement chimiques dangereux. </li><li> Conservez la plaque dans l'obscurité jusqu'à ce que la TMP excès est absorbé dans l'assiette. </li><li> L'utilisation d'un mètre de l'intensité des UV, définir la distance entre la source UV à ondes longues et la plaque de telle sorte que l'intensité de la plaque est de 500 uW / cm 2 4. Retirez le couvercle en aluminium et le couvercle et le couvercle et exposer la plaque contenant les vers TMP traitée aux rayons UV à ondes longues de 50 secondes. </li><li> Couvrez et laissez les vers dans l'obscurité pendant 5 heures à température ambiante. </li><li> Pick et le transfert d'apparence saine J4 larves fraîches plaques ensemencées. Jeter la plaque d'origine suivant les directives de votre établissement chimiques dangereux. </li><li> En utilisant un microscope stéréoscopique, l'écran de l'phénotypes génération F2 pour la mutation d'intérêt. </li></ol> Partie 7: Résultats Représentant Certains des P. phénotypes mutants pacificus résultant de la mutagenèse (soit par EMS ou TMP / UV) sont présentés dans la figure 1. Chaque mutant a un phénotype caractéristique qui se distingue facilement de l'animal de type sauvage. Du verqui ont été traités avec le mutagène, 30 J3/J4 larves de la génération parentale (P0) ont été placés dans des assiettes séparées et autorisés à pondre des oeufs, qui sont de la génération F1. Des plaques qui ont montré saine descendance F1, un total de 1000 F1 ont été transférés sur des plaques individuelles et la descendance F2 a été projeté pour les phénotypes. Les animaux atteints Dumpy 5,6, 6 et non coordonnée transformateur 7 phénotypes ont été trouvés. <img src="/files/ftp_upload/2293/2293fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Pristionchus pacificus type sauvage et les animaux mutants. A. B. poids poids hermaphrodites mâles de C. dpy mutant D. unc mutant E. TRA mutant. Haut deux panneaux montrant type sauvage hermaphrodites (à gauche) et mâle (à droite) afin de comparer les animaux avec les différents mutants dans les panneaux restants.

<ol><li>Brenner, S. Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).</li>
<li>Anderson, P. Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).</li>
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</ol>

La mutagenèse est une technique largement utilisée pour des études génétiques dans divers organismes modèles expérimentaux. Expériences de mutagenèse sont souvent utilisés pour identifier la fonction d&#39;un gène 2. Les procédures de mutagénèse décrites ici peuvent être utilisées non seulement pour P. pacificus, mais aussi pour C. elegans et d&#39;autres espèces de nématodes connexes. Nous décrivons ici deux méthodes, EMS et TMP / UV mutagenèse. EMS est une subs...

une introduction au laboratoire worm: la culture de worms à la mutagenèse

An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis

Ce protocole décrit les procédures pour maintenir les nématodes dans le laboratoire et la façon de les mutagénéiser en utilisant deux méthodes alternatives: méthanesulfonate d&#39;éthyle (EMS) et 4, 5, 8-trimethylpsoralen combinée avec la lumière ultraviolette (TMP / UV). Les nématodes sont de puissants systèmes biologiques pour les études génétiques en raison de leur plan d&#39;organisation simple et le système d&#39;accouplement, qui est composé d&#39;auto-fertilisation hermaphrodites et mâles qui peuvent générer des centaines de descendants par animal. Les nématodes sont maintenus dans des boîtes de gélose contenant un tapis de bactéries et peuvent être facilement transférés d&#39;une plaque à l&#39;autre en utilisant un médiator. EMS est un agent alkylant couramment utilisés pour induire des mutations ponctuelles et de petites délétions, tandis que la TMP / UV induit principalement des suppressions. Selon l&#39;espèce de nématode utilisé, les concentrations de l&#39;EMS et TMP devront être optimisés. Pour isoler des mutations récessives de l&#39;pacificus nématodes Pristionchus, les animaux de la génération F2 étaient visuellement dépistage de phénotypes. Pour illustrer ces méthodes, nous mutagénisées vers et cherché non coordonnés (UNC), plutôt moche (dpy) et transformateur (TRA) des mutants.

Le dépistage de mutants avec des défauts phénotypique est une méthode simple pour identifier les gènes qui fonctionnent dans un processus biologique donné. Dans cet article, nous décrivons comment les vers la culture vivante gratuit (par exemple,<em&gt; Pristionchus pacificus</em&gt;) Dans le laboratoire et montrent deux méthodes différentes mutagenèse, EMS et TMP / UV.

Une introduction au laboratoire Worm: La culture de Worms à la mutagenèse

Ce protocole décrit les procédures de maintien des nématodes en laboratoire et la manière de les mutageniser à l'aide de deux méthodes alternatives : le méthane éthylique...

L'objectif général de cette procédure est de réaliser deux protocoles de mutagenèse différents, couramment utilisés pour générer des mutants et des nématodes, tels que ceno, hepatitis elegance et prisca. La mutagenèse par Pacificus est un outil puissant permettant de révéler la fonction des gènes. Ceci est réalisé en préparant d'abord des cultures contenant un grand nombre de vers au dernier stade larvaire précédant l'âge adulte, sur lesquels la mutagenèse sera effectuée.L'étape suivante consiste à induire une mutagenèse chez les vers à l'aide de deux procédures alternatives : le traitement par l'éthyl méthane sulfonate ou la mutagenèse par rayonnement ultraviolet en association avec un agent mutagène chimique. La troisième étape du protocole consiste à transférer les vers présentant un aspect sain vers des boîtes de gélose nutritive, récemment ensemencées avec des bactéries, qui constituent leur source alimentaire. La dernière étape du protocole consiste à sélectionner les phénotypes mutants d'intérêt au sein de la première, deuxième ou troisième génération.Bonjour, je suis Jore du laboratoire du Dr. Andre Perez, Silva, du Département de biologie à l'Université du Texas à Arlington. Les protocoles de mutagenèse T-M-P-U-V et EMS permettent de répondre à des questions essentielles dans le domaine de la recherche génétique, telles que quels gènes sont impliqués dans les processus biologiques jouant un rôle important durant le développement. Bonjour, je m'appelle Manish Phar. Bien que les méthodes de mutagenèse présentées concernent Pristi Onca S Pacificus, elles peuvent être très couramment utilisées pour d'autres modèles expérimentaux comme le nématode Caenorhabditis elegans, ainsi que des vertébrés comme le poisson-zèbre.Commençons donc. Notre outil pour transférer les vers d'un endroit à un autre est fabriqué à partir d'un fil de 30 gauge, composé à 90 % de platine et à 10 % d'iridium. Bien que certains chercheurs puissent préférer des compositions métalliques légèrement différentes pour fabriquer un outil, une pipette Pasteur est également utilisée pour tenir l'outil.Commencez par casser l'extrémité allongée de la pipette Pasteur à la longueur requise. Coupez un morceau de fil métallique de trois à quatre centimètres et insérez-en 0,5 centimètre à l'intérieur de l'extrémité de la pipette Pasteur. Scellez le fil dans le verre au-dessus d'un bec Bunsen.La longueur du fil métallique dépassant du verre est d'environ trois à trois centimètres et demi, mais peut varier selon les préférences individuelles. Aplatissez l'extrémité du fil dépassant à l'aide d'une pince. Ensuite, courbez la partie aplatie vers le haut pour former une petite cuillère.Enfin, lissez les bords tranchants du curette avec du papier de verre afin d'éviter d'endommager le ver ou l'agar. Pour prélever les vers, stérilisez le fil du curette à la flamme, puis faites glisser délicatement l'extrémité aplatie sur une pelouse bactérienne présente sur une boîte de culture NGMP afin de recouvrir l'extrémité de bactéries épaisses et collantes. Veillez à ne pas percer ni endommager la surface d'agar en utilisant un microscope stéréo avec une très grande précaution.Brossez l'extrémité collante contre le ver à prélever jusqu'à ce que le ver adhère aux bactéries présentes sur le porte-objet. Une fois le ver sur l'extrémité du porte-objet, transférez-le immédiatement sur la nouvelle boîte en touchant ou en faisant glisser l'extrémité du porte-objet contre la pelouse bactérienne de la nouvelle boîte. Il faut faire attention à ne pas endommager la surface d'agar de la boîte, car les vers pourraient s'introduire dans les trous et devenir difficiles à récupérer.Le ver doit ramper hors du porte-objet lorsque vous touchez ou faites glisser la pointe du porte-objet contre la pelouse bactérienne. Le ver ne doit pas rester trop longtemps sur le porte-objet, au risque de se dessécher. Nous allons démontrer la mutagénèse par EMS sur quatre à cinq boîtes de Pétri de six centimètres de diamètre contenant des vers prisca pacificus au stade juvénile larvaire troisième. Lavez les vers de chaque boîte à l’aide de deux à trois millilitres de milieu M neuf stérile par boîte. Il devrait y avoir quelques centaines de vers. Rassemblez les vers dans un tube stérile jetable de 15 millilitres pour centrifugeuse.Centrifuger à 1500 g pendant cinq à sept minutes ou jusqu’à ce que les vers forment un culot. Aspirer le liquide et utiliser deux millilitres de M neuf pour resuspendre les vers, en portant des gants doubles et en travaillant sous une hotte à flux laminaire. Ajouter 20 microlitres de EMS à un tube contenant deux millilitres de M neuf et agiter pour dissoudre. Puis ajouter ce mélange à deux millilitres de suspension de vers et mélanger doucement par rotation. La concentration finale de EMS sera de 47 millimolaire. Placer le tube de centrifugation contenant le paraforme sur un agitateur lent dans la hotte et laisser les vers incuber pendant trois heures et demie. À la fin de l'incubation de trois heures et demie, placer le tube en position verticale et incuber jusqu'à ce que les vers déposent au fond, puis aspirer le surnageant et le jeter dans un bécher contenant de l'hydroxyde de sodium 1 N afin d'inactiver le EMS présent dans le surnageant.À chaque fois avant de retirer vos mains de la hotte, assurez-vous de les rincer également dans de l'hydroxyde de sodium normalisé à 1 M. Pour inactiver l'EMS, ajoutez cinq millilitres de milieu M9 aux vers. Retournez le tube de 25 à 30 fois pour laver les vers et centrifugez à 1500 ×g pendant cinq à sept minutes, ou jusqu’à ce que les vers forment un culot après centrifugation, puis aspirez le surnageant et jetez-le dans le récipient contenant l'hydroxyde de sodium normalisé à 1 M.Répétez cette étape de lavage consistant à ajouter du M neuf, à centrifuger et à éliminer le surnageant au moins trois fois. Après le dernier lavage, resuspendez le culot de vers dans une quantité minimale de M neuf, puis déposez la suspension de vers sur des boîtes NGM contenant une pelouse bactérienne OP50 à l’aide d’une pipette. Après avoir laissé le liquide sécher pendant quelques minutes, sélectionnez et transférez des larves J4 en bon état sur des boîtes fraîchement ensemencées.Laisser les vers mutagénisés s'autoféconder environ huit à dix jours plus tard, puis utiliser un microscope stéréo pour analyser les phénotypes de la génération F2 à la recherche de mutants excédentaires d'intérêt. Cette procédure de mutagenèse sera démontrée sur des vers ppac pacificus provenant de quatre à six boîtes de Pétri de cinq à six centimètres de diamètre, récoltés dans un tube centrifuge de 15 millilitres. Ajouter 10 millilitres de M neuf au culot de vers.Retourner 20 fois pour laver les vers, puis centrifuger à 1500 G pendant cinq minutes. Éliminer le surnageant après la centrifugation. Répéter le lavage des vers avec du M neuf pour un total de trois lavages ; après le dernier lavage, aspirer le liquide et resuspendre les vers dans environ 10 fois leur volume de M neuf.Ensuite, ajouter de la SOREIN triméthyl 4 5 8 ou du TMP à partir d'une solution mère de trois milligrammes par millilitre afin d'obtenir une concentration finale de 30 microgrammes par millilitre. Incuber le tube à l'abri de la lumière, à température ambiante, sur un agitateur lent pendant 15 minutes. Après l'incubation, placer le tube verticalement pendant 10 minutes pour permettre à tous les vers de couler. Pour cette vidéo, le tube est montré découvert, mais la solution de TMP ne doit pas être exposée à la lumière.Étant donné que ce produit chimique est sensible à la lumière, utilisez une pipette Pasteur pour prélever les vers depuis le fond du tube et les transférer sur une boîte de gélose NGM non séchée. Conservez la boîte à l’abri de la lumière jusqu’à ce que l’excès de TMP soit absorbé par la gélose. Une fois le TMP absorbé, les vers peuvent être exposés à une lumière ultraviolette.L'une des étapes les plus critiques de la procédure de neurogenèse TMP UV consiste à maintenir la bonne distance entre la source UV à onde longue et la plaque. Nous devons donc ajuster cette distance plusieurs fois afin d'obtenir l'intensité appropriée de la lumière UV qui atteint la plaque. L'intensité doit être enregistrée à l'aide du luxmètre et doit être de 500 microvatts par centimètre carré.Des lunettes de protection appropriées doivent être utilisées pendant cette étape en raison du risque potentiel lié à la lumière UV. À l'aide d'un mètre d'intensité UV, déterminez la distance par rapport à la source UV à onde longue qui donnerait une intensité de 500 micro watts par centimètre carré.Ensuite, retirez la feuille d'aluminium et le couvercle, puis placez la boîte contenant les vers traités au TMP à une distance de la lampe telle que l'intensité sur la boîte soit de 500 micro watts par centimètre carré. Exposez la boîte au rayonnement UV longue onde pendant 50 secondes, recouvrez-la et laissez les vers à l'obscurité pendant cinq heures à température ambiante. Après cinq heures, sélectionnez et transférez des larves J4 en bon état sur des boîtes fraîches ensemencées.Enfin, analyser les générations F1, F2 ou F3 pour détecter les phénotypes d'intérêt à l'aide d'un microscope stéréo. On observe ici certains phénotypes mutants de ppac pacificus identifiés chez la génération F2 après mutagénèse par EMS ou par T-M-P-U-V. Les deux panneaux supérieurs de ces images montrent respectivement un hermaphrodite de type sauvage et un mâle de type sauvage.Chaque mutant présente un phénotype caractéristique facilement distinguable de celui de l'animal de type sauvage. Le panneau C illustre un mutant dumpy. Le panneau D montre un mutant non coordonné et le panneau E représente un mutant transformer. Une fois maîtrisée, la mutagenèse par EMS peut être réalisée en quatre heures et demie, et la mutagenèse par TMP uuv peut être effectuée en cinq heures et demie si elle est correctement réalisée.Cette période inclut également le temps d'incubation. N'oubliez pas que l'EMS et le TMP sont extrêmement dangereux et que des précautions telles que le port d'une blouse, de gants doubles, l'utilisation d'une hotte aspirante et de lunettes de protection doivent toujours être prises lors de leur manipulation. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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