Name: Coût global de surveillance et de laboratoire efficace du VIH / sida: un modèle en Afrique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 56 s
Description: Découvrez la cytométrie en flux pour le suivi du VIH en Afrique du Sud. Cette méthode intègre les marqueurs CD4, CD45 et la charge virale pour améliorer le diagnostic dans les laboratoires aux ressources limitées.

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Des remerciements spéciaux sont dus à la National Health Laboratory Service (NHLS) de la République d&#39;Afrique du Sud pour l&#39;organisation nationale des services de la circulation liés au VIH de diagnostic (http: \ \ www.nhls.ac.za et http://www.plgcd4 . net). Les études ont été menées en vedette au département d&#39;hématologie et de médecine moléculaire, Université de Witwatersrand (Johannesburg, Afrique du Sud; soutenus par le chef de département, le professeur Wendy Stevens). Les auteurs n&#39;ont reçu aucune subvention pour soutenir cette publication de sociétés commerciales ou des organismes de financement. Les opinions exprimées sont celles des auteurs, sans nécessairement refléter les vues des Institutions de l&#39;Université de Witwatersrand ou l&#39;NHLS Afrique du Sud.

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<li>Liu, Z., Cumberland, W. G., Hultin, L. E., Prince, H. E., Detels, R., Giorgi, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD38+antigen+expression+on+CD8%2B+T+cells+is+a+stronger+marker+for+the+risk+of+chronic+HIV+disease+progression+to+AIDS+and+death+in+the+Multicenter+AIDS+Cohort+Study+than+CD4%2B+cell+count%5BTitle%5D)+AND+%22J+Acquir+Immune+Defic+Syndr+Hum+Retrovirol%22%5BJournal%5D)">Elevated CD38 antigen expression on CD8+ T cells is a stronger marker for the risk of chronic HIV disease progression to AIDS and death in the Multicenter AIDS Cohort Study than CD4+ cell count.</a> J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 16, 83-92 (1997).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2FCD38+activation+yields+important+clinical+information+of+effective+antiretroviral+therapy%3A+findings+from+the+first+year+of+the+CIPRA-SA+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">CD8/CD38 activation yields important clinical information of effective antiretroviral therapy: findings from the first year of the CIPRA-SA cohort.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S131-S140 (2008).</li>
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<li>Larsen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fragile+environments+of+inexpensive+CD4%2B+T-cell+enumeration+in+the+least+developed+countries%3A+strategies+for+accessible+support%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">The fragile environments of inexpensive CD4+ T-cell enumeration in the least developed countries: strategies for accessible support.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S107-S116 (2008).</li>
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<li>Bergeron, M., Lustyik, G., Phaneuf, S., Ding, T., Nicholson, J. K., Janossy, G., Shapiro, H., Barnett, D., Mandy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+currently+used+cytometers+facilitates+the+identification+of+pipetting+errors+and+their+volumetric+operation%3A+%22time%22+can+tell+all%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Stability of currently used cytometers facilitates the identification of pipetting errors and their volumetric operation: "time" can tell all.</a> Cytometry B Clin Cytom. 52, 37-39 (2003).</li>
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</ol>

Les droits de brevet international pour la méthode décrite ici CD4 sont détenus par le NHLS Afrique du Sud et actuellement sous licence à BCI, Miami, FL, USA.

Ces dernières années, les programmes axés sur la charité et l&#39;octroi de subventions allouées ont contribué à l&#39;établissement de certaines pratiques dans des domaines cliniques excellentes ressources limitées de la planète avec le VIH charge élevée. Les programmes d&#39;antirétroviraux ont réussi à réduire la mortalité et sont maintenant lancé à plus CD4 2,3. Il ya déjà des indications que ces nouvelles mesures va diminuer la propagation de l&#39;infection par le VIH 4,5, malgré l&#39;absence d&#39;un vaccin contre le VIH-spécifiques. Dans notre vidéo, nous documentons que lorsque le suivi des patients sous ARV, ces techniques peuvent être mieux ciblées et à devenir plus rentable que celle observée dans la pratique de routine effectués dans l&#39;ouest de laboratoires (liste 1). Une telle approche menée par l&#39;Afrique pourrait bien être essentiel pour appuyer la modernisation des services de laboratoire à un moment où l&#39;infection au VIH, traités par l&#39;ART, est devenue une maladie chronique. Une telle surveillance des CD4 art exige précisément le comptage et la charge virale des technologies connexes, une tâche plus exigeante que de simplement effectuer un taux de CD4 pour placer les patients en groupes arbitraires en vue d&#39;aider une décision sur le démarrage d&#39;ART 16. Avec l&#39;aide de ces diagnostics, c&#39;est à dire en utilisant le test CD8/CD38, il est possible de réduire les coûts de surveillance VL-connexes dans&gt; 60% des patients sous ARV 16,19. Il est également important de souligner que c&#39;est le test CD8/CD38 16,17, et non pas le taux de CD4 37, qui est susceptible de capter les premiers signes de rebonds VL et / ou le manque d&#39;observance des patients dans la prise du médicament. Un élément essentiel d&#39;une approche coordonnée rentable service central est la disponibilité d&#39;un réseau de grande envergure nationale ou régionale appuyés par des experts et conseillers scolaires qui sont familiers avec les aspects techniques et médicaux de l&#39;opération. Cela est démontré par les activités du réseau sud-africain NHLS et les formations CD4 PLG.net 33, 36 qui fournissent des encouragements, de l&#39;éducation et l&#39;évaluation de la qualité pour les centres plus petits et ceux-ci peuvent aussi inclure «point-of-care» des services. Surtout, les opérations de laboratoires centraux et les points de soins sont complémentaires. Alors que le premier a le double rôle de fournir une opération de service rentable à grande échelle ainsi que la formation de base / avancé pour le périphérique laboratoires 33,38, ce dernier contribue à enrayer la propagation de l&#39;ART par le recrutement de patients VIH + qui sont admissibles à ART à partir d&#39;un socle plus grand, y compris les cliniques rurales. Voici quelques précautions sont nécessaires parce que le point-of-care diagnostic peut être beaucoup plus coûteux et ne garantissent pas automatiquement l&#39;exactitude 38. Il est donc judicieux de conserver le système à deux vitesses et à faciliter la coordination entre les deux niveaux sans permettre soit de diminuer le bras. En conclusion, dans le domaine de la surveillance de diagnostic de la gestion clinique des maladies infectieuses une nécessaire réduction des coûts peut être réalisée par les services de apt qui utilisent moins cher et mieux coordonnée des technologies modernes avec une qualité nettement améliorée 13,39. Bien organisé national (et régional) des dispositions service de diagnostic devraient être mieux soutenus 6-8 par éviter un scénario où la quasi-totalité des subventions est gaspillé sur des méthodes coûteuses et / ou prévenus dès que ceux-ci sont importés de pays riches sans attention de pré- préventive examen constructif. De même, une conception plus souple des essais cliniques thérapeutiques avec la pleine participation des médecins locaux et du personnel de santé devrait conduire à la réduction des inutilement fréquentes et / ou trop ambitieux tests de laboratoire 3. Cette politique serait donner plus de chance à une meilleure utilisation de la disposition des résultats précis de diagnostic dans une évaluation coordonnée clinique / laboratoire des patients sous ARV. Ces diagnostics intelligents pourraient aussi être un pionnier pour les pays pauvres en ressources 8 dans les domaines de la tuberculose et les leucémies en utilisant une plate-forme de cytométrie de flux existants familiers 40.

coût global de surveillance et de laboratoire efficace du vih / sida: un modèle en afrique

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Nous vous présentons la vidéo sur l&#39;assistance thérapie anti-rétrovirale (ART) par un service de laboratoire apt - qui représente un modèle sud-africain pour essais à l&#39;échelle économique important de diagnostic. Dans les pays à faible revenu peu coûteuse ART a transformé les perspectives pour la survie des patients séropositifs au VIH, mais il ya des doutes il ya un besoin pour la surveillance en laboratoire de l&#39;ART et à quel prix - dans des situations où la qualité globale des services de pathologie peuvent encore être très faible. La réponse appropriée consiste à établir des services économiquement saine avec une meilleure coordination et une évaluation plus stricte de la qualité interne que vu dans les pays occidentaux. Cette vidéo, photographiés à l&#39;emplacement dans le National Health Laboratory Services (NHLS-SA) à l&#39;Université de Witwatersrand, à Johannesburg, Afrique du Sud, offre un tel programme coordonné l&#39;expansion de l&#39;original 2-couleurs CD4-CD45 stratégie PanLeucoGating (PLG). Ainsi, les six modules de la présentation vidéo révèle la simplicité d&#39;un test de débit à 4 couleurs par cytométrie de combiner des tests hématologiques, immunologiques et virologiques liés dans un seul tube. Ces modules vidéo sont: (i) la mise en place d&#39;instruments, (ii) la préparation des échantillons, (iii) les tests numération absolue et la qualité de surveillance pour chaque échantillon en perles taux de comptage, (iv) la heamatological CD45 test pour globules blancs comptages et les différentiels, (v) le taux de CD4, et (vi) l&#39;activation des cellules T CD8 + CD38 mesurée par l&#39;affichage, un paramètre de la charge virale liée. Le potentiel d&#39;économies sont remarquables. Cet arrangement est un excellent exemple de la possibilité d&#39;effectuer&gt; 800-1000 tests par jour avec un contrôle plus strict de la qualité que celle appliquée dans les laboratoires de l&#39;ouest, et aussi avec un transfert de technologie à d&#39;autres laboratoires au sein d&#39;un réseau NHLS-SA. Conseillers experts, directeurs de laboratoire et les décideurs politiques qui portent le devoir de prendre des décisions concernant l&#39;introduction de la technologie médicale moderne ne sont souvent pas en mesure de voir les derniers détails techniques réalisées dans les grands laboratoires régionaux avec des fardeaux énormes de la charge de travail. Ainsi cette vidéo montre des détails de ces nouveaux développements.

La thérapie antirétrovirale pour traiter le VIH / SIDA est surveillé en Afrique du Sud sur une grande échelle. La cytométrie en flux est combiné pour l&#39;hématologie (CD45), de l&#39;immunologie (CD4) et la charge virale liée CD38 dosage. Enregistré à NHLS-SA laboratoires, à Johannesburg, ces méthodes modernes sont rentables avec contrôle de la qualité accrue locaux internes, servant de modèles de rôle pour les ressources limitées de diagnostic.

Coût global de surveillance et de laboratoire efficace du VIH / sida: un modèle en Afrique

Nous présentons une vidéo sur le soutien au traitement antirétroviral (TAR) par un service de laboratoire adapté, constituant un modèle sud-africain pour une approche économique...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

La quantification des niveaux d'ARN VIH-1 dans le plasma et le séquençage seule VIH-1 génomes d'individus ayant une charge virale en dessous de la limite de détection (50-75 copies / ml) est difficile. Nous décrivons ici comment extraire et de quantifier les ARN viral plasmatique à l'aide en temps réel PCR que les mesures de manière fiable ARN VIH-1 à 0,3 copies / ml et comment amplifier les génomes viraux par séquençage du génome unique, à partir d'échantillons à très faible charge virale.

Amplifier et quantifier l&#39;ARN VIH-1 chez les individus infectés par le VIH ayant une charge virale sous le seuil de détection par Standard tests cliniques

Une méthode de numération des CD4, l'α-test, est décrite qui utilise la salive ensemble, de fournir rapides et précises des taux de CD4. Les sous-α essai coûts et élimine la nécessité d'une formation technique, des réactifs coûteux tels que les anticorps monoclonaux, l'instrumentation, de réfrigération, le transport des échantillons, ainsi que de collecte et de traitement du sang.

Le α-test: Rapid portable sans énumération des CD4 utilisant la salive entier

tests de résistance des médicaments pour le VIH-1 individus infectés échec d'un traitement antirétroviral (ART) peut guider les futurs traitements et d'améliorer les résultats du traitement. Optimisation des individus et des populations résultats pour la santé de la prévalence élevée du VIH, mais les pays à ressources limitées finira par exiger le génotypage de la résistance aux médicaments abordables et accessibles et méthodes d'interprétation.

Une méthode de surveillance abordable VIH-1 pour la résistance aux médicaments à ressources limitées

Nous décrivons ici la cytotoxicité cellulaire et simples essais d'infectivité rondes qui permettent la sélection rapide et précise des composés de déterminer leur cytotoxicité cellulaire (CC 50) et les valeurs IC50 contre WT et VIH-1 résistant médicament.

Dépistage rapide du VIH de la transcriptase inverse et inhibiteurs de l&#39;intégrase

La pathogenèse du VIH-1 est définie à la fois par les caractéristiques virales et les facteurs génétiques de l’hôte. Nous décrivons ici une méthode robuste qui permet d’effectuer des mesures reproductibles pour évaluer l’impact de la variation de la séquence du gène gag sur la capacité de réplication in vitro du virus.

Une enzyme de restriction basée sur le clonage méthode pour évaluer la<em&gt; In vitro</em&gt; Capacité de réplication du VIH-1 sous-type C Gag-MJ4 chimériques virus

Fournit un protocole pour développer un test d’amplification de la polymérase recombinase en temps réel afin de quantifier la concentration initiale d’échantillons d’ADN à l’aide d’un thermocycleur ou d’un microscope et d’un réchauffeur de platine. Le développement d’un contrôle positif interne est également décrit. Des scripts sont fournis pour le traitement des données brutes de fluorescence en temps réel.

Développement d&#39;un Quantitative recombinase polymérase L&#39;amplification Assay avec un contrôle positif interne

La co-infection humaine est difficile à reproduire in vitro. Cependant, les parasites humains du paludisme peuvent facilement être cultivés in vitro, tout comme les cellules mononucléées du sang périphérique humain fraîchement isolées naturellement infectées par le VIH. Il s’agit d’un excellent modèle pour l’étude des réponses immunitaires précoces aux parasites du paludisme dans le contexte de la co-infection par le VIH.

Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Modèle de mesure de réponses immunitaires contre le paludisme dans le contexte du VIH co-infection

Pleine longueur séquençage proviral individuel (FLIPS) fournit une méthode efficace et haut débit pour l’amplification et le séquençage d’unique, près de provirus pleine longueur de VIH-1 (intactes ou défectueux) et permettant la détermination de leur potentiel réplication-compétences. FLIPS surmonte les limites des tests précédents conçus pour séquencer le réservoir latent de VIH-1.

Amplification de près de provirus pleine longueur de VIH-1 pour l’ordonnancement de prochaine génération

Nous avons développé un protocole pour la génération et l'évaluation d'un modèle de souris NOG humanisé et infecté par le virus de l'immunodéficience humaine basé sur la greffe de cellules souches, l'exposition intravaginale au virus de l'immunodéficience humaine et l'ARN PCR numérique de gouttelettes Quantification.

Souris NOG humanisées pour l'exposition intravaginale au VIH et le traitement de l'infection par le VIH

Ici, nous présentons un protocole dans lequel les cellules individuelles sont surveillées pour les événements aigus et l’infection productive par le VIH-1 sur un dispositif nanofluidique. Les données d’imagerie définissent les interactions virus-récepteur hôte et la dynamique de la voie de signalisation. Il s’agit de la première méthode de culture et d’imagerie unicellulaires longitudinales nanofluidiques à haut débit pour étudier la cinétique de signalisation et les interactions moléculaires.

Caractérisation unicellulaire de l’afflux de calcium et de l’infection par le VIH-1 à l’aide d’une plateforme optofluidique multiparamètres

Découvrez la cytométrie en flux pour le suivi du VIH en Afrique du Sud. Cette méthode intègre les marqueurs CD4, CD45 et la charge virale pour améliorer le diagnostic dans les laboratoires aux ressources limitées.

Coût global de surveillance et de laboratoire efficace du VIH / sida: un modèle en Afrique

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