Name: Utiliser limagerie Bioluminescent chargé denquêter sur une synergie entre Streptococcus pneumoniae Et virus Influenza A de souriceaux (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-14T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Découvrez l'imagerie bioluminescente in vivo pour étudier la synergie entre Streptococcus pneumoniae et le virus influenza A chez des souriceaux. Cette méthode permet de suivre la dissémination bactérienne en temps réel dans le même animal.

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Les auteurs tiennent à remercier les conseils techniques de David Briles (Université d&#39;Alabama à Birmingham, AL, USA). Nous tenons à remercier Yvette Chen, le directeur de la protection des animaux de l&#39;Université de Melbourne, et David Taylor, le directeur de l&#39;animalerie, pour des suggestions utiles et des discussions concernant le bien-être animal et éthique et le développement de critères d&#39;intervention et de points d&#39;extrémité humain pour les expériences décrites dans ce manuscrit. Odilia Wijburg et Patrick de lecture sont soutenus par une bourse NHMRC RD Wright, Kirsty court est soutenu par un soutien de GSK Postgraduate de subvention et une bourse Puzey.

<ol><li>Brundage, J. F., Shanks, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths+from+bacterial+pneumonia+during+1918-19+influenza+pandemic%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Deaths from bacterial pneumonia during 1918-19 influenza pandemic.</a> Emerg Infect Dis. 14, 1193-1199 (2008).</li>
<li>Petersdorf, R. G., Fusco, J. J., Harter, D. H., Albrink, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+infections+complicating+Asian+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary infections complicating Asian influenza.</a> AMA Arch Intern Med. 103, 262-272 (1959).</li>
<li>Diavatopoulos, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+facilitates+Streptococcus+pneumoniae+transmission+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus facilitates Streptococcus pneumoniae transmission and disease.</a> Faseb J. , (2010).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J Infect Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li>
<li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+monitoring+of+pneumococcal+meningitis+and+evaluation+of+treatment+efficacy+in+an+experimental+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Noninvasive monitoring of pneumococcal meningitis and evaluation of treatment efficacy in an experimental mouse model.</a> Mol Imaging. 4, 137-142 (2005).</li>
<li>Smith, M. W., Schmidt, J. E., Rehg, J. E., Orihuela, C. J., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pro-+and+anti-inflammatory+molecules+in+a+mouse+model+of+pneumococcal+pneumonia+after+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Induction of pro- and anti-inflammatory molecules in a mouse model of pneumococcal pneumonia after influenza.</a> Comp Med. 57, 82-89 (2007).</li>
<li>Owen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal-associated+lymphoid+tissue+and+olfactory+epithelium+as+portals+of+entry+for+Burkholderia+pseudomallei+in+murine+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Nasal-associated lymphoid tissue and olfactory epithelium as portals of entry for Burkholderia pseudomallei in murine melioidosis.</a> J Infect Dis. 199, 1761-1770 (2009).</li>
<li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol Biol. 292, 285-296 (2005).</li>
<li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li>
</ol>

La production de cette vidéo a été parrainé par l&#39;article Caliper Life Sciences.

L&#39;imagerie in vivo avec la machine IVIS est une méthodologie unique qui permet la visualisation en temps réel de pathogenèse microbienne 4, 6-9. Ici, nous montrons l&#39;application de cette technologie à la compréhension de la synergie entre S. le virus de la grippe pneumoniae et chez des souris nouveau-né. En raison de la nature non-invasive de cette technique, nous avons été en mesure de surveiller la progression de l&#39;infection dans chaque souris au cours du temps. Cela nous a permis de documenter la cinétique de transmission pneumocoque chez les souriceaux de co-logés 3. La nature non invasive de cette technique permet aux chercheurs d&#39;utiliser moins d&#39;animaux par expérience et donc de réduire l&#39;utilisation des animaux. Il est également possible d&#39;utiliser la machine IVIS pour visualiser la dissémination de l&#39;infection à des sites jusqu&#39;alors inconnue de l&#39;infection dans le corps, ainsi que des sites pas facilement échantillonnées par dissection (tels que l&#39;oreille moyenne). Avant de commencer les expériences d&#39;imagerie, nous avons confirmé que les niveaux de colonisation de la bioluminescence EF3030 souche étaient comparables aux niveaux de colonisation de la société mère EF3030 souche en énumérant comptent viable dans des homogénats de tissu. De plus, nous avons d&#39;abord confirmé que l&#39;infection par le virus de la grippe a entraîné une charge accrue des bioluminescents EF3030 dans le nasopharynx de colonisé animaux comme l&#39;a démontré avec le parent EF3030 souche (résultats non présentés). Bien que la technologie IVIS est facile à utiliser et génère reproductible et facile à comprendre les données, les expériences doivent être soigneusement conçues de telle sorte que la sensibilité et l&#39;utilité de la technologie est maximisée. Par exemple, la sensibilité de la caméra IVIS est affectée par la profondeur et l&#39;opacité du tissu 8, qui dans notre expérience, augmente la limite de détection de signaux bioluminescents provenant des poumons. En outre, la fourrure et la peau pigmentée noire réduit la transmission de lumière par autant que 10 fois (par rapport à des souris sans poils) 8. Tout en développant cette méthode, nous avons optimisé ce protocole pour l&#39;utilisation de 5 à 14 jours C57BL ancien / 6 souris et ont depuis démontré que IVIS peut être utilisé pour détecter la colonisation de la vieille C57BL 20 jours / 6 souris avec S. bioluminescents pneumoniae EF3030. Cependant, la détection du signal peut être augmenté lorsque ces expériences sont réalisées chez la souris nude ou BALB / c. Néanmoins, la caméra IVIS représente une nouvelle approche pour suivre, caractériser et finalement comprendre le développement in vivo de la maladie pneumococcique suivants virus influenza A.

utiliser l&#39;imagerie bioluminescent chargé d&#39;enquêter sur une synergie entre streptococcus pneumoniae et virus influenza a de souriceaux

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Durant la pandémie de 1918 virus de la grippe, qui a tué environ 50 millions de personnes dans le monde, la majorité des accidents mortels ne sont pas le résultat d&#39;une infection par le virus de la grippe seul. Au lieu de cela, la plupart des individus sont supposés avoir succombé à une infection bactérienne secondaire, principalement causée par la bactérie Streptococcus pneumoniae (le pneumocoque). La relation synergique entre les infections causées par le virus de la grippe et le pneumocoque a été ensuite observée durant la pandémie de grippe 1957 virus asiatique, ainsi que pendant les épidémies saisonnières du virus (revue en 1, 2). Ici, nous décrivons un protocole utilisé pour étudier le mécanisme (s) qui peuvent être impliqués dans la morbidité a augmenté en raison de la grippe Un virus simultanées et S. l&#39;infection pneumoniae. Nous avons développé un modèle murin d&#39;enfant de façon fiable et reproductible de démontrer les effets de l&#39;infection par le virus de la grippe de souris colonisées par S. pneumoniae. En utilisant ce protocole, nous avons fourni un premier aperçu de la cinétique de transmission pneumocoque entre co-logés, en utilisant des souris néonatales imagerie in vivo 3.

Une infection concomitante par le virus grippal A est l&#39;un des facteurs impliqués dans l&#39;induction de la maladie invasive à pneumocoques pendant asymptomatiques<em&gt; Streptococcus pneumoniae</emChariot&gt;. Nous décrivons ici une méthode d&#39;infection mixte avec des souriceaux d&#39;enquêter sur la synergie entre ces deux agents pathogènes respiratoires.

Utiliser l&#39;imagerie Bioluminescent chargé d&#39;enquêter sur une synergie entre Streptococcus pneumoniae Et virus Influenza A de souriceaux

Lors de la pandémie de virus de la grippe de 1918, qui a fait environ 50 millions de morts dans le monde, la majorité des décès n'étaient pas le résultat de...

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Méthodes pour l'imagerie par bioluminescence des infections bactériennes chez les animaux vivants sont décrits. Les agents pathogènes sont modifiées pour exprimer la luciférase permettant d'imagerie optique du corps entier des infections chez les animaux vivants. Les modèles animaux peuvent être infectés par des pathogènes exprimer la luciférase et le cours résultant de la maladie de visualiser en temps réel par imagerie par bioluminescence.

En utilisant la luciférase aux infections bactériennes chez les souris image

Source : de Vries, C. R., et al., Un modèle d’inoculation retardée de l’infection chronique de la plaie par Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020).Cette vidéo présente une technique d’imagerie bioluminescente pour surveiller la progression de l’infection bactérienne dans un modèle murin vivant. Des bactéries pathogènes conçues avec le système rapporteur luxABCDE émettent de la lumière au site d’infection, permettant la visualisation des bactéries métaboliquement actives. En imageant la...

Imagerie par bioluminescence des infections bactériennes chez la souris

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Modéliser l’infection chez les souris néonatales à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées

Source : Valentine, M. E., et al., Génération de mutants de délétion génique dans le cadre chez Pseudomonas aeruginosa et test de l’atténuation de la virulence dans un modèle simple d’infection chez la souris. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo démontre l’utilisation d’une approche d’imagerie basée sur la bioluminescence pour surveiller l’infection bactérienne dans un modèle murin vivant. L’imagerie séquentielle bioluminescente et par rayons X permet la visualisation en temps réel et la...

Imagerie en temps réel de l’infection bactérienne dans un modèle murin utilisant la bioluminescence

Source : Lenhard, A. et al. Un modèle murin pour la transition de Streptococcus pneumoniae de colonisateur à agent pathogène après une co-infection virale récapitule une maladie aggravée par l’âge. J. Vis. Exp. (2022)Cette vidéo présente un modèle de co-infection chez la souris dans lequel le virus de la grippe déclenche la transition de Streptococcus pneumoniae d’un colonisateur à un agent pathogène. Il décrit les étapes impliquées dans la colonisation bactérienne, l’infection virale et la...

Un modèle murin pour étudier la transition pathogène de Streptococcus pneumoniae après une co-infection virale

Cette vidéo présente une méthode de suivi des infections virales dans des modèles murins à l’aide d’un virus de la grippe A bi-rapporteur exprimant la luciférase recombinante et la protéine de fluorescence. Cette méthode permet des études in vivo et ex vivo, ce qui permet aux chercheurs de mieux comprendre la dynamique virale et les effets des interventions.

Un virus de la grippe rapporteur fluorescent à la luciférase pour suivre les infections virales

Streptococcus pneumoniae est l'agent pathogène menant pneumopathies sévères acquis communautaire et responsable de plus de 2 millions de décès dans le monde. L'impact des facteurs bactériens impliqués dans la virulence de remise en forme ou peut être contrôlé en temps réel dans une pneumonie ou une bactériémie modèle de souris en utilisant des bactéries bioluminescentes aiguë.

Après en temps réel l&#39;impact des facteurs de virulence contre le pneumocoque dans une souris modèle pneumonie aiguë avec bactéries bioluminescentes

Dans cette étude, nous présentons un protocole pour effectuer deux photons intravitale d’imagerie et de la cellule analyse des interactions dans la muqueuse trachéale murine après infection par le virus de la grippe. Ce protocole sera pertinent pour les chercheurs qui étudient la dynamique de cellules immunitaires lors d’infections respiratoires.

Imagerie cellulaire Interaction dans la muqueuse trachéale au cours de l’infection par le Virus grippal à l’aide de la microscopie intravitale biphotonique

Les virus de la grippe A (IvIV) sont des agents pathogènes respiratoires contagieux qui causent des épidémies annuelles et des pandémies occasionnelles. Ici, nous décrivons un protocole pour suivre des infections virales in vivo utilisant une luciferase recombinante nouvelle et fluorescence-exprimant bi-reporter IAV (BIRFLU). Cette approche fournit aux chercheurs un excellent outil pour étudier l'IAV in vivo.

Un virus de la grippe Luciferase-fluorescent Reporter pour l'imagerie en direct et la quantification de l'infection virale

L’infection des souris néonatales avec E. coli bioluminescent O1:K1:H7 a comme conséquence une infection septique avec l’inflammation pulmonaire significative et la pathologie pulmonaire. Ici, nous décrivons des procédures pour modéliser et étudier davantage la septicémie néonatale utilisant la formation image intravitale longitudinale en parallèle avec l’énumération des charges bactériennes systémiques, du profilage inflammatoire, et de l’histopathologie de poumon.

Un modèle néonatal d’imagerie de la septicémie bactérienne gramnégative

Cet article décrit un nouveau modèle murin pour la transition du pneumocoque d’un colonisateur asymptomatique à un agent pathogène pathogène au cours d’une infection virale. Ce modèle peut être facilement adapté pour étudier les interactions polymicrobiennes et hôte-pathogène au cours des différentes phases de la progression de la maladie et entre divers hôtes.

Un modèle murin pour la transition de Streptococcus pneumoniae de colonisateur à pathogène lors d’une co-infection virale récapitule la maladie exacerbée par l’âge

Découvrez l'imagerie bioluminescente in vivo pour étudier la synergie entre Streptococcus pneumoniae et le virus influenza A chez des souriceaux. Cette méthode permet de suivre la dissémination bactérienne en temps réel dans le même animal.

Utiliser limagerie Bioluminescent chargé denquêter sur une synergie entre Streptococcus pneumoniae Et virus Influenza A de souriceaux (Vidéo) | JoVE Journal

Utiliser l'imagerie Bioluminescent chargé d'enquêter sur une synergie entre Streptococcus pneumoniae Et virus Influenza A de souriceaux

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