Name: Linduction et le suivi des actifs dhypersensibilité de type retardé (DTH) chez les rats (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Découvrez l'induction de l'hypersensibilité retardée chez les rats Lewis par immunisation avec l'antigène KLH en émulsion d'adjuvant de Freund. Cette méthode permet de mesurer la réponse inflammatoire par évaluation du gonflement.

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1. Préparation de l&#39;émulsion <ol><li> L&#39;émulsion est un mélange 1:1 de l&#39;antigène (SRD peut être induite à des antigènes différents: l&#39;ovalbumine, l&#39;anatoxine tétanique, serrure patelle hémocyanine ....) en solution aqueuse ajoutée à l&#39;adjuvant complet de Freund. Il est très important d&#39;ajouter l&#39;antigène à l&#39;adjuvant et non l&#39;inverse! </li><li> Il ya beaucoup de déchets lors de l&#39;injection et une émulsion, il faut donc toujours se préparer 1,5 ou 2 fois plus que ce dont vous avez besoin. </li><li> Dissoudre l&#39;antigène dans une solution saline pour préparer un 2 mg / ml solution. Ne pas filtrer, comme vous ne voulez pas perdre les agrégats! </li><li> Mettez complet de Freund adjuvant H37Ra (Difco, catalogue # 231131) dans un tube et le vortex à grande vitesse. Ajouter la chute de l&#39;antigène à goutte tout en vortex. Lorsque tous de l&#39;antigène est ajouté, vortex pendant 5 minutes. Le mélange doit devenir blanc. </li><li> Mettez l&#39;émulsion dans une seringue en verre et de le relier à un autre seringue en verre à l&#39;aide d&#39;un pont 18G (catalogue Fisher n ° 14-825-17L). Envoyer l&#39;émulsion d&#39;une seringue à l&#39;autre jusqu&#39;à ce qu&#39;il devienne dur (5-10 min). Il est préférable d&#39;utiliser deux seringues de 5 ml. Si plus de 5 ml d&#39;émulsion sont nécessaires, utiliser plusieurs ensembles de seringues de 5 ml. </li><li> L&#39;émulsion peut être stockée dans les seringues à 4 ° C pendant 3 semaines. </li></ol> 2. L&#39;immunisation des rats <ol><li> Mélanger l&#39;émulsion dans les seringues pendant quelques minutes et le transfert à la seringue utilisée pour l&#39;injection. Injecter 200 ml par voie sous cutanée en 1-2 sites à la base de la queue à l&#39;aide d&#39;aiguilles 23G et un Luer-Lok pointe 3 mL. </li></ol> 3. Défi avec l&#39;antigène dans le dos <ol><li> Sept jours après la vaccination, se raser deux taches sur le dos des rats et injecter par voie intradermique 20 ml d&#39;une solution à 1 mg d&#39;antigène / ml dans un endroit et une solution saline (ou antigène non pertinent) à l&#39;endroit d&#39;autres. Ne pas filtrer la solution d&#39;antigène, comme vous pouvez perdre des agrégats qui améliorent la réaction inflammatoire. </li><li> Les rats doivent être anesthésiés pour éviter les mouvements. Injecter la solution par voie intradermique à l&#39;aide 27G ½ aiguilles et des seringues de 1 ml. Changer les aiguilles entre les injections. Remarque: le défi peut être fait dans le pavillon de l&#39;oreille plutôt que de l&#39;arrière pour des mesures plus précises. Voir la vidéo au <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. Mesure de la SRD <ol><li> Le site d&#39;injection va commencer à tourner rouge et un gonflement comme un signe d&#39;inflammation. Mesurez le diamètre de la zone enflammée à l&#39;aide d&#39;une règle ou, mieux encore, un étrier. Le gonflement maximal devrait se produire entre 24 et 72 heures. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

Les auteurs sont co-fondateurs et des consultants pour Airmid Inc

Pour une mesure plus précise de la réaction de DTH, nous recommandons contester le rat avec l&#39;antigène dans le pavillon de l&#39;oreille. La réaction peut alors être mesurée comme une différence dans l&#39;oreille de l&#39;enflure entre les antigènes concernés a contesté l&#39;oreille et l&#39;oreille a contesté avec une solution saline seule ou avec l&#39;antigène pertinent. Une démonstration de relever le défi de l&#39;oreille est montré dans 1.

Utilisez stériles réactifs des solutions et des seringues. Les seringues en verre et les ponts 18G peuvent être autoclavés. Lire fiche signalétique avant de manipuler un réactif pour la première fois et porter un équipement protecteur.

l&#39;induction et le suivi des actifs d&#39;hypersensibilité de type retardé (dth) chez les rats

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

Type de l&#39;hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire qui infiltrent le site de l&#39;injection d&#39;un antigène contre lequel le système immunitaire a été amorcée. La réaction inflammatoire est caractérisée par une rougeur et une enflure du site de stimulation antigénique. C&#39;est un modèle pratique pour déterminer l&#39;efficacité in vivo d&#39;immunosuppresseurs. SRD cutanée peut être induite soit par transfert adoptif de lymphocytes T spécifiques d&#39;antigènes ou par l&#39;immunisation active avec un antigène, et les suivantes défi intradermique avec l&#39;antigène pour induire la réaction inflammatoire dans une zone de peau donnés. Réponses DTH peuvent être induites à des antigènes différents, par exemple l&#39;ovalbumine, la tuberculine, anatoxine tétanique, ou hémocyanine de patelle (KLH). Ici nous démontrons comment provoquer une réaction active SRD chez le rat Lewis. Nous allons d&#39;abord préparer une émulsion eau dans huile de KLH, notre antigène d&#39;intérêt, dans l&#39;adjuvant complet de Freund et injecter cette émulsion sous-cutanée à des rats. Ce sera le système immunitaire pour développer des cellules T mémoires dirigés à la KLH. Sept jours plus tard, nous mettra au défi les rats par voie intradermique sur le dos avec KLH d&#39;un côté et avec de l&#39;ovalbumine, un antigène non pertinents, de l&#39;autre côté. La réaction inflammatoire sera visible de 16 à 72 heures plus tard et la zone rouge et enflée sera mesuré comme une indication de la gravité de SRD.

Type de l&#39;hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire. Ici nous démontrons comment provoquer SRD actifs chez le rat Lewis et de surveiller la réponse inflammatoire.

L&#39;induction et le suivi des actifs d&#39;hypersensibilité de type retardé (DTH) chez les rats

L'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par des lymphocytes T mémoires effecteurs CCR7+ qui infiltrent le site d'injection de...

Bonjour, je suis Christine Beaton. Je travaille dans le laboratoire de George Chandy, au Département de physiologie et de biophysique de l'UCI. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment induire une réaction de type hypersensibilité retardée (DTH) active chez le rat.Pour cela, je vais préparer une émulsion de KLH, qui est mon antigène, dans un adjuvant de Freund. Ensuite, je vais injecter cette émulsion à la base de la queue de rats Lewis. Cela va induire une immunisation des rats contre le KLH. Et une semaine plus tard, je vais provoquer une réaction chez les rats avec le KLH et mesurer la réaction d'hyper-sensibilité retardée (HSR) par la mesure du gonflement.C'est le site de l'épreuve et nous l'utilisons au laboratoire pour observer l'effet des bloqueurs des canaux PO sur les réactions inflammatoires telles que l'hypersensibilité retardée (HSR). Voici l'adjuvant trans incomplet que je vais utiliser pour préparer l'émulsion. Je pourrais également utiliser un adjuvant trans complet.Voici du quartz de KLH, qui est mon antigène aujourd'hui, et j'ai une solution à deux milligrammes par ml. Dans du PBS, je vais utiliser cette seringue de 5 ml pour prélever l'adjuvant incomplet et le tr

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Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-effectrices T mémoire (TEM) des lymphocytes. Ici nous démontrons comment activer les cellules spécifiques de l'antigène TEM, induisent SRD adoptifs chez le rat Lewis et de surveiller la réponse inflammatoire.

L&#39;induction et la surveillance des parents adoptifs hypersensibilité de type retardé chez les rats

Ici nous démontrons une méthode pour induire et d'enregistrer les progrès d'un retard de type hypersensibilité (SRD) réaction de l'oreille chez le rat. Elle est suivie par une démonstration de la préparation du tissu de l'oreille chez le rat pour l'imagerie à deux photons de la réponse cellulaire effecteur / T mémoire.

Imagerie Les cellules T effectrices de mémoire dans l&#39;oreille après induction de SRD adoptifs

Cette vidéo montre comment provoquer hypophysite auto-immunes chez la souris SJL et comment évaluer sa gravité par histopathologie.

L&#39;induction de hypophysite auto-immune expérimentale chez la souris SJL

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Trans-vivo de type hypersensibilité retardée test pour le règlement spécifique de l&#39;antigène

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L’hypersensibilité de contact (SHC) est un modèle expérimental murin de dermatite de contact allergique (DCA). Le SHC est basé sur la sensibilisation à l’haptène réactif en peignant la peau rasée de la poitrine et de l’abdomen, avec un défi cutané ultérieur de l’oreille avec un haptène dilué, provoquant une réaction de gonflement qui est évaluée de diverses manières.

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Modèle murin d’immunomodulation induite par l’épi-peau

Les efforts déployés pour isoler la sous-unité catalytique de la télomérase, TERT, en quantité suffisante pour des études structurales, ont été atteints avec un succès limité pendant plus d'une décennie. Ici, nous présentons les méthodes pour l'isolement de la protéine recombinante TERT Tribolium castaneum...

La reconstitution in vitro de l&#39;actif T. La télomérase castaneum

Découvrez l'induction de l'hypersensibilité retardée chez les rats Lewis par immunisation avec l'antigène KLH en émulsion d'adjuvant de Freund. Cette méthode permet de mesurer la réponse inflammatoire par évaluation du gonflement.

L'induction et le suivi des actifs d'hypersensibilité de type retardé (DTH) chez les rats

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