Imagerie navire Contraste rehaussé utilisant microCT

L’objectif de cette technique d’imagerie des vaisseaux avec contraste amélioré à l’aide de la tomodensitométrie microscopique ou de la micro-tomodensitométrie est de fournir une méthode optimale pour générer des ensembles de données de haute qualité pour l’analyse des réseaux vasculaires chez les souris vivantes. Ceci est accompli par injection intraveineuse d’un agent de contraste radio-opaque in vivo. Ensuite, l’animal est préparé pour l’imagerie par micro-tomodensitométrie en induisant une anesthésie et en positionnant l’animal en toute sécurité dans une chambre multimodale afin de réduire les artefacts de mouvement pendant les micro-tomodensitogrammes.

Après les balayages, les données micro-tomodensitométriques sont reconstruites et chargées dans le logiciel de visualisation. La dernière étape de la procédure consiste à ajuster les paramètres de la fonction de transfert bidimensionnel pour améliorer la visibilité des vaisseaux sanguins et pour fournir des couleurs différentes aux vaisseaux sanguins, aux os et aux tissus mous à des fins de distinction. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus qui montrent le réseau vasculaire chez les animaux vivants grâce à l’imagerie améliorée par contraste opaque CT et au rendu de la fonction de transfert bidimensionnelle.

Bonjour, je m’appelle Sue Resh, PJA Patti de l’Institut d’imagerie des petits animaux du Département de l’Institut de recherche sur le cancer des enfants du Centre des sciences de la santé de l’Université du Texas, à San Antonio. Je m’appelle Charles Keller, je travaille également à l’Institut de recherche sur le cancer des enfants Greehey du Centre des sciences de la santé de l’Université du Texas à San Antonio. Aujourd’hui, nous allons vous montrer une procédure de visualisation des vaisseaux sanguins chez les animaux vivants à l’aide d’un agent de contraste de pool sanguin radio-opaque.

Nous utilisons cette procédure dans nos laboratoires pour étudier les vaisseaux intermédiaires et les gros vaisseaux de tumeurs spontanées complexes chez nos souris transgéniques. Alors commençons. Pour commencer cette procédure, obtenez 0,2 millilitre pour 20 grammes de 20 milligrammes d’iode par millilitre de sang iodé Agent de contraste Xia un 60 xl à l’aide d’une seringue à insuline à faible espace mort 28 et demi de calibre demi-cc.

Injectez l’agent de contraste dans une souris vivante par la veine distale de la queue. 10 minutes après l’injection. Préparez les animaux pour l’imagerie par micro-tomodensitométrie.

Tout d’abord, anesthésiez les animaux dans une boîte en acrylique reliée à 2 % de fluor dans 100 % d’oxygène à 2,5 litres par minute. Après quelques minutes, effectuez un pincement des orteils pour vérifier la profondeur de l’anesthésie. Ensuite, pour minimiser les artefacts de mouvement, stabilisez la souris en la plaçant dans une chambre multimodale construite sur mesure, disponible dans le commerce, avec une disposition pour l’air et l’évacuation.

Maintenez une alimentation en air avec 2 % de fluor et 100 % d’oxygène pour assurer une anesthésie continue de l’animal pendant l’examen. Une fois la souris préparée, elle peut être numérisée sur une unité de micro-tomodensitométrie capable d’effectuer des scans d’animaux vivants. Connectez la chambre multimodale contenant la souris aux tubes d’échappement de la course.

À l’aide du locus tomodensitomètre volumétrique GE Explorer, l’animal peut être scanné à une résolution de 93 micromètres. Ce scanner volumétrique utilise un détecteur CCD de 3 500 x 1750 pour la reconstruction de Feld Camp et un réglage constant des paramètres indépendants de la plate-forme avec un courant de 450 microampères, une tension d’un kilo DP et un temps d’exposition de 100 millisecondes. Pour obtenir un contraste supérieur entre l’os et les tissus mous du vaisseau, les paramètres standard peuvent être modifiés avec cinq à huit images par vue et un nombre de vues de 360 à 720 pour une rotation complète de 360 degrés, utilisez un temps de balayage total d’environ 15 à 20 minutes après la tomodensitométrie.

Reconstruisez les images à l’aide du logiciel de faisceau EVS propriétaire du fabricant. Continuez à surveiller la souris jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie de l’anesthésie. Une fois reconstruites, les données micro CT peuvent être utilisées pour une fonction de transfert d’isosurface avancée unidimensionnelle ou bidimensionnelle.

Rendu d’images à l’aide d’un logiciel de traitement d’image 3D SEG pour rendre une projection bidimensionnelle de l’ensemble de données tridimensionnelles, utilisez une fonction de transfert bidimensionnelle qui améliore encore la distinction entre le vaisseau et l’os. Pendant le rendu de l’image, attribuez des couleurs et des opacités à l’échantillon de rayon en fonction de la fonction de transfert, qui à son tour dépend de la valeur CT et de l’amplitude du dégradé. Ajustez manuellement les fonctions de transfert en fonction des conseils fournis par les histogrammes de valeurs CT pour mettre en évidence les zones et les objets d’intérêt affichés.

Voici des résultats représentatifs montrant une fonction de transfert bidimensionnelle rendant une image sur un scan micro CT d’une souris de type sauvage injectée avec Xia one 60 xl. Nous venons de vous montrer comment générer des ensembles de données de haute qualité pour l’analyse des réseaux vasculaires chez des souris vivantes. Cette technique pourrait très bien être utilisée pour l’évaluation qualitative et quantitative de l’anti-angiogenèse dans des études précliniques utilisant des souris transgéniques ou xénogreffes.

Lors de cette procédure, il est important de se rappeler d’obtenir une injection parfaite de l’agent de contraste dans la veine de la queue et de positionner l’animal de manière à minimiser l’artefact de mouvement qui peut se produire en raison de la respiration. Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.