Name: En injection intraventriculaire Utero et lélectroporation dembryons de souris E15 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: Apprenez l'injection intraventriculaire in utero et l'électroporation d'embryons de souris E15. Cette méthode permet d'introduire de l'ADN plasmidique dans le cerveau en développement pour étudier la fonction génique.

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en injection intraventriculaire utero et l&#39;électroporation d&#39;embryons de souris e15

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In utero in vivo par injection et l&#39;électroporation du néocortex embryonnaires de souris fournit un outil puissant pour la manipulation des progéniteurs individuels qui tapissent les parois du ventricule latéral. Cette technique est maintenant largement utilisée pour étudier les processus impliqués dans corticogenesis par une sur-exprimant ou faire tomber les gènes et l&#39;observation des effets sur la prolifération cellulaire, la migration et la différenciation. En comparaison avec les stratégies KO traditionnelle, in utero électroporation fournit un moyen rapide de manipuler une population de cellules pendant une fenêtre temporelle spécifique. Dans ce protocole vidéo, nous présentons la méthodologie expérimentale pour la préparation de souris pour la chirurgie, ce qui expose les cornes utérines travers laporatomy, l&#39;injection d&#39;ADN dans les ventricules latéraux de l&#39;embryon en développement, électroporation d&#39;ADN dans le progéniteurs tapissant la paroi latérale, et le soin des animaux post-opératoire . Notre laboratoire utilise ce protocole pour les chirurgies sur le E13-E16 souris, cependant, il est plus couramment effectuées au E15, comme le montre cette vidéo.

En injection intraventriculaire Utero et l&#39;électroporation d&#39;embryons de souris E15

L'injection in vivo in utero et l'électroporation du néocortex embryonnaire de souris constituent un outil puissant pour la manipulation de progéniteurs individuels...

Bonjour, je suis William Tis du laboratoire Krete. Aujourd'hui, moi et d'autres chercheurs allons vous montrer des injections intra-utérines d'embryons de souris E 15. Bonjour, je m'appelle Laura Elias.Aujourd'hui, je vais vous montrer comment préparer les pipettes de microinjection et les charger pour les injections intraventriculaires et l'électroporation que nous allons réaliser. Je m'appelle David Castaneda et aujourd'hui, je vais assister à des injections in vivo in utero d'embryons de souris. Nous allons injecter de l'ADN plasmidique dans le ventricule latéral d'embryons de souris en développement.Nous ciblons le cortex CE de ces embryons afin d'obtenir une expression de différentes molécules par les cellules gliales, qui deviendront plus tard des neurones au cours du développement. Lors de ces injections intra-utérines, il existe quelques outils importants que vous devrez utiliser, et je vais vous les montrer maintenant. Nous utilisons un freer, ainsi qu'une paire de forceps addin.Un, une paire dentelée et une autre paire présentant une petite dent à l'extrémité. Nous utilisons une paire de pinces hémostatiques. Ceci est une paire de ciseaux.Ensuite, nous utilisons ces deux

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e15-mouse

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En injection intraventriculaire Utero et l&#39;électroporation d&#39;embryons de rat E16

En chirurgie de survie in utero chez la souris permet la manipulation moléculaire de l'expression des gènes pendant le développement. Nous décrivons ici l'utilisation de l'imagerie à haute fréquence à ultrasons pour guider l'injection de vecteurs rétroviraux dans le cerveau de souris au jour embryonnaire (E) 9.5.

Guidée par échographie microinjection dans le cerveau antérieur souris In Utero À E9.5

Électroporation in utero permet la livraison rapide dans un gène spatialement et temporellement contrôlée manière le développement du système nerveux central (SNC). Nous décrivons ici un très adaptables dans le protocole d'électroporation in utero qui peut être utilisé pour livrer des constructions d'expression dans de multiples domaines du SNC embryonnaire, y compris le télencéphale, diencéphale et la rétine.

Livraison efficace de gènes dans les Territoires du SNC multiples à l&#39;aide In Utero L&#39;électroporation

Une méthode de transfert de gènes dans le cerveau de souris en développement est décrit en utilisant une méthode unique de chirurgie et la forme particulière des électrodes. Cette technique unique permet la transfection d'ADN plasmidique temporellement et spatialement, ce qui aidera de nombreux neuroscientifiques à étudier le développement du cerveau.

Souris dans Utero électroporation: contrôlé Transefection Gene spatio-temporelle

Contrôle de l'expansion des cellules souches somatiques est un facteur majeur qui pèse sur leurs études et leur utilisation en thérapie. Ici, nous décrivons un système à contrôler temporellement les cellules souches neurales l'expansion au cours du développement et de l'âge adulte, ce qui peut être utilisé pour augmenter le nombre de neurones générés dans le cerveau de souris.

Expansion du embryonnaires et cellules souches neurales adultes par<em&gt; In Utero</em&gt; Électroporation ou virale par injection stéréotaxique

Cette vidéo démontre l’administration de l’ADN plasmidique dans les cellules neuronales cérébelleuses d’embryons murins en utilisant l’électroporation in utero. Cette méthode est utile pour comprendre la fonction in vivo des gènes dans le développement normal du cerveau et les changements dans l’expression des gènes des cellules neuronales au cours de la progression tumorale.

Livraison de gènes basée sur l’électroporation in utero : une technique pour injecter de l’ADN plasmidique dans des cellules cérébelleuses embryonnaires d’embryons murins

Malgré l'importance fonctionnelle et médicale de...

Manipulation génétique de la souris en développement à travers l&#39;hypothalamus<em&gt; In utero</em&gt; Électroporation

Ce protocole décrit en détail comment transfecter spécifiquement différentes régions du système nerveux central C57BL/6 via électroporation in utero. Ce protocole comprend des instructions détaillées pour les transfections de régions qui se développent dans le cortex, l’hippocampe, le thalamus, l’hypothalamus, le noyau septal latéral et le striatum.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, latéral Septal Nucleus- et le striatum spécifique<em&gt; In Utero</em&gt; L&#39;électroporation dans la souris C57BL / 6

L’électroporation double in utero permet de cibler les populations cellulaires qui sont séparées spatialement et temporellement. Cette technique est utile pour visualiser les interactions entre ces populations cellulaires à l’aide de protéines fluorescentes dans des conditions normales, mais aussi après des expériences fonctionnelles pour perturber les gènes d’intérêt.

Double électroporation in utero pour cibler les populations cellulaires séparées temporellement et spatialement

Dans ce protocole, nous décrivons comment injecter le lentivirus à la cavité amniotique de la souris à E7.5, conduisant à une transduction uniforme de toute la plaque neurale, avec des effets néfastes minimes sur la survie ou le développement embryonnaire.

Ciblage de la plaque neurale murine par nano-injection in utero (NEPTUNE) au jour embryonnaire 7,5

Apprenez l'injection intraventriculaire in utero et l'électroporation d'embryons de souris E15. Cette méthode permet d'introduire de l'ADN plasmidique dans le cerveau en développement pour étudier la fonction génique.

En injection intraventriculaire Utero et l'électroporation d'embryons de souris E15

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