Imagerie bioluminescente de la progression d’une tumeur mammaire dans un modèle murin femelle

Commencez avec une souris femelle injectée avec des cellules tumorales du sein exprimant la luciférase.

Les cellules tumorales prolifèrent au site d’injection et se transforment en une tumeur primaire.

Placez la souris dans une chambre d’imagerie avec un flux d’anesthésie pour anesthésier la souris.

Ensuite, injectez de la luciférine, un substrat de la luciférase, dans la souris anesthésiée.

La luciférine circule et pénètre dans les cellules tumorales, réagissant avec la luciférase pour émettre une bioluminescence.

À l’aide du système d’imagerie, capturez le signal de bioluminescence de la souris.

Au fil du temps, la tumeur progresse au niveau du site primaire et métastase dans les poumons.

Acquérez l’image de la souris à intervalles réguliers et définissez les régions d’intérêt.

Sur la base des intensités de bioluminescence, construisez la cinétique de croissance tumorale pour les deux sites.

Au fil du temps, une augmentation constante du signal sur le site de la tumeur primaire indique une prolifération tumorale continue.

Cependant, une forte augmentation de la bioluminescence pulmonaire à des moments ultérieurs suggère une métastase des cellules tumorales.

Pour commencer, maintenez la lignée cellulaire 4T1 dans le milieu modifié Eagle de Dulbecco ou DMEM supplémenté. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de dioxyde de carbone.

Transfectez la lignée cellulaire 4T1 avec le gène Luc2 pour exprimer la luciférase, une enzyme bioluminescente produite de manière constitutive. Incuber les cellules pour les garder prêtes pour l’injection chez la souris.

Cinq minutes après avoir anesthésié et préparé une souris femelle Balb-C, injectez 2 fois 10 à la puissance cinq cellules 4T1 exprimant la luciférase par voie sous-cutanée dans le dos gauche à l’aide d’une seringue d’insuline de 1 millilitre. Hébergez l’animal pendant 4 semaines après l’injection.

Pour l’imagerie, placez la souris anesthésiée en position couchée dorsale dans la zone désignée de l’équipement d’imagerie bioluminescente. Injectez à la souris par voie intrapéritonéale 100 microlitres de solution de D-luciférine à une concentration de 15 milligrammes par millilitre.

Pour ajuster les paramètres d’imagerie, réglez le filtre d’émission ouvert sans excitation, le binning sur 8, le F-Stop sur 2 et le type de champ de vision sur D. Capturez 20 images bioluminescentes sur 20 minutes pour chaque animal à chaque point final d’imagerie, en vous assurant que les images représentent une intégration de signal de 60 secondes.

À l’aide du logiciel de l’équipement, définissez des régions d’intérêt spécifiques pour distinguer les signaux de tumeur primaire et de métastases pulmonaires. Identifier les signaux bioluminescents au site d’injection et dans la région thoracique où se produisent les métastases. Calculez la progression tumorale en fonction de l’intensité du signal bioluminescent.

À l’aide d’images collectées chaque semaine, construisez un profil de cinétique de croissance pour représenter les changements d’intensité du signal au fil du temps au niveau de la tumeur primaire et des sites métastatiques. Comparez les tendances de l’intensité du signal pour analyser la progression tumorale et les métastases.