Name: Respirométriques évaluation phosphorylation oxydative dans la saponine perméabilisées fibres cardiaques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-28T18:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: Découvrez comment évaluer la phosphorylation oxydative mitochondriale dans des fibres cardiaques perméabilisées à la saponine. Cette méthode de respirométrie haute résolution permet de mesurer précisément la fonction mitochondriale in situ.

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Cette étude a été financée par les Instituts canadiens de recherche en santé et Génome Canada. JS détient bourses d&#39;aide salariale de l&#39;Alberta Heritage Foundation for Medical Research, Heart and Stroke Foundation du Canada et l&#39;Association canadienne du diabète. Le laboratoire tient à souligner l&#39;aide technique des instruments Oroboros lors de l&#39;acquisition de la technique des fibres perméabilisées saponine.

<ol><li>Saks, V. A., Veksler, V. I., Kuznetsov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeabilized+cell+and+skinned+fiber+techniques+in+studies+of+mitochondrial+function+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Permeabilized cell and skinned fiber techniques in studies of mitochondrial function in vivo.</a> Mol Cell Biochem. 184, 81-100 (1998).</li>
<li>Gnaiger, E., Kuznetsov, A. V., Schneeberger, S. Mitochondria in the cold. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGnaiger%2C+E+%22Life+in+the+Cold%22">Life in the Cold</a>. Heldmaier, G., Klingenspor, M. , Springer. Berlin, Heidelberg, New York. 431-442 (2000).</li>
<li>Rasmussen, H. N., Rasmussen, U. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+solubilities+of+media+used+in+electrochemical+respiration+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Oxygen solubilities of media used in electrochemical respiration measurements.</a> Anal Biochem. 319, 105-113 (2003).</li>
<li>Visscher, G. D. e, Rooker, S., Jorens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentobarbital+fails+to+reduce+cerebral+oxygen+consumption+early+after+non-hemorrhagic+closed+head+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Pentobarbital fails to reduce cerebral oxygen consumption early after non-hemorrhagic closed head injury in rats.</a> J Neurotrauma. 22, 793-806 (2005).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., Veksler, V., Gellerich, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function+in+situ+in+permeabilized+muscle+fibers%2C+tissues+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function in situ in permeabilized muscle fibers, tissues and cells.</a> Nat Protoc. 3, 965-976 (2008).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+conformance+of+cellular+respiration.+A+perspective+of+mitochondrial+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Oxygen conformance of cellular respiration. A perspective of mitochondrial physiology.</a> Adv Exp Med Biol. 543, 39-55 (2003).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+oxidative+phosphorylation+in+human+skeletal+muscle%3A+new+perspectives+of+mitochondrial+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Capacity of oxidative phosphorylation in human skeletal muscle: new perspectives of mitochondrial physiology.</a> Int J Biochem Cell Biol. 41, 1837-1845 Forthcoming.</li>
<li>Sena, S., Hu, P., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+insulin+signaling+accelerates+cardiac+mitochondrial+dysfunction+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Impaired insulin signaling accelerates cardiac mitochondrial dysfunction after myocardial infarction.</a> J Mol Cell Cardiol. 46, 910-918 (2009).</li>
<li>Boudina, S., Sena, S., O'Neill, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+mitochondrial+oxidative+capacity+and+increased+mitochondrial+uncoupling+impair+myocardial+energetics+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Reduced mitochondrial oxidative capacity and increased mitochondrial uncoupling impair myocardial energetics in obesity.</a> Circulation. 112, 2686-2695 (2005).</li>
<li>Lenaz, G., Genova, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+organization+of+mitochondrial+respiratory+complexes%3A+a+new+understanding+of+an+old+subject%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Structure and organization of mitochondrial respiratory complexes: a new understanding of an old subject.</a> Antioxid Redox Signal. 12, 961-1008 Forthcoming.</li>
<li>Lemieux, H., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+the+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerg+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in the human heart.</a> J Bioenerg Biomembr. 41, 99-106 (2009).</li>
<li>O, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retarded+diffusion+of+ADP+in+cardiomyocytes%3A+possible+role+of+mitochondrial+outer+membrane+and+creatine+kinase+in+cellular+regulation+of+oxidative+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Retarded diffusion of ADP in cardiomyocytes: possible role of mitochondrial outer membrane and creatine kinase in cellular regulation of oxidative phosphorylation.</a> Biochim Biophys Acta. 1144, 134-148 (1993).</li>
<li>Endo, M., Kitazawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((E-C+coupling+studies+in+skinned+cardiac+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Aspects+of+Cardiac+Muscle%22%5BJournal%5D)">E-C coupling studies in skinned cardiac fibers.</a> Biophysical Aspects of Cardiac Muscle. Morad, M. , Academic. New York. 307-327 (1978).</li>
<li>Veksler, V. I., Kuznetsov, A. V., Sharov, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+respiratory+parameters+in+cardiac+tissue%3A+a+novel+method+of+assessment+by+using+saponin-skinned+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial respiratory parameters in cardiac tissue: a novel method of assessment by using saponin-skinned fibers.</a> Biochim Biophys Acta. 892, 191-196 (1987).</li>
<li>Bangham, A. D., Horne, R. W., Glauert, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+saponin+on+biological+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Action of saponin on biological cell membranes.</a> Nature. , 196-952 (1962).</li>
<li>Daum, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipids+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Lipids of mitochondria.</a> Biochim Biophys Acta. 822, 1-42 (1985).</li>
<li>Milner, D. J., Mavroidis, M., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmin+cytoskeleton+linked+to+muscle+mitochondrial+distribution+and+respiratory+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Desmin cytoskeleton linked to muscle mitochondrial distribution and respiratory function.</a> J Cell Biol. 150, 1283-1298 (2000).</li>
<li>Skladal, D., Sperl, W., Schranzhofer, R. Preservation of mitochondrial functions in human skeletal muscle during storage in high energy preservation solution (HEPS). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSkladal%2C+D+%22What+is+Controlling+Life%3F%22">What is Controlling Life?</a>. Skladal, E., Gellerich, F., Wyss, M. , Univ. Press. Vol 3. Modern Trends in BioThermoKinetics 268-271 (1994).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., Wiedemann, F. R., Winkler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+saponin-permeabilized+muscle+fibers+for+the+diagnosis+of+mitochondrial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Biofactors%22%5BJournal%5D)">Use of saponin-permeabilized muscle fibers for the diagnosis of mitochondrial diseases.</a> Biofactors. 7, 221-223 (1998).</li>
<li>Gnaiger, E. Polarographic oxygen sensors, the oxygraph and high-resolution respirometry to assess mitochondrial function. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGnaiger%2C+E+%22Drug-Induced+Mitochondrial+Dysfunction%22">Drug-Induced Mitochondrial Dysfunction</a>. Dykens, J., Will, Y. , John Wiley & Sons, Inc. 327-352 (2008).</li>
</ol>

La technique de la saponine perméabilisées fibres cardiaques offre un compromis unique entre in vitro et in vivo l&#39;évaluation de la consommation d&#39;oxygène des mitochondries OXPHOS. Avantages de cette technique comprennent une augmentation pertinence physiologique par rapport aux mitochondries isolées de l&#39;architecture cellulaire est préservée. Alors que la membrane plasmique est dégradé, les structures membranaires intracellulaires, y compris 12 des mitochondries, 14, 14</su...

<table><tbody><tr><td>Éthanol à 100 %</td><td>Fisher Scientific</td><td>HC600</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol à 70 %</td><td>Fisher Scientific</td><td>HC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Adénosine 5&amp;#8242;-sel monopotassique de diphosphate dihydraté (ADP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5285</td><td></td></tr><tr><td>Albumine de sérum bovin essentiellement dépourvue d'acides gras&amp;#8211;gratuit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-6003</td><td></td></tr><tr><td>Antimycine A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Acide ascorbique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>Adénosine 5&amp;#8242;-sel de disodium de triphosphate hydraté (ATP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2383</td><td></td></tr><tr><td>Atractyloside</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6882</td><td></td></tr><tr><td>Carbonate de calcium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4830</td><td></td></tr><tr><td>Carbonyl cyanure de p-(trifluorométhoxy) phénylhydrazone (FCCP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Cytochrome c</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7752</td><td></td></tr><tr><td>Digitonine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothréitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>Éthylène glycol-bis-(2-amino&amp;#8211;thyléther)-N,N,N&amp;#8242;, N&amp;#8242;acide éthylèneglycol-bis(β-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique (EGTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Acide glutamique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>27647</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5513</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>Pfizer Pharma GmbH</td><td></td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Acide lactobionique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>153516</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium (MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium hexahydraté (MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;#8729;6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>acide malique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1000</td><td></td></tr><tr><td>MES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3671</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N&amp;rsquo;,&amp;rsquo;-Tétraméthyl-p-phénylènediamine, chlorhydrate (TMPD)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3134</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O4876</td><td></td></tr><tr><td>Phosphocréatine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7936</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de potassium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5958</td><td></td></tr><tr><td>Cyanure de potassium</td><td>Fluka</td><td>60178</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate monobasique de potassium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Roténone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Saponine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital de sodium</td><td>Ceva Santé Animale</td><td>1715 138</td><td>Conc. 54,7 mg/ml</td></tr><tr><td>pyruvate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Acide succinique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3674</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7903</td><td></td></tr><tr><td>Taurine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8691</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer AG</td><td></td><td>Rompun</td></tr><tr><td>ddH₂O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glace</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oroboros Oxygraph-2k</td><td>Oroboros Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>VWR international</td><td>21905-026</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à centrifuger en polypropylène de 15 ml</td><td>VWR international</td><td>89004-368</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à centrifuger en polypropylène de 50 ml</td><td>VWR international</td><td>89004-364</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à bijoutier droites</td><td>George Tiemann &amp;et Cie</td><td>160-50B</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à embouts incurvés pour bijoutier</td><td>George Tiemann &amp;et Cie</td><td>160-57B</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux droits</td><td>George Tiemann &amp;et Cie</td><td>105-402</td><td></td></tr><tr><td>Lame de scalpel stérile</td><td>VWR international</td><td>BD371610</td><td></td></tr><tr><td>0.45-&amp;mu;Filtres à seringue m</td><td>VWR international</td><td>CA28145-485</td><td></td></tr><tr><td>pH-mètre</td><td>VWR international</td><td>CA11388-308</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de Petri en verre</td><td>VWR international</td><td>89000-300</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture tissulaire en polystyrène, 12 puits</td><td>VWR international</td><td>82050-926</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur magnétique</td><td>VWR international</td><td>97042-594</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Microbars</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-511-67</td><td></td></tr><tr><td>Balance de pesée</td><td>VWR international</td><td>CA11278-162</td><td></td></tr><tr><td>10&amp;mu;syringe micro-à piston Hamilton</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-815-1</td><td></td></tr><tr><td>25&amp;mu;syringe micro-à l'aiguille Hamilton</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-824-7</td><td></td></tr><tr><td>50&amp;mu;syringe micro-à l'aiguille Hamilton</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-824-5</td><td></td></tr><tr><td>Flacons pression Nalgene</td><td>Wilkem Scientific</td><td>LNA2407-1000</td><td></td></tr><tr><td>Plats de pesée en polystyrène</td><td>VWR international</td><td>89106-750</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stéréoscopique</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

respirométriques évaluation phosphorylation oxydative dans la saponine perméabilisées fibres cardiaques

Respirometric Oxidative Phosphorylation Assessment in Saponin-permeabilized Cardiac Fibers

Enquête sur la fonction mitochondriale représente un paramètre important de la physiologie cardiaque que les mitochondries sont impliquées dans le métabolisme énergétique, le stress oxydatif, l&#39;apoptose, le vieillissement, encéphalomyopathies mitochondriale et la toxicité des médicaments. Dans ce contexte, les technologies pour mesurer la fonction mitochondriale cardiaques sont en demande. Une technique qui emploie une approche intégrative pour mesurer la fonction mitochondriale est respirométriques phosphorylation oxydative (OXPHOS) analyse. Le principe de l&#39;évaluation OXPHOS respirométriques est centrée autour de la mesure de la concentration en oxygène en utilisant une électrode de Clark. Comme le faisceau de fibres perméabilisées consomme l&#39;oxygène concentration en oxygène, dans les baisses de chambre fermée. En utilisant des protocoles de titration sélectionnée substrat-inhibiteur découplant, les électrons sont fournis à des sites spécifiques de la chaîne de transport d&#39;électrons, ce qui permet l&#39;évaluation de la fonction mitochondriale. Avant l&#39;analyse respirométriques de la fonction mitochondriale, mécaniques et chimiques des techniques de préparation sont utilisées pour perméabiliser le sarcolemme des fibres musculaires. Perméabilisation chimique emploie saponine de façon sélective perforer la membrane cellulaire tout en conservant l&#39;architecture cellulaire. Ce document décrit en détail les étapes impliquées dans la préparation de saponine peau fibres cardiaques pour mesurer la consommation d&#39;oxygène afin d&#39;évaluer OXPHOS mitochondriale. De plus, le dépannage des conseils ainsi que des substrats spécifiques, les inhibiteurs et découpleurs qui peuvent être utilisées pour déterminer la fonction des mitochondries dans des sites spécifiques de la chaîne de transport d&#39;électrons sont fournis. Fait important, le protocole décrit peut être facilement appliquée à des tissus cardiaques et squelettiques de divers modèles animaux et des échantillons humains.

Préparation des fibres perméabilisées saponine en conjonction avec l&#39;analyse de phosphorylation oxydative respirométriques fournit une évaluation intégrative de la fonction mitochondriale. Respiration mitochondriale dans les états physiologiques et pathologiques peuvent refléter diverses influences réglementaires, y compris les interactions des mitochondries, la morphologie et la biochimie.

Respirométriques évaluation phosphorylation oxydative dans la saponine perméabilisées fibres cardiaques

L'étude de la fonction mitochondriale représente un paramètre important de la physiologie cardiaque, car les mitochondries sont impliquées dans le métabolisme énergétique, ...

L'objectif général de cette procédure est de préparer des fibres cardiaques perméabilisées à la saponine pour des mesures polarographiques. Cela est réalisé en premier lieu en excisant le cœur de la souris. La deuxième étape de la procédure consiste à préparer mécaniquement des faisceaux de fibres cardiaques contenant au maximum six à huit fibres faiblement connectées.Ensuite, les faisceaux cardiaques sont chimiquement perméabilisés à l'aide de saponine. Les faisceaux cardiaques sont alors lavés pour éliminer toute saponine résiduelle ainsi que tout métabolite restant. Enfin, des résultats peuvent être obtenus, fournissant des informations sur la phosphorylation oxydative mitochondriale grâce à des mesures polarographiques.Bonjour, je suis Curtis Huey du laboratoire de la Dre Jane Sheer, du Département de biochimie et de biologie moléculaire de l'Université de Calgary. Aujourd'hui, nous allons vous montrer une procédure permettant de préparer des fibres cardiaques perméabilisées à la saponine. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour évaluer la phosphorylation oxydative mitochondriale in situ.Commençons. Pour commencer cette procédure, retirez un cœur marin et pla

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Méthodes pour la biopsie du vaste externe, préparation de mitochondries purifiées, et le profilage respirométrique sont décrits. L'utilisation de petit volume musculaire rend cette technique convient pour des applications de recherche clinique.

Préparation et respirométrique évaluation des mitochondries isolées de tissu musculaire squelettique Obtenu par biopsie percutanée aiguille

Les méthodes présentées fournissent des instructions étape par étape pour la réalisation d’une collection de tests respiratoires basés sur des microplaques utilisant des mitochondries isolées à partir de quantités minimales de muscle squelettique de souris. Ces tests sont capables de mesurer les changements/adaptations mécanistes de la consommation d’oxygène mitochondrial dans un modèle animal couramment utilisé.

Utilisation de mitochondries isolées à partir des quantités minimes de souris muscle squelettique pour microplaques à haut débit respiratoire mesurée

Le protocole suivant décrit la préparation et l’utilisation de tampons pour la mesure quantitative des taux d’oxydation du glucose et des acides gras dans le cœur isolé du rat actif. Les méthodes utilisées pour l’analyse des échantillons et l’interprétation des données sont également abordées.

Méthodes pour la détermination des taux de glucose et oxydation des acides gras dans le coeur isolé de rat de travail

Haute résolution de respirométrie est utilisé pour déterminer la consommation d'oxygène des mitochondries. Cette technique est simple de déterminer les complexes de la chaîne respiratoire mitochondriale »(I-IV) de la fréquence respiratoire, la capacité maximale du système de transport d'électrons mitochondriale, et l'intégrité de la membrane externe mitochondriale.

Haute résolution Respirométrie pour évaluer la fonction mitochondriale dans perméabilisées et des cellules intactes

Ce protocole décrit le calorespirometry, la mesure directe et simultanée de dissipation de la chaleur et la respiration, qui fournit une approche non invasive pour évaluer le métabolisme énergétique. Cette technique est utilisée pour évaluer la contribution des voies aérobies et anaérobies à l’utilisation de l’énergie en contrôlant le flux d’énergie cellulaire totale.

Calorespirometry : Une approche puissante et non invasive pour étudier le métabolisme énergétique cellulaire

L’évaluation de la phosphorylation oxydative à l’aide de respiromètres à haute résolution est devenue une partie intégrante de l’analyse fonctionnelle des mitochondries et du métabolisme énergétique cellulaire. Ici, nous présentons des protocoles pour l’analyse du métabolisme énergétique cellulaire à l’aide de respiromètres haute résolution à chambre et à microplaques et discutons des principaux avantages de chaque appareil.

La respirométrie à haute résolution pour évaluer la bioénergétique dans les cellules et les tissus à l’aide de respiromètres à chambre et à plaques

Ici, nous décrivons une méthode détaillée pour l’isolement des mitochondries du muscle squelettique de la souris et l’analyse ultérieure de la respiration par taux de consommation d’oxygène (OCR) à l’aide de tests respirométriques sur microplaques. Ce pipeline peut être appliqué pour étudier les effets de multiples interventions environnementales ou génétiques sur le métabolisme mitochondrial.

Isolement des mitochondries du muscle squelettique de la souris pour les tests respirométriques

La respirométrie à haute résolution couplée à des capteurs de fluorescence détermine la consommation mitochondriale d’oxygène et la génération d’espèces réactives de l’oxygène (ROS). Le présent protocole décrit une technique pour évaluer la fréquence respiratoire mitochondriale et la production de ROS dans le nerf sciatique perméabilisé.

Évaluation de la fonction mitochondriale dans le nerf sciatique par respirométrie à haute résolution

Les chevaux ont une capacité d’exercice aérobique exceptionnelle, faisant du muscle squelettique équin un tissu important pour l’étude de la physiologie de l’exercice équin ainsi que de la physiologie mitochondriale des mammifères. Cet article décrit des techniques pour l’évaluation complète de la fonction mitochondriale dans le muscle squelettique équin.

Fluoro-respirométrie à haute résolution du muscle squelettique équin

L’analyse de la fonction mitochondriale des spermatozoïdes par respirométrie à haute résolution permet de mesurer la consommation d’oxygène des spermatozoïdes se déplaçant librement dans un système à chambre fermée. La technique peut être appliquée pour mesurer la respiration dans les spermatozoïdes humains, ce qui fournit des informations sur les caractéristiques et l’intégrité mitochondriales des spermatozoïdes.

Respirométrie à haute résolution pour évaluer la fonction mitochondriale chez les spermatozoïdes humains

Ici, nous décrivons une méthode complète pour mesurer la phosphorylation oxydative mitochondriale dans les fibres musculaires squelettiques perméabilisées fraîches à partir de muscles humains ou de souris. Cette méthode permet de quantifier en temps réel la respiration mitochondriale et d’évaluer la préférence pour le carburant et la flexibilité métabolique tout en préservant les réseaux mitochondriaux existants et l’intégrité de la membrane.

Mesure de la respiration mitochondriale dans les fibres musculaires squelettiques humaines et murines par respirométrie à haute résolution

Découvrez comment évaluer la phosphorylation oxydative mitochondriale dans des fibres cardiaques perméabilisées à la saponine. Cette méthode de respirométrie haute résolution permet de mesurer précisément la fonction mitochondriale in situ.

Respirométriques évaluation phosphorylation oxydative dans la saponine perméabilisées fibres cardiaques

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