Name: Quantification des ADNdb utilisant le Hitachi F-7000 Spectrophotomètre de fluorescence et de PicoGreen Dye (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Apprenez la quantification de l'ADNdb avec le spectrophotomètre de fluorescence Hitachi F-7000 et le colorant PicoGreen. Cette méthode établit une courbe de calibration linéaire pour analyser avec précision de petites quantités d'ADN.

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1. Configuration de l'instrument <ol><li> Allumez le spectrofluorimètre et laisser chauffer pendant 1 heure. </li><li> Utilisation d'Excel créer un fichier avec les normes et les données d'échantillon, comme le montre la figure 1 et l'enregistrer dans Comma Separated Values ​​"CSV". <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig1.jpg" alt="Figure 1"> Figure 1. Normes et les données des échantillons. </li><li> Mettre en place fluorimètre comme suit: <ol><li> Cliquez sur le <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon1.jpg" alt="Icône 1"> bouton, cela ouvrira la fenêtre de méthode d'analyse, montre la figure 2. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig2.jpg" alt="Figure 2"> Figure 2. Fenêtre méthode d'analyse, onglet Général. Effectuez les sélections suivantes: <ul><li> Dans la "mesure", sélectionnez Photométrie du menu déroulant. </li><li> En champ "Opérateur", entrez le nom de l'opérateur approprié. </li><li> Il n'est pas nécessaire d'entrer des informations dans le «Règlement» le terrain. Cette option est sélectionnée automatiquement par le logiciel. </li><li> Le "prélèvement" champ est inactif lorsque vous utilisez le lecteur de microplaques. </li><li> Saisissez tout commentaire que vous pourriez inclure dans le rapport de la champ "Commentaires". </li><li> Dans le "Accessoire", entrez les informations relatives aux accessoires utilisés pour ce test. </li><li> Notez les boutons sur le côté droit de la fenêtre. </li><li> Le bouton "Charger" permet de charger les méthodes d'analyse précédemment enregistré. </li><li> Le bouton "Sauvegarder" permet la mise à jour d'un ensemble de paramètres de test ou d'une méthode d'analyse préalablement enregistrés et chargés, en utilisant le même nom. </li><li> Le "Enregistrer sous" bouton permet d'enregistrer un nouvel ensemble de paramètres de test ou d'une méthode d'analyse sous un autre nom désiré. </li></ul> Cliquez maintenant sur ​​le "quantification" onglet, voir la figure 3 et effectuez les sélections suivantes. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig3.jpg" alt="Figure 3"> Figure 3. Fenêtre méthode d'analyse, onglet quantification. <ul><li> Dans le "type de quantification", sélectionnez onde. Ceci indique la lecture de fluorescence seront effectués en utilisant la longueur d'onde sélectionnée. </li><li> Dans le «type d'étalonnage", sélectionnez une vue st. </li><li> Dans le champ "Nombre de longueurs d'onde", sélectionnez 1. </li><li> Dans l '"unité de concentration", entrez ng / mL. </li><li> Laisser les cases non sélectionnées pour "Calibrage manuel» et «courbe de force grâce à zéro". </li><li> Dans le "chiffre après la virgule", sélectionnez 2. </li><li> Dans la "limite inférieure de concentration", entrez 0. </li><li> Dans le "champ de concentration limite supérieure, entrez 10000. </li></ul> Cliquez maintenant sur ​​«l'Instrument» onglet et effectuez les sélections suivantes. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig4.jpg" alt="Figure 4"> Figure 4. Fenêtre de méthode d'analyse, onglet Instrument <ul><li> Dans le mode "données" de terrain, sélectionnez fluorescence. </li><li> La «vitesse à découper« champ est inactif en ce moment, il n'est utilisé que pour des mesures de phosphorescence. </li><li> Dans le mode "Wavelength", sélectionnez la fois fixe WL. </li><li> Dans le "EX / WL1" entrez 480nm. </li><li> Dans le «EM / WL1" entrez 520nm. </li><li> Tous les autres champs sous EX et EM sont inactifs en ce moment. </li><li> Dans la "fente EX" champ de sélectionner 5.0nm du menu déroulant. </li><li> Dans le «EM fente" sur le terrain de sélectionner 5.0nm du menu déroulant. </li><li> Laisser désélectionné la case en face de la "tension PMT 1-1000V" sur le terrain. </li><li> Dans la "tension PMT", sélectionnez 700V à partir du menu déroulant. </li><li> Dans le «calc Auto statistique. Numéro de" champ de sélectionner 2. </li><li> Dans la «Réplique» champ de sélectionner 1. </li><li> Dans le «Temps d'intégration" champ de sélectionner 0.1s. &lt;/ Li&gt; </li><li> Dans le "retard" entrez ou sélectionnez 0. </li></ul> Cliquez sur l'onglet "Moniteur". <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig5.jpg" alt="Figure 5"> Figure 5. Fenêtre de méthode d'analyse, onglet Moniteur. <ul><li> Dans «l'axe Y", "Max:", sélectionnez 10000 </li><li> Dans «l'axe Y", "Min:« champ, sélectionnez 0. </li><li> Sélectionnez la case à gauche du "traitement de données ouvertes après l'acquisition des données". </li><li> Laisser désélectionné la case à la gauche du "rapport d'impression après l'acquisition des données", sauf si vous voulez un rapport qui sera imprimé automatiquement après les lectures sont terminées. </li></ul> Cliquez sur l'onglet "Report", voir la figure 6. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig6.jpg" alt="Figure 6"> Figure 6. Fenêtre de méthode d'analyse, onglet Rapport. <ul><li> Dans la "sortie", sélectionnez Imprimer rapport du menu déroulant. Vous pouvez également sélectionner "Utiliser Microsoft Excel» si vous voulez que les données exportées vers Excel, ou la «feuille Générateur Utilisez Imprimer» si vous utilisez le complément optionnel sur Report Generator programme qui permet de générer des rapports personnalisés de fait. </li><li> Cliquez sur les cases des éléments que vous voulez être inclus dans le rapport. </li><li> Pour enregistrer tous les paramètres sélectionnés dans les différents onglets de la «Méthode d'analyse" fenêtre, cliquez à nouveau sur l'onglet "Général" et de les enregistrer sous un nom de fichier et dans un endroit où vous pourrez les trouver pour une utilisation future, et cliquez sur le " OK "pour fermer cette fenêtre. </li><li> Ceci achève la mise en place des paramètres de test instrument. </li><li> Maintenant, nous allons mettre en place le lecteur de microplaques. </li><li> Cliquez sur le <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon2.jpg" alt="Icône 2"> bouton, ce qui portera la fenêtre de configuration du MPR sur le dessus. </li></ul> Sélectionner des puits pour les normes et les échantillons dans la configuration de MPR fenêtre / onglet Plate, comme le montre la Figure 7. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig7.jpg" alt="Figure 7"> Figure 7. Fenêtre d'installation MPR, onglet Plate. <ul><li> Cliquez sur la position A1 et faites glisser la souris pour E1, puis cliquez sur le <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon3.jpg" alt="Icône 3"> bouton. Cela permet de sélectionner les postes à être utilisée pour les normes. Ces positions seront surlignés en couleur verte. </li><li> Maintenant nous avons besoin pour sélectionner F1 postes à H3 pour les échantillons. Cliquez et faites glisser la souris à partir de F1 position, à la position H3 et puis cliquez sur le <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon4.jpg" alt="Icône 4"> bouton, cela va mettre en évidence les positions de couleur jaune. </li><li> Ensuite, répétez la même opération pour des postes A2 à l'E3, pour sélectionner les postes pour les mesures d'échantillons. </li><li> Maintenant, nous allons charger le fichier Comma Separated Variable (CSV) préparé à l'avance avec les normes et les informations de l'échantillon. </li></ul> Cliquez sur "information bien" de l'onglet "Fenêtre de configuration du MPR», comme le montre la Figure 8. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig8.jpg" alt="Figure 8"> Figure 8. Fenêtre d'installation MPR, onglet Informations bien. <ul><li> Puis cliquez sur le <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon5.jpg" alt="Icône 5"> bouton. Une fenêtre de l'explorateur Windows s'ouvre qui, comme le montre la figure 9, ce qui permettra à localiser la «Eh bien information.csv" fichier et de le charger. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig9.jpg" alt="Figure 9"> Figure 9. Chargement des informations puits d'échantillon. Après le chargement du "information bien" fichier, "l'information Well" sera comme le montre la figure 10 <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig10.jpg" alt="Figure 10"> Figure 10. Chargé d'information de l'échantillon ainsi. </li></ul></li></ol></li></ol> 2. Préparation Picogreen échantillon d'essai <ol><li> Préparer 1X tampon TE (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA) en ajoutant 1 ml de tampon 20 X TEà 19 ml dI H 2 O. </li><li> Préparer la solution de réactif PicoGreen en ajoutant 50 pl 200 X PicoGreen réactif à 9,95 ml de tampon 1 X TE. </li><li> Préparer des normes (Lambda ADNdb) en faisant des dilutions successives du stock ADNdb (100 pg / mL). D'abord préparer une solution de 50 ug / ml ADNdb en ajoutant 25 uL de stock ADNdb (100 pg / ml) et 25 uL 1 x tampon TE. Puis la préparation des solutions standard en ajoutant les volumes indiqués d'ADN double brin et un tampon comme indiqué dans le tableau ci-dessous: <table border="1"><tbody><tr><td> Concentration des ADNdb </td><td> Volume d'ADN double brin </td><td> Volume de tampon </td></tr><tr><td> 1 ug / ml </td><td> 20 ul de 50 ug / ml ADNdb </td><td> 980 uL 1 X tampon TE </td></tr><tr><td> 0,1 pg / ml </td><td> 100 uL de 1 pg / mL ADNdb </td><td> 900 pi X 1 tampon TE </td></tr><tr><td> 0,01 pg / ml </td><td> 100 uL de 0,1 pg / mL ADNdb </td><td> 900 pi X 1 tampon TE </td></tr><tr><td> 0,001 g / mL </td><td> 100 ul de 0,01 pg / mL ADNdb </td><td> 900 pi X 1 tampon TE </td></tr></tbody></table></li></ol> 3. Mesure des normes et de fluorescence de l'échantillon <ol><li> Pipeter 150 uL de chaque norme dans les puits A1-E1 d'une plaque de 96 puits, par la figure 7, et selon le tableau suivant: <table border="1"><tbody><tr><td> Eh bien </td><td> Standard </td></tr><tr><td> A1 </td><td> 1 ug / ml </td></tr><tr><td> B1 </td><td> 0,1 pg / ml </td></tr><tr><td> C1 </td><td> 0,01 pg / ml </td></tr><tr><td> D1 </td><td> 0,001 g / mL </td></tr><tr><td> E1 </td><td> 1 X tampon TE </td></tr></tbody></table></li><li> Pipeter 150 uL échantillons inconnus dans des puits F1 à H3, illustré à la figure 7 </li><li> Verser la solution PicoGreen préparés à l'étape 1.2 dans une auge conçu pour une utilisation pipette multi-canaux. Utiliser une pipette multi-canaux pour livrer 150 uL solution PicoGreen aux puits A1-H3. Mélanger la solution et les normes doucement avec la pipette. </li><li> Placez la plaque dans la zone sombre et attendre 2-5 minutes pour une réaction à se développer. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs Une courbe de calibration de bons est évaluée en utilisant les différents paramètres fournis par le logiciel F-7000 sur la mesure des normes et le calcul de la courbe d'étalonnage par le logiciel. Le coefficient de détermination indique la qualité de l'ajustement des normes mesurées et la courbe de calibration calculé. Le plus proche de cette valeur est à "1", le mieux l'ajustement de la valeur mesurée et la courbe de calibration. Si la valeur est loin d'être «1», les normes doivent être ré-évalués, préparés à nouveau, ou l'aptitude de la courbe de calibration changé. La figure 11 montre un exemple d'une courbe d'étalonnage avec un coefficient de détermination calculée = 0,99993, obtenus pour la quantification des ADN double brin à l'aide PicoGreen colorant. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig11.jpg" alt="Figure 11"> Figure 11. Exemple de courbe de calibration ADNdb.

<ol><li>Singer, V. L., Jones, L. J., Yue, S. T., Haugland, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+PicoGreen+reagent+and+development+of+a+fluorescence-based+solution+assay+for+double-stranded+DNA+quantitation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of PicoGreen reagent and development of a fluorescence-based solution assay for double-stranded DNA quantitation.</a> Analytical Biochemistry. 249 (2), 228-238 (1997).</li>
</ol>

Luis A. Moreno et Kendra L. Cox sont employés par Hitachi America Technologies Haute qui produit l&#39;instrument utilisé dans cet article.

Pipetage prudent lors de la préparation des échantillons, ainsi que l&#39;aide d&#39;un spectrophotomètre à fluorescence stable et sensible est essentielle pour obtenir de bons résultats et reproductibles. Dans le cas du spectrophotomètre de fluorescence utilisé pour ce test, il est suggéré d&#39;utiliser le volume 300 uL de l&#39;échantillon final dans le lecteur de microplaques. Baisser le volume diminue la sensibilité, et un plus grand volume peut provoquer une contamination croisée entre les puits.

<table><tbody><tr><td>H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O distillée</td><td>Réactif</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit d'évaluation Quant-iT Picogreen ADN double brin (dsDNA) d'Invitrogen</td><td>Réactif</td><td></td><td>P7589</td><td></td></tr><tr><td>Plaques microfluorescentes Nalge Nunc, n° de pièce 237108</td><td>Consommable</td><td></td><td>237108</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multipuits Eppendorf 12 canaux</td><td>Consommable</td><td></td><td>3516677</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Eppendorf de 1000 &amp;mu;L</td><td>Consommable</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette Eppendorf de 200 &amp;mu;L</td><td>Consommable</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette serologique de 10 mL</td><td>Consommable</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Feuille d'aluminium</td><td>Consommable</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette</td><td>Consommable</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotomètre de fluorescence Hitachi F-7000 avec logiciel FL Solutions 2.1</td><td>Équipement</td><td></td><td>5J1-0003</td><td></td></tr><tr><td>Accessoire pour plaque microplaques pour F-7000</td><td>Équipement</td><td></td><td>5J0-0139</td><td></td></tr></tbody></table>

quantification des adndb utilisant le hitachi f-7000 spectrophotomètre de fluorescence et de picogreen dye

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen Dye

La quantification de l&#39;ADN, en particulier dans les petites concentrations, est une tâche importante avec un large éventail d&#39;applications biologiques, y compris la norme tests de biologie moléculaire telles que la synthèse et la purification de l&#39;ADN, les applications diagnostiques telles que la quantification des produits d&#39;amplification d&#39;ADN, et la détection de molécules d&#39;ADN à la drogue préparations. Durant cette vidéo, nous allons démontrer la capacité du spectrophotomètre Hitachi F-7000 fluorescence équipé d&#39;un accessoire lecteur de plaque d&#39;effectuer une quantification Micro ADNdb utilisant Molecular Probes Quant-on kit PicoGreen réactif colorant. Le spectrophotomètre F-7000 offre une haute sensibilité de fluorescence et les mesures à haute vitesse. C&#39;est un système très flexible capable de fluorescence de mesure, la luminescence, et la phosphorescence. Plusieurs modes de mesure sont disponibles, y compris les longueurs d&#39;onde, balayage temps, la photométrie et en 3-D de balayage de mesure. Le spectrophotomètre a une sensibilité de l&#39;ordre de 50 picomoles de fluorescéine en utilisant un volume d&#39;échantillon 300 ul de la microplaque, et est capable de mesurer des vitesses de numérisation de 60.000 nm / minute. Il a également une large gamme dynamique allant jusqu&#39;à 5 ordres de grandeur qui permet l&#39;utilisation des courbes de calibrage sur une large gamme de concentrations. Le système optique utilise toutes les optiques réfléchissants pour un maximum d&#39;énergie et de sensibilité. La gamme de longueur d&#39;onde est de 200 à 750 nm, et peut être étendue à 900 nm en utilisant l&#39;un des proches option photomultiplicateurs infrarouge. Le système permet un contrôle de température en option pour le lecteur plaque de 5 à 60 degrés Celsius en utilisant une option de la température extérieure circulateur liquide. Le lecteur de microplaques permet l&#39;utilisation de microplaques 96 puits, et la mesure de la vitesse de 96 puits est inférieur à 60 secondes lorsque vous utilisez le mode cinétique. Logiciel de contrôle pour le F-7000 et lecteur de microplaques sont également très flexible. Les échantillons peuvent être mis dans des formats colonne ou une ligne non plus, et toute combinaison de puits peuvent être choisis pour les mesures de l&#39;échantillon. Cela permet une utilisation optimale de la microplaque. De plus, le logiciel permet d&#39;importer des exemples de configurations de micro plaque créés dans Excel et sauvegardées dans des valeurs séparées par des virgules, ou &quot;CSV&quot;. Configurations microplaques de mesure peuvent être sauvegardés et rappelés par le logiciel pour plus de commodité et une productivité accrue. Des résultats Les données peuvent être sorties d&#39;un rapport standard, au format Excel, ou à un programme générateur de rapport facultatives.

Démonstration de la quantification des ADN double brin à l&#39;aide Molecular Probes PicoGreen colorant et spectrophotomètre Hitachi fluorescence F-7000 équipé d&#39;un accessoire lecteur de microplaques.

Quantification des ADNdb utilisant le Hitachi F-7000 Spectrophotomètre de fluorescence et de PicoGreen Dye

La quantification de l'ADN, en particulier à de faibles concentrations, est une tâche cruciale présentant un large éventail d'applications biologiques, notamment en biologie moléculaire standard...

L'objectif général de cette procédure est de démontrer la capacité du spectrophotomètre de fluorescence F 7,000 équipé d'un lecteur de microplaques à quantifier l'ADN double brin à l'aide du colorant Pico green. Cela est réalisé en préparant tout d'abord les échantillons et les réactifs. La deuxième étape de la procédure consiste à configurer l'instrument.La troisième étape de la procédure consiste à charger les échantillons dans le lecteur de microplaques. La dernière étape de la procédure est la mesure des étalons et des échantillons. En fin de compte, on peut obtenir des résultats montrant une courbe d'étalonnage linéaire, qui pourrait être utilisée pour la quantification de l'ADN double brin d'échantillons inconnus.Activez le fluorimètre Hitachi F 7,000 pour permettre à la lampe au xénon de chauffer pendant une heure dans Excel. Créez un fichier contenant les données des étalons et de l'échantillon, puis enregistrez-le au format de valeurs séparées par des virgules (CSV). Pour configurer le fluorimètre, cliquez d'abord sur le bouton « méthode », ce qui ouvre la fenêtre de méthode d'analyse.Dans le champ de mesure, sélectionnez la photométrie dans le menu déroulant. Cliquez maintenant sur l'onglet de quantification. Dans le champ de type de quantification, sélectionnez longueur d'onde pour indiquer que la lecture de fluorescence sera effectuée à l'aide d'une longueur d'onde spécifiée.Pour le type d'étalonnage, sélectionnez le premier ordre, et pour le nombre de longueurs d'onde, sélectionnez un. Saisissez des nanogrammes par millilitre comme unité de concentration. Assurez-vous que les cases « étalonnage manuel » et « forcer la courbe à passer par zéro » ne sont pas cochées. Après la virgule, sélectionnez deux chiffres, saisissez zéro comme limite inférieure de concentration, et 10 000 comme limite supérieure de concentration.Ensuite, cliquez sur l'onglet de l'instrument et, dans le champ du mode de données, sélectionnez la fluorescence. Vérifiez que le champ de vitesse de modulation est inactif, car il est uniquement utilisé pour les mesures de phosphorescence. Dans le champ du mode de longueur d'onde, sélectionnez les deux longueurs d'onde fixes ; dans le champ ex WL un, saisissez 480 nanomètres dans le champ EM WL un.Saisissez 520 nanomètres. Laissez tous les autres champs sous EX et EM inactifs. Réglez la fente d'excitation et la fente d'émission sur 5,0 nanomètre.À l'aide des menus déroulants, laissez la case devant le champ de tension du PMT allant de 1 à 1000 volts non cochée. Pour la tension du PMT, sélectionnez 700 volts dans le menu déroulant. Sélectionnez également deux pour le nombre de calculs statistiques automatiques, un pour les réplicats, 0,1 seconde pour le temps d'intégration et zéro pour le délai.Ouvrez maintenant l'onglet moniteur et réglez le champ maximum de l'axe des ordonnées à 10 000 et le minimum de l'axe des ordonnées à zéro. Cochez ensuite la case située à gauche de l'option « Traiter les données après l'acquisition », et si nécessaire, la case située à gauche de l'option « Imprimer le rapport après l'acquisition » pour qu'un rapport soit imprimé automatiquement à la fin des mesures. Enfin, pour enregistrer tous les paramètres sélectionnés dans les différents onglets de la fenêtre de méthode d'analyse, cliquez sur l'onglet général et enregistrez sous un nouveau nom de fichier dans un emplacement spécifié.Cliquez sur le bouton OK pour fermer cette fenêtre. Cela termine la configuration des paramètres de test de l'instrument. Afin de configurer le lecteur de microplaques, cliquez sur le bouton MPR pour faire apparaître la fenêtre de configuration du MPR au premier plan.Tout d'abord, sélectionnez les puits pour les étalons. Par exemple, cliquez sur la position A1 et faites glisser la souris jusqu'à E1. Ensuite, cliquez sur le bouton définir l'étalon.Cela permettra de sélectionner les positions à utiliser pour les étalons, mises en évidence par une couleur verte. Ensuite, sélectionnez les positions pour les échantillons. De la même manière, cliquez et faites glisser la souris sur les positions correspondantes de la plaque, puis cliquez sur le bouton de l'ensemble d'échantillons, ce qui mettra automatiquement en surbrillance les positions sélectionnées en jaune.Continuer à répéter la même opération pour les positions des mesures d'échantillons souhaitées. Pour charger les informations concernant les étalons et les échantillons dans le fichier à variables séparées par des virgules préparé précédemment, cliquer sur l'onglet d'information des puits dans la fenêtre de configuration MPR.Sélectionnez le bouton d'information sur les puits de chargement et une fenêtre Windows Explorer s'ouvrira pour identifier le fichier au format csv contenant les informations sur les puits. Après le chargement des données, la fenêtre doit afficher un tableau. Afin de préparer une solution working de réactif Pico green, ajoutez 50 microlitres de réactif Pico green 200 X à 9,95 millilitres de tampon TE.Pour la courbe standard, préparez des dilutions sérielles d'ADN double brin Lambda dans un tampon TE pour des concentrations finales allant de un à 100 nanogrammes par millilitre. Pipetez 150 microlitres de chaque standard dans les puits désignés d'une plaque 96 puits. Ensuite, pipetez 150 microlitres de chaque échantillon test dans les puits correspondants de la plaque. Puis, à l'aide d'une pipette multipuits, ajoutez 150 microlitres de solution Pico green dans chaque puit et mélangez la solution et les échantillons d'ADN.Incubez doucement la plaque dans un endroit sombre pendant deux à cinq minutes pour permettre le développement de la réaction. Cliquez sur le bouton de l'écran d'affichage MPR pour faire apparaître la fenêtre de configuration MPR au premier plan de l'affichage, puis cliquez sur le bouton d'échange de position. La plateforme de maintien de la microplaque se déplacera vers l'avant de l'appareil, ouvrira la porte du lecteur de microplaque, placera la plaque de 96 puits sur la plateforme de maintien avec le puits A1 orienté vers l'avant, puis refermera la porte du lecteur de microplaque.Cliquez sur le bouton de position initiale pour placer la position A d'une microplaque en position de mesure. Cliquez sur le bouton d'affichage du moniteur pour faire apparaître la fenêtre de mesure au premier plan de l'écran. Cliquez sur le bouton de mesure pour commencer à mesurer les étalons et les échantillons inconnus.Une bonne courbe d'étalonnage est évaluée à l'aide des différents paramètres fournis par le logiciel F 7,000. Par exemple, cette courbe d'étalonnage idéale obtenue pour la quantification d'ADN bicaténaire à l'aide du colorant Pico green présente un coefficient de détermination calculé de 0,99993. Le système à haut débit décrit correspond à un assemblage en série de technologies comprenant le colorant Pico Green, un spectrophotomètre de fluorescence Hitachi F 7,000 équipé d'un lecteur de microplaques et d'un programme informatique permettant d'automatiser la collecte, le stockage, l'analyse et la présentation des données.La combinaison de technologies puissantes peut répondre au besoin croissant d'analyser avec précision de faibles quantités d'ADN double brin.

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