Name: Enregistrements à partir de cellules entières du cerveau dadulte drosophile (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Apprenez l'enregistrement en cellule entière sur cerveau de drosophile adulte pour neurophysiologie. Cette méthode permet d'étudier l'activité neuronale avec marquage GFP et analyse électrophysiologique détaillée.

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Ce travail a été soutenu par une subvention du NIH NS27501 DKOD. Un appui supplémentaire pour ce travail a été fourni par une subvention du Programme HHMI professeur d&#39;DKOD.

Dissection I. de cerveaux de mouche adulte <ol><li> Placer une petite goutte (~ 100 pi) de disséquer solution dans le centre d&#39;un plat de Pétri de 35 mm. </li><li> Catch femelle adulte à l&#39;aide aspirateur. Sous loupe binoculaire, utiliser deux aiguilles de seringue à décapiter la volée. </li><li> Placez la tête dans une petite goutte de solution saline dissection (avec de la papaïne ajoutée) dans une boîte de Pétri. </li><li> Position de la tête avec avec proboscis face fond du plat. </li><li> Tenez la cuticule qui couvre l&#39;œil composé gauche avec l&#39;aiguille 1. Faire une coupe en diagonale qui s&#39;étend de la dorsale à la surface ventrale avec une aiguille 2, juste en dedans de l&#39;aiguille 1. </li><li> Tenez les pièces buccales avec aiguille 1 et 2 l&#39;utilisation de seringues pour faire une coupe horizontale qui s&#39;étend de la surface ventrale de l&#39;œil gauche à l&#39;œil droit, au niveau de la base de trompe. </li><li> Tenez la cuticule qui couvre l&#39;œil composé à droite avec l&#39;aiguille 1. Faire une coupe en diagonale qui s&#39;étend de la dorsale à la surface ventrale avec une aiguille 2, juste médiale de l&#39;aiguille 1. </li><li> Tournez la tête de sorte que le côté rostrale est à la surface une boîte de Pétri. Insérez l&#39;aiguille 1, entre la cuticule rostrale et le cerveau, et l&#39;utilisation d&#39;aiguilles de 2 à suivre le même chemin que la première aiguille. Idéalement, la capsule sera décoller du cerveau avec les deux lobes optiques attachés car ils sont important dans la stabilisation du cerveau pour l&#39;enregistrement. </li><li> La trachée, sacs aériens, et d&#39;autres tissus conjonctifs sont soigneusement enlevé en utilisant deux pinces à pointe fine. </li><li> Dissection entier devrait prendre 3-10 minutes </li></ol> II. Montage du SNC <ol><li> Le cerveau est transféré à la chambre d&#39;enregistrement à l&#39;aide d&#39;une pipette extrémité jaune. </li><li> Dans la chambre d&#39;enregistrement, le cerveau est stabilisé en plaçant le cadre de platine tels que les deux réticules de beaux prendre contact avec le tissu à la jonction entre les lobes optiques et de la région du cerveau central. </li><li> Chaque cerveau est autorisé à se reposer dans la chambre d&#39;enregistrement avec une perfusion continue avec une solution saline oxygénée (95% d&#39;oxygène et de dioxyde de carbone de 5%) pendant au moins 10 minutes. Perfusion de la chambre avec une solution saline oxygénée est poursuivie pendant toute la période d&#39;enregistrement. La préparation est visualisée en utilisant un microscope droit (Axioskop 2FS; Zeiss, Oberkochen, Allemagne) avec une scène fixe et un objectif 40x d&#39;eau par immersion (Achroplan; ouverture numérique, 0,8; Zeiss) et de l&#39;optique Nomarski. GFP a été vu avec un filtre BP 505-530 fluorescence. </li></ol> III. Électrophysiologie <ol><li> Pipettes de 8-14 Mohms sont utilisés pour les enregistrements de cellules entières </li><li> Enregistrements de courant pince et voltage-clamp sont effectuées en utilisant une liste ou un amplificateur EPC7 Axopatch 200B, une Digidata 1322A convertisseur DA (Molecular Devices, Foster City, CA), un Dell Dimension 8200 ordinateur (Dell Computer, Round Rock, TX), et pClamp 9 logiciels (Molecular Devices). </li></ol>

<ol><li>Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+synaptic+transmission+in+Adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ.</a> Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).</li>
<li>Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+olfactory+representations+in+the+Drosophila+antennal+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe.</a> Science. 303, 366-370 (2004).</li>
</ol>

La préparation du cerveau isolés ensemble, nous illustrer dans cette vidéo permet une évaluation des mécanismes cellulaires qui sous-tendent l&#39;excitabilité et la transmission synaptique dans les neurones identifiés, y compris ceux dans les voies de traitement olfactif, dans le cerveau adulte chez la drosophile (Gu et O Dowd, 2006). Cette approche est complémentaire à l&#39;étude de l&#39;activité neuronale dans le cerveau des adultes intacts Drosophila (Wilson et tous en 2004), dans une grande partie de la même manière à partir des enre...

<table><tbody><tr><td>#5 Pinces</td><td>Outil</td><td>Fine Science Tools</td><td>N° 11251-10</td><td>Attention, ne jamais endommager les extrémités fines de la pince</td></tr><tr><td>Papaïne</td><td>Réactif</td><td>Worthington Biochemical</td><td>3126</td><td>20 U/ml activées par 1 mM de L-cystéine</td></tr><tr><td>Microscope stéréoscopique</td><td>Modèle SMZ-2B : C-PS</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td>Équipé de lampes à fibre optique à col de cygne positionnées selon un angle faible</td></tr><tr><td>Aiguille &amp;et seringue </td><td></td><td>PrecisionGlide&amp;#174;?, Becton Dickinson Co</td><td>305175 &amp;& 309602</td><td>Économique et durable</td></tr><tr><td>Microscope droit</td><td>Axioskop2 FS plus</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>Équipé d'un plateau fixe, d'un objectif à immersion dans l'eau de 40X, d'optiques Nomarski et d'une lampe fluorescente</td></tr><tr><td>Amplificateur de clampage par électrode à microélectrode</td><td>200 B</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>convertisseur numérique-analogique Digidata </td><td>1322A</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

enregistrements à partir de cellules entières du cerveau d&#39;adulte drosophile

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure pour isoler cerveaux entiers de l&#39;adulte de drosophile en préparation pour l&#39;enregistrement de neurones isolés. Nous commençons par décrire la solution dissection et la capture des femelles adultes utilisés dans nos études. La procédure pour enlever tout le cerveau intact, y compris les deux lobes optiques, est illustrée. Dissection de la trachée recouvrant est également représentée. Le cerveau isolé est non seulement faible mais a besoin de soins spéciaux dans la manipulation à ce stade pour éviter d&#39;endommager les neurones, dont beaucoup sont proches de la surface externe du tissu. Nous montrons comment un support spécial, nous avons développé est utilisé pour stabiliser le cerveau dans la chambre d&#39;enregistrement. Un électrophysiologie installation standard est utilisé pour l&#39;enregistrement à partir de neurones simples ou des paires de neurones. Une image fluorescente, vus au microscope d&#39;enregistrement, d&#39;une ligne de conduite GAL4 expression de la GFP (GH146) illustre comment les neurones de projection (PN) sont identifiés dans le cerveau vivant. Une grande puissance d&#39;image Nomarski montre une vue d&#39;un seul neurone qui est ciblé pour l&#39;enregistrement de la cellule entière. Quand le cerveau est enlevé avec succès, sans dommages, la majorité des neurones sont spontanément actifs, le tir des potentiels d&#39;action et / ou présentant spontanément entrée synaptique. Cette préparation in situ, dans lequel l&#39;enregistrement de cellules entières de neurones identifiés dans l&#39;ensemble du cerveau peut être combiné avec les manipulations génétiques et pharmacologiques, est un modèle utile pour explorer la physiologie cellulaire et la plasticité du système nerveux central adulte.

Cette vidéo montre la procédure pour isoler cerveaux entiers de l&#39;adulte de drosophile en préparation pour l&#39;enregistrement à partir de neurones unique en utilisant la technologie standard de cellules entières. Il comporte des images de cellules GFP étiqueté et les neurones considérés lors de l&#39;enregistrement.

Enregistrements à partir de cellules entières du cerveau d&#39;adulte drosophile

Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure d'isolement de cerveaux entiers de drosophiles adultes en vue de l'enregistrement de neurones uniques. Nous commençons par...

Je m'appelle, je suis spécialiste adjoint au Département d'anatomie et de neurobiologie à l'uc R un. Aujourd'hui, je vais vous expliquer la procédure permettant d'effectuer l'enregistrement global sur le cerveau PHA, dont les étapes clés consistent à désosser la tête, à extraire le cerveau, à retirer le système TRICARE et à éliminer le tissu G clair de la surface du cerveau. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment préparer une solution de dissection pour l'enregistrement de cellules entières sur un cerveau adulte de laboratoire souple.La première étape consiste à préparer la première solution, la seconde solution étant très importante, elle est la clé d'une bonne préparation du cerveau adulte. Tout d'abord, je vais verser cinq millilitres de solution tampon dans ce tube centrifuge. Ensuite, j'ai ici un autre petit tube.J'ajouterai un millilitre de solution enregistrée dans ce tube, j'ajouterai un peu de sing, puis je préparerai cette solution de sing. Je pipetterai plusieurs fois vers le haut et vers le bas afin d'obtenir une bonne solution de sing. Ensuite, je préleverai 100 unités de pepane à partir de ce flacon.Ensuite, je mettrai cette pepane dans ce tube de centrifugation. V

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Enregistrements électrophysiologiques...

Enregistrement électrophysiologique dans le Drosophile Embryon

Enregistrement simultané des signaux calciques de neurones identifiés et le comportement alimentaire des Drosophila melanogaster</em

Cette vidéo décrit comment disséquer et isoler le cerveau adulte de la drosophile – une procédure nécessaire pour visualiser l’organe, qui est autrement obscurci par la cuticule, l’œil et le tissu trachéal. L’exemple de protocole montre une démonstration détaillée produisant des préparations de haute qualité qui peuvent être utilisées pour les méthodes d’immunocoloration et d’imagerie en neurobiologie de la drosophile.

drosophile Dissection cérébrale chez l’adulte : une méthode de neurobiologie des mouches

La vidéo démontre l’enregistrement extracellulaire de l’activité neuronale du système nerveux central (SNC) de larves de drosophile. Le SNC transecté est positionné dans une chambre d’enregistrement, et l’activité électrique d’un nerf descendant est enregistrée pour établir la fréquence de décharge de base. Un agent d'essai est ensuite introduit et la variation de la fréquence de décharge est enregistrée pour déterminer l'effet excitateur ou inhibiteur de l'agent.

Enregistrement extracellulaire de l’activité électrique dans le système nerveux central de la drosophile

Des microélectrodes tranchantes permettent une caractérisation électrophysiologique précise des photorécepteurs et de la sortie d’interneurones visuels chez la drosophile vivante. Nous montrons ici comment utiliser cette méthode pour enregistrer les réponses en tension de haute qualité de cellules individuelles à une stimulation lumineuse contrôlée. Cette méthode est idéale pour étudier le traitement de l’information neuronale dans les yeux composés d’insectes.

Méthode électrophysiologique de réponses d&#39;enregistrement intracellulaire tension de<em&gt; Drosophila</em&gt; Photorécepteurs et Interneurones à Light Stimuli<em&gt; In Vivo</em

Les enregistrements de cellules entières des photorécepteurs de Drosophila melanogaster permettent de mesurer des bosses sombres spontanées, des bosses quantiques, des réponses macroscopiques à la lumière et des relations courant-tension dans diverses conditions. En combinaison avec des outils de manipulation génétique de D. melanogaster, cette méthode permet d’étudier la voie de signalisation inositol-lipidique ubiquitaire et sa cible, le canal TRP.

Méthode électrophysiologique pour les enregistrements de la pince à tension intégrale à partir de<em&gt; Drosophila</em&gt; Photorécepteurs

Le but du présent protocole est d’établir la culture ex vivo Drosophila cerveau larvaire optimisée pour surveiller des rythmes circadiens moléculaires avec imagerie Time-lapse à long terme de fluorescence. On discute également l’application de cette méthode pour les essais pharmacologiques.

Fluorescence de cellule unique résolution vivre Imaging of Drosophila horloges circadiennes dans cerveau larvaire Culture

Cet article propose une méthode pour tester les connexions monosynaptiques entre neurones en employant la tétrodotoxine et canal sodique résistant à la tétrodotoxine, NaChBac.

Examinant les connexions monosynaptiques chez la drosophile en utilisant des canaux sodiques tétrodotoxine résistant

Ce protocole décrit une méthode pour enregistrer l’activité électrique descendante du système nerveux central Drosophila melanogaster pour permettre le rapport coût-efficacité et pratique essais d’agents pharmacologiques, les mutations génétiques des protéines neuronales, et/ou le rôle des voies physiologiques inexplorées.

Enregistrement électrophysiologique de l’activité du système nerveux Central du troisième stade de Drosophila Melanogaster

Nous présentons une méthode spécifiquement adaptée à l’image de l’ensemble du cerveau de la drosophile adulte pendant le comportement et en réponse aux stimuli. La tête est positionnée pour permettre un accès optique à l’ensemble du cerveau, tandis que la mouche peut déplacer ses jambes et les antennes, le bout de la trompe, et les yeux peuvent recevoir des stimuli sensoriels.

Préparation du drosophile adulte melanogaster pour l’imagerie cérébrale entière pendant les réponses au comportement et aux stimuli

L’utilisation d’anesthésiques pour la préparation de l’imagerie in vivo constitue un obstacle important à l’étude de l’activité cellulaire au cours des processus cognitifs tels que l’apprentissage et la mémoire. L’anesthésie altère la mémoire à court terme et la cognition dans plusieurs modèles, y compris la drosophile. Cette étude présente une méthode unique pour préparer la drosophile adulte à l’imagerie in vivo sans anesthésie.

In vivo Imagerie de l’activité neuronale chez des mouches adultes drosophiles non anesthésiées

Apprenez l'enregistrement en cellule entière sur cerveau de drosophile adulte pour neurophysiologie. Cette méthode permet d'étudier l'activité neuronale avec marquage GFP et analyse électrophysiologique détaillée.

Enregistrements à partir de cellules entières du cerveau d'adulte drosophile

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