Name: Transformation dADN plasmidique dans E. coli en utilisant la méthode du choc thermique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Apprenez la transformation d'ADN plasmidique dans E. coli par choc thermique à 42°C. Cette méthode prépare les bactéries pour des études génétiques et des applications en biologie moléculaire.

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transformation d&#39;adn plasmidique dans e. coli en utilisant la méthode du choc thermique

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

Transformation d&#39;ADN plasmidique dans E. coli en utilisant la méthode du choc thermique est une technique de base de la biologie moléculaire. Elle consiste à insérer un produit étranger plasmide ou ligature dans des bactéries. Ce protocole vidéo décrit la méthode traditionnelle de transformation à l&#39;aide disponible dans le commerce chimiquement les bactéries compétentes Genlantis. Après une incubation courte de glace, un mélange de bactéries compétentes et chimiquement l&#39;ADN est placé à 42 ° C pendant 45 secondes (choc thermique), puis replacés dans la glace. SOC médias est ajouté et les cellules transformées sont incubées à 37 ° C pendant 30 min avec agitation. Pour être assuré d&#39;isoler des colonies indépendamment de l&#39;efficacité de transformation, deux quantités de bactéries transformées sont étalées. Ce protocole traditionnel peut être utilisé avec succès pour transformer les plus disponibles dans le commerce des bactéries compétentes. Le turbocells partir Genlantis peut également être utilisé dans un protocole de transformation de 3 minutes roman, décrit dans le manuel d&#39;instruction.

Transformation d&#39;ADN plasmidique dans E. coli en utilisant la méthode du choc thermique

La transformation d'ADN plasmidique dans E. coli par la méthode du choc thermique est une technique fondamentale de biologie moléculaire. Elle consiste à insérer un élément étranger...

Bonjour, je suis Alex Hoge. Je travaille au laboratoire de la salle de sport Hall, dans le département de physiologie et de biomécanique à l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment transformer des cellules de e coli électrocompétentes par la méthode de l'électroporation.Aujourd'hui, j'utilise cette technique pour transformer un coli avec mon produit de ligation, car je m'apprête à réaliser une expérience impliquant une hybridation in situ sur des embryons entiers de poisson-zèbre. Bon, nous allons commencer la transformation. Tout d'abord, vous devez disposer d'un bain d'eau ou d'un bloc chauffant à 42 degrés.Vous devez placer vos bactéries, que vous venez de sortir du stock principal, sur de la glace. Aujourd'hui, nous utilisons des cellules compétentes électriques provenant d'ities, ainsi que votre ADN sur de la glace. Vous avez également besoin d'un tube de milieu SOC à température ambiante ou à 37 °C, et de vos boîtes de milieu LB contenant un antibiotique.Je vais maintenant ajouter l'ADN aux bactéries. Je travaille donc près de la flamme pour éviter de contaminer les bactéries. J'ajoute donc la lation aux bactéries.Il s'agit de 50 microlitr

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Mutagenèse dirigée de plasmides ensemble est un moyen simple de créer des variations légèrement différentes d'un plasmide d'origine. Ici nous démontrons une manière facile et rentable d'introduire des substitutions de bases dans un plasmide standard en utilisant des réactifs.

Mutagenèse dirigée maison des plasmides entiers

Source : Stefan, A., et al., Les avantages multiformes de la co-expression des protéines chez Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo montre la procédure de transformation d’Escherichia coli avec un plasmide porteur d’un gène de résistance aux antibiotiques, y compris la préparation cellulaire, l’électroporation, la récupération et la sélection des transformants.

Préparation et transformation de bactéries par électroporation à haute tension

Ce protocole démontre l’activité chaperonne de la protéine de choc thermique 70 (Hsp70). Les cellules E. coli dnaK756 servent de modèle pour le test car elles hébergent un Hsp70 natif et fonctionnellement altéré, ce qui les rend sensibles au stress thermique. L’introduction hétérologue de Hsp70 fonctionnel sauve le déficit de croissance des cellules.

Test de complémentation basé sur Escherichia coli pour étudier la fonction chaperonne de la protéine de choc thermique 70

L’assemblage in vivo est une méthode de clonage indépendante de la ligature qui s’appuie sur des enzymes de réparation de l’ADN intrinsèques aux bactéries pour assembler des fragments d’ADN par recombinaison homologue. Ce protocole est à la fois rapide et économique, car peu de réactifs sont nécessaires et l’efficacité du clonage peut atteindre 99 %.

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Nous présentons une procédure par laquelle deux dimensions agarose gel d'analyse peuvent être utilisés pour identifier la structure des intermédiaires de réplication qui se produisent après irradiation UV.

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Protocoles de sélection mutagenèse et fonctionnelles pour l&#39;évolution dirigée de protéines dans les E. coli</em

Apprenez la transformation d'ADN plasmidique dans E. coli par choc thermique à 42°C. Cette méthode prépare les bactéries pour des études génétiques et des applications en biologie moléculaire.

Transformation d'ADN plasmidique dans E. coli en utilisant la méthode du choc thermique

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