Name: Utilisation dun système de suspension de poids de lischémie du foie chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 53 s
Description: Découvrez un modèle murin innovant utilisant un système de suspension de poids pour induire l'ischémie hépatique chez la souris. Cette technique permet un contrôle précis du timing ischémique sans lésion tissulaire, facilitant l'étude des blessures de reperfusion.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les présentes études ont été soutenus par des instituts des États-Unis National de la Santé de subvention R01-HL092188, R01-DK083385 et R01HL098294, et la Fondation pour l&#39;éducation anesthésie et de la Recherche (FAER) Subventions à HKE et un DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) de bourses de recherche (GR2121/1- 1) et l&#39;American Heart Association à Grant AG.

Remarques générales. Toutes les opérations doivent être effectuées en vertu d'un microscope droit de dissection (Leica) et en utilisant un coagulateur chirurgical. Les souris dans les groupes expérimentaux et imposture doit être adapté à l'âge et le poids pour assurer la comparabilité des résultats. L'administration de la température, la pression artérielle, l'anesthésie et le liquide doit être stable et surveillés pendant toute l'expérience. 1. Anesthésie et la chirurgie <ol><li> Souris C57BL / 6 devrait se situer dans une tranche d'âge des 10 à 16 semaines et ils devraient être entre les sexes appariés dans les groupes respectifs. </li><li> Anesthésier souris avec du pentobarbital sodique (70 mg / kg de poids corporel ip) et maintenir une anesthésie avec env. 10 mg / kg / h du pentobarbital de sodium. Un surdosage peut réduire considérablement la pression artérielle et peut donc modifier les résultats. </li><li> Souris Placer sur une table chauffée à température contrôlée (RT, Effenberg, Munich, Allemagne) avec une sonde thermomètre rectal attaché à une rétroaction thermiqueContrôleur pour maintenir la température du corps à 37 ° C. </li><li> Souris Placer dans une position en décubitus dorsal sur la table d'opération, avec les extrémités supérieures et inférieures attachées à la table avec du ruban adhésif amovible. </li><li> Dans le cas d'expériences de survie appropriés les techniques d'asepsie, y compris écrêtage des cheveux, la désinfection de la peau avec iodophores (Bétadine par exemple), la manipulation stérile des instruments autoclavés, et en utilisant des masques d'un des gants stériles pour le chirurgien sont nécessaires. </li></ol> 2. Portail Triade d'occlusion <ol><li> Couvrir la zone d'incision avec de l'huile minérale pour éviter d'inhaler des cheveux de la souris en coupant la peau et ainsi prévenir les risques d'allergies cheveux de souris. Effectuer une laparotomie médiane et l'incision de la ligne blanche à l'extrémité supérieure de telle sorte que vous pouvez facilement exposer le foie. Si possible effectuer l'incision avec une électrode de coagulation (Erbe, ICC50, Tübingen, Allemagne) pour prévenir les saignements. </li><li> Placez la table de chauffage avec la souris dans une position que la queue est direcTed pour le chirurgien. Cette position vous fournit le meilleur réglage pour localiser la triade et de placer le fil de suture. </li><li> Déplacer l'intestin sur le côté droit en utilisant un coton-tige humide pointe pour exposer la triade portale. </li><li> Décaler légèrement l'lobe médian et gauche vers la membrane et le lobe droit vers l'intestin. Cela vous donnera une vision claire de la triade portail au-dessus de la bifurcation de droite, médiane / gauche lobes. </li><li> Inspectez soigneusement la triade portale et maintenez le lobe droit doucement avec une pince fades. Cela vous donnera une belle vue sur la triade portale gauche. </li><li> Une fois identifié visuellement lieu de l'aiguille avec le fil de suture (suture de nylon 7/0; Ethicon, Norderstedt, Allemagne) via un porte-aiguille sous la gauche triade portale, y compris l'artère hépatique, veine sus-hépatique, et la voie biliaire partir de la gauche vers la droite de la souris. </li><li> Le point doit être étroitement dans le cadre de la triade. Un profond point peut nuire à la cave vaca inférieure qui se trouve sousla triade. Par conséquent maintenir les lobes du foie droit vers le bas avec la pince à identifier la veine cave avant de placer le point. </li><li> Prenez la pointe de l'aiguille sur le côté droit avec une pince et tirez-le doucement hors de la région du foie, sans blesser le foie. </li><li> Attacher à chaque extrémité de la suture un tube Eppendorf (environ 3 g, rempli d'eau) et placer deux extrémités de suture sur porteurs de suture. Placer le porte-suture distalement de la maille de sorte que le fil de suture n'interfère pas avec la triade droite. </li><li> En appliquant les poids de la triade sera immédiatement occlus, causant l'interruption de l'approvisionnement en sang vers les lobes gauche et médiane du foie. Occlusion réussie peut être facilement confirmé par une inspection visuelle de blanchiment pâle des lobes ischémiques. En revanche, le changement de couleur disparaît immédiatement lorsque les poids suspendus sont libérés à partir des pôles et le foie est reperfusé. Ce modèle d'ischémie hépatique partielle évite la congestion mésentérique en préservant bloodébit d pour les lobes du foie droit. </li><li> Remplacer l'intestin dans la cavité abdominale. Gardez le foie et l'intestin chaude avec un coton-tige humide imbibé d'eau à 37,0 ° C. En plus de maintenir la température corporelle stable couvrir les souris avec une pellicule plastique alimentaire disponibles dans le commerce après avoir terminé la chirurgie. </li><li> Effectuer une ischémie comme requis par le protocole expérimental. Après un communiqué le temps d'ischémie défini les poids et la reperfusion des lobes du foie médian et gauche va commencer immédiatement. Cette technique permet de produire une ischémie réversible chez les souris. Si aucun temps d'ischémie ne sera effectué retirez soigneusement la suture. </li><li> Ajouter environ 400 pi de chlorure de sodium dans la cavité abdominale de 15 minutes avant et directement après la reperfusion. Continuer à remplacer toutes les 30 minutes de fluide en une quantité de 100 pl pour compenser la perte de fluide pendant le temps de reperfusion. </li><li> Pour les expériences de survie de la plaie opératoire est fermé à l'aide de suture continue de la paroi musculaire et de la peau wie un fil de suture 4/0. </li></ol> 3. Modification de la perfusion du foie Les paramètres de résultats suivants sont recommandés afin de déterminer une lésion hépatique hépatique ischémie suivant: Déterminer des enzymes hépatiques (par exemple ALT, AST) et l'histologie hépatique (coloration H &amp; E) ischémie hépatique qui suit et la reperfusion 3,9. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1 Modèle d'un système de pendaison-poids de l'ischémie du foie:. Un système de poids suspendu a été mis en place pour induire une ischémie du foie du lobe gauche et médiane 3. (A) Par conséquent, le lobe caudé et le droit ont été doucement séparé du lobe gauche. Le lobe droit était alors légèrement décalée de visualiser clairement la triade portail au-dessus de la bifurcation de droite, lobes médian et gauche. Une suture en nylon 8,0 a été placé sous la triade hépatique gauche. (B) A la fin de chaque suture un petit poids (3 g Eppendorf tubes remplis avec de l'eau) a été fixé et appliqué. Ischémie hépatique est visible par un changement de couleur du lobe gauche et médian du rouge au pâle. Cette conception expérimentale permet l'occlusion et la reperfusion précise de la triade hépatique gauche en appliquant et en relâchant le poids de la charge. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Effet de différents temps de l'ischémie du foie sur l'alanine (ALT) et aspartate (AST) aminotransférase chez la souris. Partielle portail triade ischémie a été induite comme indiqué (0 - 60 minutes d'ischémie). Après 2 heures de reperfusion, ALT (A) et AST (B) ont été mesurés. Les résultats sont exprimés en moyenne ± SE de 6 à 7 souris par groupe. * P &lt;0,05, comparativement à 0 minutes d'ischémie (simulacre de contrôle).

<ol><li>Rook, M., Rand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+long-term+outcome+after+liver+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Organ.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Predictors of long-term outcome after liver transplant.</a> Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).</li>
<li>Henrion, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion+injury+of+the+liver%3A+pathophysiologic+hypotheses+and+potential+relevance+to+human+hypoxic+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Gastroenterol.+Belg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis.</a> Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Kohler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+liver+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).</li>
<li>Schneider, M., Geyte, K., Fraisl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+or+silencing+of+the+PHD1+prolyl+hydroxylase+protects+livers+of+mice+against+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Loss or silencing of the PHD1 prolyl hydroxylase protects livers of mice against ischemia/reperfusion injury.</a> Gastroenterology. 138, 1143-1154 (2010).</li>
<li>Coriat, R., Leconte, M., Kavian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mangafodipir+Protects+against+Hepatic+Ischemia-Reperfusion+Injury+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mangafodipir Protects against Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Mice.</a> PLoS One. 6, e27005(2011).</li>
<li>Sakai, N., Van Sweringen, H. L., Schuster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+%28RANKL%29+protects+against+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) protects against hepatic ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. , (2011).</li>
<li>Zhang, J., Hu, W., Xing, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Protective+Role+of+CD59+and+Pathogenic+Role+of+Complement+in+Hepatic+Ischemia+and+Reperfusion+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">The Protective Role of CD59 and Pathogenic Role of Complement in Hepatic Ischemia and Reperfusion Injury.</a> Am. J. Pathol. 179, 2876-2884 (2011).</li>
<li>Beldi, G., Banz, Y., Kroemer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+CD39+on+natural+killer+cells+attenuates+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Deletion of CD39 on natural killer cells attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 51, 1702-1711 (2010).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+adenosine+production+by+ecto-5%27-nucleotidase+protects+during+murine+hepatic+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning.</a> Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).</li>
<li>Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte-specific+IKK+gamma%2FNEMO+expression+determines+the+degree+of+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury.</a> Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).</li>
<li>Lentsch, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+and+function+of+hepatocyte+NF-kappaB+in+postischemic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury.</a> Hepatology. 42, 216-218 (2005).</li>
<li>Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+IKK2+in+hepatocytes+does+not+sensitize+these+cells+to+TNF-induced+apoptosis+but+protects+from+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).</li>
<li>Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKapitsinou%2C+PP+%22Blood%22">Blood</a>. , (2010).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

La présente étude décrit une technique d&#39;effectuer une ischémie dans un modèle murin en utilisant un système de suspension de poids pour l&#39;occlusion de la triade portale hépatique gauche. Bien que c&#39;est une méthode facile à apprendre les pièges suivants devraient être pris en compte. Une erreur très commune dans le début est un point de profond qui comprend le portail triade et la veine cave. Le rythme de la respiration et le cœur va ralentir dans les 15 minutes en raison de l&#39;augmentation de la résistance et la diminution de retour du sang vers le cœur entraînant une mort précoce des souris. La meilleure façon de prévenir l&#39;, y compris de la veine cave est de localiser la veine cave avant le point en tenant les lobes droit vers le bas avec une pince. Une autre question importante est que les poids lourds ne sont pas à ce qui peut entraîner trop de stress sur le procès portail de gauche et de droite qui s&#39;arrête aussi le flux sanguin vers les lobes droit. Par conséquent, la quantité d&#39;eau dans les flacons de Eppendorf doit être ajustée au poids de la souris et le sporteurs AVENIR doit être placé de manière distale à partir de l&#39;emplacement de point. A l&#39;inverse, si les poids sont à une pression artérielle basse n&#39;est pas complètement arrêté. Les deux erreurs sont facilement détectables par un changement de couleur supplémentaire à pâle du lobe droit ou changement de couleur insuffisante des lobes médians et à gauche, respectivement. Par conséquent, le changement de couleur hépatique après application des pondérations doivent être contrôlés toutes les 10 minutes. Une autre complication chirurgicale courante est le blessant du foie à l&#39;aiguille. Par conséquent, les lobes droit devrait être tenu vers le bas avec une pince fades de sorte que la pointe de l&#39;aiguille peut être facilement vu et pris avec un porte-aiguille. Si ces pièges dans le début sont pris en compte le système de suspension de poids pour une ischémie hépatique fournit une lésion hautement reproductible due à une ischémie par minimisation de la variabilité de lésions hépatiques associé à serrage de l&#39;espace porte. En utilisant un système de suspension de poids, la triade portale est uniquement manipulé une fois pendant toute laintervention chirurgicale, ce qui provoque beaucoup moins de dégâts au niveau des lobes hépatiques. En outre, pas de congestion hépatique ou intestinale se produit avec cette technique. Plus un traumatisme tissulaire se produit par suppression et remplacement des navires pinces, surtout avec une nouvelle application de la pince pendant les cycles de l&#39;ischémie pendant plusieurs comme un préconditionnement ischémique. L&#39;utilisation de la pendaison de poids qui sont dans un endroit éloigné du tissu hépatique, d&#39;après nos observations, offre l&#39;avantage de l&#39;occlusion fiable tout en évitant le traumatisme tissulaire due à la manipulation des lobes du foie par réapplication d&#39;une pince. Pris dans leur ensemble, la présente étude fournit la faisabilité du système de suspension de poids pour le portail triade d&#39;occlusion pendant l&#39;ischémie, ce qui minimise la variabilité et les limites associées à de serrage. Ainsi, cette technique pourrait être d&#39;intérêt pour les enquêteurs d&#39;autres qui considèrent étudier l&#39;ischémie hépatique.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Pentobarbital de sodium (Plus Fatal) </td><td> Vortech pharmaceutique Ls, Ltd </td><td> VPL 9372 </td><td> 4 mg / ml dans une solution saline </td></tr><tr><td> Suture, Prolène 8,0 </td><td> Ethicon, États-Unis </td><td> M8739 </td><td> réutilisable </td></tr><tr><td> microscope à dissection </td><td> Leica </td><td> n / a </td><td> considérer la distance de travail généreuse </td></tr><tr><td> Tableau de chauffage </td><td> Rt, Effenberger, Allemagne </td><td> n / a </td><td> fournisseur de la seule et unique </td></tr><tr><td> Les instruments chirurgicaux </td><td> WPI, Dumont </td><td></td><td> Forceps, porte-aiguille </td></tr><tr><td> Coagulateur </td><td> Erbe, ICC50, Tübingen, Allemagne </td><td> n / a </td><td> Les différents fournisseurs de coagulateurs </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Réactifs et équipements spécifiques.

utilisation d&#39;un système de suspension de poids de l&#39;ischémie du foie chez la souris

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Atteinte hépatique aiguë due à une ischémie peut se produire au cours de plusieurs procédures cliniques de transplantation du foie par exemple, résection de la tumeur hépatique ou la réparation des traumatismes et peut entraîner une insuffisance hépatique qui a un taux élevé de mortalité 1-2. Par conséquent études murin d&#39;ischémie hépatique sont devenus un important domaine de recherche en offrant la possibilité d&#39;utiliser les études pharmacologiques et génétiques 3-9. Plus précisément, les souris conditionnelles avec suppression du tissu spécifique d&#39;un gène (CRE, flox système) fournir des indications sur le rôle des protéines dans des tissus particuliers 10-13. En raison de la difficulté technique associée à la main de serrage de la triade portale chez la souris, nous avons effectué une évaluation systématique à l&#39;aide d&#39;un système de pendaison de poids pour le portail triade d&#39;occlusion qui a été décrit précédemment 3. En utilisant un système de suspension de poids nous plaçons un fil de suture autour de la branche gauche de la triade portale sans causer de dommages aux lobes hépatiques, depuis aussi lemeilleurs colliers disponibles peuvent endommager les tissus hépatiques en raison de la proximité des tissus du foie aux navires. En outre, la branche droite de la triade hépatique est encore perfusé donc pas de congestion intestinale se produit avec cette technique que le flux sanguin vers les lobes hépatiques droit est préservé. En outre, la triade portale est uniquement manipulé une fois pendant toute la procédure chirurgicale. En conséquence, les procédures comme le pré-conditionnement, avec des temps courts de l&#39;ischémie et la reperfusion, peut être facilement réalisée. L&#39;évaluation systématique de ce modèle en effectuant une ischémie reperfusion fois différent et a révélé une corrélation étroite entre le temps d&#39;ischémie hépatique avec des dommages au foie, telle que mesurée par l&#39;alanine (ALT) et aspartate (AST) aminotransférases sériques 3,9. Pris ensemble, ces études confirment une lésion hépatique hautement reproductible lors de l&#39;utilisation du système de suspension de poids de l&#39;ischémie reperfusion hépatique et intermittente. Ainsi, cette technique pourrait être utile pour l&#39;intérêt d&#39;autres chercheursed dans les études d&#39;ischémie du foie chez la souris. Par conséquent, le clip vidéo fournit une description étape par étape la description de cette technique.

Nous avons établi un modèle murin roman d&#39;un système de poids suspendu pour le portail triade d&#39;occlusion. Cette technique peut être utile pour des enquêtes futures de l&#39;ischémie dans les modèles murins hépatiques.

Utilisation d&#39;un système de suspension de poids de l&#39;ischémie du foie chez la souris

L'insuffisance hépatique aiguë d'origine ischémique peut survenir lors de plusieurs procédures cliniques, par exemple lors d'une transplantation hépatique, d'une résection de tumeur hépatique ou d'une réparation traumatique et...

L'objectif de cette procédure est d'induire une ischémie hépatique afin d'étudier les lésions de reperfusion. Cela est réalisé en exposant d'abord les lobes du foie. L'étape suivante consiste à exposer le triade hépatique gauche, qui comprend la veine porte, l'artère hépatique et le canal biliaire.Une fois isolé, un point de suture est placé autour de la triade gauche, et un système de poids suspendu est appliqué pour induire une ischémie hépatique. À un moment précis après l'ischémie, les poids sont soulevés pour commencer la reperfusion. En fin de compte, l'ampleur des lésions hépatiques après ischémie et reperfusion peut être évaluée en mesurant les taux d'ALAT et d'ASAT dans le sang et en réalisant une histologie du foie. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme l'utilisation de pinces pour provoquer l'ischémie hépatique, réside dans le fait que le point de suture n'endommage pas le tissu hépatique et que le moment de l'ischémie peut être déterminé avec une plus grande précision.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car le positionnement exact du point de suture est crucial pour obtenir une ischémie hépatique reproductible sans endommager le tissu. Commencez par préparer le champ opératoire avec des instruments stérilisés et tous les autres matériaux nécessaires à l'intervention chirurgicale. Pour commencer, placez une souris anesthésiée en position dorsale sur une table chauffante dont la température est contrôlée.Fixez les extrémités supérieures et inférieures sur la table à l’aide d’un ruban adhésif amovible afin de faciliter le repérage du triade et la pose du point de suture. Positionnez la souris et la table chauffante de manière à orienter la queue vers le chirurgien. Ensuite, insérez une sonde rectale reliée à un régulateur thermique à rétroaction pour maintenir la température corporelle.Couvrez la zone de l'incision avec de l'huile minérale afin d'éviter l'inhalation des poils de souris et de réduire l'exposition aux allergènes. Une fois l'animal correctement préparé, vérifiez la profondeur de l'anesthésie avant de pratiquer une laparotomie médiane. Poursuivez la section de la ligne alba jusqu'à ce que le foie puisse être facilement exposé.Ensuite, utilisez un coton-tige humide pour déplacer les intestins et exposer le tronc porte. Pour obtenir une meilleure vue, déplacez le lobe médian et le lobe gauche vers le diaphragme, et le lobe droit vers l'intestin. Utilisez des pinces neutres pour maintenir le lobe droit vers le bas et obtenir une vue claire du portail gauche.Triad et veine cave inférieure. Passer délicatement un fil de suture autour du triad porte gauche. Celui-ci comprend l'artère hépatique, la veine hépatique et le canal biliaire.Utilisez une pince pour saisir l'extrémité de l'aiguille depuis le côté droit et tirez délicatement le fil à suture sans endommager le foie. Le point doit être placé juste sous la triade ; s'il est plus profond, il pourrait lésionner la veine cave inférieure. Une fois le fil en place, fixez un tube en Y lesté à chaque extrémité.Une fois prêts, ces poids seront placés sur les porte-sutures situés en position distale par rapport au point de suture. Comme illustré ici pour induire l'ischémie, faire glisser les deux poids sur les porte-sutures. Le tronc hépatique sera ainsi occlus immédiatement, entraînant une interruption de l'apport sanguin vers les lobes gauche et médian du foie.L'occlusion réussie est confirmée par le blanchissement pâle des lobes médian et gauche du foie. Ce modèle d'ischémie hépatique partielle évite la congestion mésentérique en préservant le flux sanguin vers les lobes hépatiques droits. Une fois la période ischémique prédéterminée terminée, soulevez les poids pour relâcher la tension sur le point de suture.Un changement de couleur doit être visible lorsque le foie est reperfusé. Remettez l'intestin dans la cavité abdominale et maintenez le foie et l'intestin au chaud à l’aide d’un tampon humide imbibé d’eau tiède. Après la période de reperfusion, le sang et le tissu hépatique peuvent être prélevés afin d’évaluer l’importance des lésions hépatiques après l’ischémie hépatique.L'étendue des lésions hépatiques peut être déterminée par la coloration du tissu avec de l'hématine et de l'éosine. Le tissu sain observé ici contient moins de cellules hépatiques, de vacuolisation et de gonflement par rapport au foie ischémique. Les enzymes hépatiques, l'alanine aminotransférase (ALAT) et l'aspartate aminotransférase (ASAT), sont des marqueurs courants des lésions hépatiques ici.Les niveaux de la LT et de la ST ont augmenté lorsque la durée de la période ischémique a été prolongée. Un maître. Cette technique peut être réalisée en moins de 10 minutes si elle est effectuée correctement.D'autres méthodes, telles que la préconditionnement ischemique, peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires concernant les lésions hépatiques dues à l'ischémie.

use-of-a-hanging-weight-system-for-liver-ischemia-in-mice

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Un modèle murin d'ischémie myocardique et le préconditionnement ischémique est un des mécanismes importants d'étude outil...

L&#39;utilisation d&#39;un système de poids suspendu pour une artère coronaire chez la souris

Un modèle précis murin pour lésions rénales aiguës (IRA) en raison de l'ischémie est un outil important pour étudier les lésions rénales aiguës et, éventuellement, trouver des outils thérapeutiques pour traiter des lésions rénales. Le système de poids suspendu propose un outil pour occlusion de l'artère rénale immédiate et fiable et la reperfusion sans causer de congestion rénale.

L&#39;utilisation d&#39;un système de suspension de poids pour les Occlusion de l&#39;artère rénale isolée

Un traumatisme chirurgical induit une réponse inflammatoire. Les cytokines et les ligands endogènes sont connus pour moduler la taille infarctus du myocarde après une ischémie et la reperfusion. Nous présentons une version modifiée à thorax fermé modèle murin d'ischémie et la reperfusion en utilisant les pondérations suspendus pour minimiser les effets de la thoracotomie.

Un murin à thorax fermé Modèle d&#39;ischémie myocardique et la reperfusion

Ce film montre comment acquérir hémodynamique systémique et hépatiques chez les souris. Le tout suivi comprend l'acquisition des paramètres vitaux, la pression artérielle systémique, la pression veineuse centrale, débit de l'artère hépatique commune, et la pression de la veine porte ainsi que le débit de portail chez la souris.

Surveillance des paramètres hémodynamiques systémiques et hépatique chez la souris

Ici nous décrivons une procédure chirurgicale montrant comment réaliser la ligature permanente de l'artère coronaire descendante gauche-antérieure chez les souris. Ce modèle est d'une grande pertinence pour étudier la pathophysiologie de l'infarctus du myocarde et les processus biologiques concomitants.

Modèle d'infarctus myocarde de Murine utilisant la ligation permanente de l'artère coronaire descendante antérieure gauche

Nous décrivons en détail un modèle de tumeur de métastases de foie de cancer côlorectal médicalement pertinent (CRLM) et l'influence de la reperfusion d'ischémie de foie (I/R) dans la croissance de tumeur et la métastase. Ce modèle peut aider à mieux comprendre les mécanismes sous-jacents à la promotion induite par la chirurgie de la croissance métastatique du foie.

Modèle de Murine des tumeurs métastatiques de foie dans le cadre des dommages de reperfusion d'ischémie

Le protocole décrit une méthode simple de résection d’un foie de souris intact pour des études métaboliques par perfusion veineuse porte.

Ex Vivo Perfusion hépatique à travers la veine porte chez la souris

Un système de perfusion hépatique ex vivo normothermique (NEVLP) a été créé pour les foies de souris. Ce système nécessite de l’expérience en microchirurgie mais permet des résultats de perfusion reproductibles. La capacité d’utiliser des foies de souris facilite l’étude des voies moléculaires pour identifier de nouveaux additifs perfusats et permet l’exécution d’expériences axées sur la réparation d’organes.

Perfusion hépatique Ex vivo Ex Vivo Normothermic chez la souris

Il a été démontré que l’association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour l’hépatectomie échelonnée (ALPPS) entraîne une régénération hépatique remarquable plusieurs semaines après la première étape de la chirurgie. Des modèles animaux ayant subi l’ALPPS ont été développés pour explorer la capacité potentielle de régénération du foie et obtenir des résultats cliniques favorables.

Modèle murin de l’association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour une procédure d’hépatectomie échelonnée assistée par microscopie

Ce protocole fournit des informations techniques pour la reconstruction vasculaire à l’aide de la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris.

Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris

Le modèle murin d’hépatectomie partielle de 2/3 (66 %) est bien décrit dans la littérature, mais les hépatectomies plus étendues imitant le syndrome de petite taille après une transplantation hépatique ont rarement été utilisées. Nous décrivons une procédure d’hépatectomie prolongée à 78 % dans un modèle murin qui entraîne une létalité postopératoire d’environ 50 % chez des souris saines.

Hpatectomie prolongée à 78 % dans un modèle chirurgical de souris

Découvrez un modèle murin innovant utilisant un système de suspension de poids pour induire l'ischémie hépatique chez la souris. Cette technique permet un contrôle précis du timing ischémique sans lésion tissulaire, facilitant l'étude des blessures de reperfusion.

Utilisation d'un système de suspension de poids de l'ischémie du foie chez la souris

Explorer plus de vidéos