29 mai 2013
Les protocoles sont présentés pour deux tâches établies à moteur de coordination, le bar rotarod et horizontale accélération, également deux tests développés à Oxford récemment, les tiges statiques et aux barres parallèles. Ces tests peuvent détecter une déficience motrice potentiellement d'intérêt de leur propre chef, tout en étant variables possibles dans les tests d'autres domaines du comportement.
L’objectif général de cette procédure est de mesurer la coordination motrice chez la souris. Ceci est accompli par des tests d’abord sur la tige du rotor d’accélération. Ensuite, la coordination motrice est testée sur la barre onale.
L’animal peut également être testé sur des tiges statiques. Enfin, les performances sur les barres parallèles peuvent être mesurées. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus qui montrent si la souris présente des troubles de la coordination motrice.
Généralement, les personnes novices dans cette technique auront du mal en raison de la difficulté de placer correctement la souris sur l’appareil Pour tous les tests suivants. Amenez les souris dans la salle d’expérimentation cinq à 20 minutes avant le test pour vous assurer qu’elles sont complètement éveillées. La scène de la tige de rotor ici a été construite à l’Université d’Oxford.
La tige mesure trois centimètres de diamètre avec une série de crêtes parallèles à sa surface, qui aident les souris à la saisir plus efficacement. Une bride de chaque côté empêche la souris de quitter la tige. Ils ont un diamètre de 30 centimètres et sont espacés de six centimètres.
La tige est fixée à 30 centimètres de la base de l’appareil. Une surface rembourrée douce est placée à la base pour amortir les chutes avant de commencer l’essai. Préparez la tige du rotor en réglant une vitesse de départ de quatre rotations par minute et un taux d’accélération de 20 rotations par minute.
Pour commencer, tenez la souris par la queue et amenez-la vers la tige à un angle de 45 degrés en dessous de l’horizontale. Relâchez rapidement l’animal lorsqu’il touche presque la tige. Alternativement, la souris peut être abaissée sur une cheville et la cheville sera utilisée pour transférer l’animal sur la tige.
Démarrez l’accélération 10 secondes après avoir placé la souris sur la tige et notez la vitesse à laquelle la souris tombe. Si la souris tombe avant cinq secondes et est probablement due à un mauvais placement de l’expérimentateur, le résultat ne doit pas être enregistré et l’essai doit recommencer si la souris tombe avant 10 secondes. Notez le temps et laissez l’animal faire deux autres essais.
Pour les animaux qui restent en place au-delà de 10 secondes, notez la vitesse à laquelle l’animal tombe. Parfois, la souris peut s’arrêter de marcher et, par conséquent, certaines agressent autour de la tige avant de finalement tomber. Il est utile de noter la vitesse à laquelle cet événement s’est produit.
La performance est calculée comme la vitesse moyenne entre les essais. Par exemple, une souris qui tombe avant 10 secondes une fois et qui reste allumée jusqu’à 12 rotations par minute. Le deuxième temps marque quatre plus 12 divisé par deux, ce qui équivaut à huit rotations par minute.
La barre horizontale mesure la force et la coordination des membres en chute, tandis qu’une barre de deux millimètres de diamètre est la plus couramment utilisée. Les barres de plus grand diamètre peuvent fournir des scores de performance plus raffinés. Des barres de laiton de 38 centimètres de long sont maintenues à 49 centimètres au-dessus de la surface du banc par une colonne de support en bois.
Les barres sont maintenues sous tension lorsqu’elles sont montées dans les encoches des supports légèrement rapprochés. Commencez le test avec la barre de deux millimètres. Tenez la souris par la queue et placez-la sur le banc devant l’appareil.
Faites-le glisser rapidement. Reculez d’environ 20 centimètres pour aligner rapidement son corps perpendiculairement à la barre. Soulevez l’animal en lui permettant de saisir la barre horizontale au centre avec seulement ses quatre pores.
Relâchez la queue tout en démarrant simultanément un chronomètre. Si la souris ne parvient pas à saisir la barre et que le placement de l’expérimentateur peut en être la cause. N’enregistrez pas la chute et testez à nouveau l’animal après un bref repos.
Si la souris tombe avant cinq secondes, et que cela n’est apparemment pas dû à un mauvais placement de l’expérimentateur, répétez jusqu’à trois fois pour tenter d’obtenir un score supérieur à cinq secondes. Enregistrez soit le temps de chute de la souris, soit le temps jusqu’à ce qu’un quatre pauvres touche une colonne avec un temps de test maximum de 30 secondes, prenez le meilleur score comme le datu Droit pour marquer la barre horizontale. Si la masse chute entre une et cinq secondes, marquez un entre six secondes et 10 secondes.
Marquez deux entre 11 et 20 secondes. Marquez trois points entre 21 et 30 secondes. Marquez quatre points en tombant après 30 secondes ou en restant simplement sur la barre jusqu’à 30 secondes.
Marque cinq, et la souris marque également cinq points si elle touche une extrémité. Prise en charge avec ses quatre ports à tout moment pendant les tests. Si un score de cinq est obtenu sur la barre de deux millimètres, l’animal peut ensuite être testé sur des barres plus épaisses après un bref repos.
Le système de pointage pour les barres de quatre et six millimètres est le même que pour les barres de deux millimètres, et le score final est le total cumulé. Ainsi, une souris qui obtient un score de cinq sur la barre de deux millimètres mais qui tombe de la barre de quatre millimètres après 13 secondes. Les scores de cinq plus sont égaux à huit.
Dans ce test de coordination motrice, des chevilles ou des tiges en bois d’épaisseur variable, de 35, 28, 22, 15 et neuf millimètres de diamètre, chacune de 60 centimètres de long, fixées par une pince G à une étagère de laboratoire à 60 centimètres du sol. Une marque est faite à 10 centimètres de l’extrémité près du banc pour indiquer la ligne d’arrivée. Pour commencer, placez la souris à l’extrémité de la tige la plus large, face à l’opposé de l’étagère, notez le temps qu’il faut à l’animal pour s’orienter vers l’étagère et ce temps de transit total.
Si la souris se retourne et s’accroche sous la tige pendant l’orientation, attribuez-lui arbitrairement le score maximum de 120 secondes. L’animal n’est pas testé sur les autres tiges et reçoit également une valeur de transit maximale. Si la souris tombe ou atteint le temps de test maximum de 120 secondes après l’orientation, ne la testez pas sur des tiges plus étroites.
Un score maximum est également attribué si la souris se retourne en traversant la tige après l’orientation, ramène la souris dans la cage d’accueil et laisse-la se reposer avant de tester. La prochaine tige plus petite. Placez l’animal sur la plus petite tige comme indiqué précédemment.
Si la souris tombe avant cinq secondes, remplacez-la et attendez jusqu’à deux tentatives supplémentaires. Notez le temps nécessaire pour inverser la tige ou jusqu’à ce que la souris tombe. Pour la mise en place, les barres parallèles supportent deux barres d’un mètre de long et de quatre millimètres de diamètre, espacées de 30 millimètres, sur un support en bois.
Colonnes à 60 centimètres au-dessus du sol. Placez la souris au centre des deux barres avec son axe longitudinal perpendiculaire aux barres. Les deux pores avant doivent être sur une barre et les deux pores postérieurs sur l’autre barre.
Le marquage est similaire à celui des tiges statiques. Deux mesures sont prises : le temps jusqu’à ce que la souris s’oriente à 90 degrés par rapport à la position de départ et le temps jusqu’à ce qu’elle atteigne l’un des supports finaux. De même, l’orientation et le transit doivent être réalisés sans que l’animal ne se renverse, sinon le temps maximum est alloué.
Si l’animal tombe avant cinq secondes, c’est probablement à cause d’un mauvais placement et l’animal doit être testé à nouveau. À l’origine, une tige statique était utilisée pour surveiller l’évolution de la maladie chez les souris mutantes, avec ou sans enrichissement de l’environnement dans leurs cages domestiques. Le programme d’enrichissement a considérablement retardé l’apparition d’un dysfonctionnement moteur sur la tige, qui a été parallèle à un retard dans l’apparition d’une mauvaise étreinte postérieure.
Un signe général de troubles neurologiques, des souris infectées par des raclures ont montré une diminution des performances de la barre horizontale à partir de la semaine 16 après l’injection dans les tests de tige de rotor à partir de la semaine 18 et les tiges statiques à partir d’au moins la semaine 19. Les lésions de l’hippocampe n’ont eu aucun effet sur la mesure de l’aptitude motrice, mais 1 2 9 s deux souris SV ont été altérées par rapport à la souche C 57 black six sur la tige du rotor et les tiges statiques Après son développement. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs sur la maladie de Huntington pour étudier les effets de l’enrichissement environnemental chez les souris mutantes de la maladie de Huntington.
Cet article présente des protocoles pour évaluer la coordination motrice chez la souris à l'aide de diverses tâches, notamment les tests du rotarod accéléré et de la barre horizontale. Il introduit en outre deux tests récemment mis au point, les barres statiques et les barres parallèles, qui permettent de détecter des troubles moteurs.
L'évaluation de la coordination motrice chez la souris est essentielle pour réduire les risques liés à la validation ciblée en découverte de médicaments en neurosciences, en garantissant que les phénotypes comportementaux observés reflètent de véritables changements cognitifs ou émotionnels plutôt que des déficits moteurs confondants. Les tests moteurs standardisés permettent d'obtenir une confiance prédictive en phase précoce de découverte en isolant la fonction motrice comme variable indépendante, soutenant ainsi les décisions d'avancement ou d'abandon dans les filières de validation ciblée. Ces tests assurent une continuité translationnelle entre l'engagement de la cible et le criblage phénotypique, réduisant l'abandon en phase avancée dû à des effets secondaires moteurs imprévus.
La méthode s'inscrit dans le continuum de découverte allant de la validation de la cible à l'identification de composés d'intérêt, en passant par le criblage préclinique, où la coordination motrice sert de filtre critique pour écarter les facteurs de confusion avant l'évaluation des paramètres cognitifs ou émotionnels.