Name: Création du modèle de rat réversible cholestatique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-21T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Découvrez la création d'un modèle de rat cholestatique réversible pour étudier la cholestase et ses effets sur le foie. Cette méthode microchirurgicale utilise l'isoflurane et un tube polyester pour une recherche avancée.

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1. Anatomie Rat biliaires Le diamètre moyen de la bile conduit et la longueur est de 1 mm et 29 mm, respectivement. La distance moyenne entre le pylore et la papille duodénale a été de 28 mm. Il ya deux principaux canaux pancréatiques qui s&#39;ouvrent dans le canal cholédoque - le conduit antérieure s&#39;ouvre sur le côté gauche et le canal postérieur s&#39;ouvre sur le côté droit. En plus de ces conduits principaux, un certain nombre de conduits qui drainent mineurs tous les trois portions du pancréas ouverts directement à la voie biliaire. 6 2. Technique Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées en accord avec le National Institutes of Health des lignes directrices pour la recherche éthique et ont été approuvés par le Comité de recherche de l&#39;institution et du Comité de protection des animaux. Des rats Sprague-Dawley âgés de 8 semaines ont été utilisés pour cette démonstration. Les rats ont été obtenus à partir de Charles River Laboratories à Wilmington, MA et toutes ont été plus de 300 grammes. Les rats ont eu accès à l&#39;alimentation de laboratoire standard et ont été logés ensemble dans des conditions standard de laboratoire. Les rats ont été anesthésiés avec un premier isofluorane et maintenu sous anesthésie pendant la chirurgie avec isofluorane à travers un masque. Une incision médiane de 2 cm a été faite à partir de la xiphisternum. Une fois l&#39;aponévrose a été ouvert, les lobes du foie étaient rentrés crânialement avec un écarteur de Sen, et le duodénum était rentré caudalement utilisant Q-tips. La voie biliaire a été identifié comme une structure tubulaire entrer dans le duodénum. La voie biliaire a été mis sous tension et partiellement à ciel ouvert. Un tube de 5 cm stérile en polyéthylène de long avec un diamètre intérieur de 0,6 mm et un diamètre extérieur de 0,9 mm a été utilisée. Une extrémité de ce tube a été scellé à chaud et l&#39;autre extrémité a été légèrement biseautés. L&#39;extrémité biseautée est ensuite passée dans le canal biliaire. Cela a été fixé en place en utilisant 8-0 sutures en nylon proximale et distale à l&#39;ouverture de la voie biliaire. Le tube reste avec l&#39;extrémité scellée a été placé dans la cavité péritonéale. Le site opératoire a été irriguée avec une solution saline normale. L&#39;abdomen a ensuite été fermé en 2 couches, avec suture Polyglactine 4-0. La ligne blanche a été fermée avec des sutures continues et les sutures interrompues dermiques ont été placés. Colle de peau a ensuite été appliqué sur la peau. Les rats ont été autorisés à récupérer dans des conditions standard de laboratoire à la surveillance de poids corporel par jour pour assurer une bonne hydratation. Pour l&#39;opération de retournement de cholestase, les rats ont été anesthésiés à l&#39;aide isofluorane comme décrit précédemment. L&#39;abdomen a été ouvert sur le site de l&#39;incision précédente. Le tube a été identifié et mis hors de la cavité péritonéale. Adhérences épiploïques autour du tube sont libérés en utilisant dissection et pointu. Un site dans le duodénum a ensuite été identifié pour un positionnement confortable du tube duodénostomie. Une suture chaîne de bourse, 2-3 mm de diamètre, a ensuite été placé en utilisant 8-0 nylon. Le duodénum a ensuite été ouvert à l&#39;intérieur de cette suture chaîne de bourse. L&#39;extrémité fermée du tube a ensuite été coupé à la longueur appropriée. Libre circulation de la bile a été assurée. Cette extrémité du tube a été ensuite placé dans le duodénum et la suture chaîne de bourse a été resserré. L&#39;abdomen a été irriguée et fermé en couches. Dans une étude précédente, où choledochoduodenostomy été réalisée en utilisant une technique différente, les rats ont été survécu pendant 12 semaines et les rats étaient en bonne santé pendant cette période. Aussi cette étude ont confirmé l&#39;inversion des changements biochimiques et histologiques après choledochoduodenostomy chez des rats soumis à une obstruction des voies biliaires, pour une période de 2 semaines. 7

<ol><li>Gouma, D. J., Roughneen, P. T., Kumar, S., Moody, F. G., Rowlands, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+nutritional+status+associated+with+obstructive+jaundice+and+biliary+drainage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Changes in nutritional status associated with obstructive jaundice and biliary drainage in rats.</a> Am J Clin Nutr. 44, 362-369 (1986).</li>
<li>Ohtsuka, M., Miyazaki, M., Kondo, Y., Nakajima, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-mediated+sinusoidal+endothelial+cell+injury+after+extensive+hepatectomy+in+cholestatic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-mediated sinusoidal endothelial cell injury after extensive hepatectomy in cholestatic rats.</a> Hepatology. 25, 636-641 (1997).</li>
<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cell-derived+interleukin+10+is+responsible+for+impaired+bacterial+clearance+in+bile+duct-ligated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Kupffer cell-derived interleukin 10 is responsible for impaired bacterial clearance in bile duct-ligated mice.</a> Hepatology. 40, 414-423 (2004).</li>
<li>Saiki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preoperative+internal+biliary+drainage+is+superior+to+external+biliary+drainage+in+liver+regeneration+and+function+after+hepatectomy+in+obstructive+jaundiced+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Preoperative internal biliary drainage is superior to external biliary drainage in liver regeneration and function after hepatectomy in obstructive jaundiced rats.</a> Ann Surg. 230, 655-662 (1999).</li>
<li>Subhas, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+methylprednisolone+on+warm+ischemia-reperfusion+injury+in+a+cholestatic+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effect of methylprednisolone on warm ischemia-reperfusion injury in a cholestatic rat liver.</a> Am J Surg. 199, 377-380 (2010).</li>
<li>Kara, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomical+study+on+the+rat+pancreas+and+its+ducts+with+emphasis+on+the+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">The anatomical study on the rat pancreas and its ducts with emphasis on the surgical approach.</a> Ann Anat. 187, 105-112 (2005).</li>
<li>Ryan, C. J., Than, T., Blumgart, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choledochoduodenostomy+in+the+rat+with+obstructive+jaundice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Choledochoduodenostomy in the rat with obstructive jaundice.</a> J Surg Res. 23, 321-331 (1977).</li>
</ol>

Cholestase conduit à une myriade de changements dans le système gastro-intestinal. Des études ont été effectuées à la recherche des changements dans le système immunitaire et l&#39;état nutritionnel. Cholestase 1-3 peut affecter les résultats des chirurgies hépatiques. Des études ont été effectuées pour améliorer les résultats des chirurgies hépatiques, en présence de cholestase. 4-5 avec des améliorations dans la médecine et la recherche, des études complémentaires seront effectués sur une cholest...

création du modèle de rat réversible cholestatique

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

La cholestase est une condition clinique communément rencontrés par les deux chirurgiens et les gastroentérologues. Cholestase peut causer divers changements physiologiques et affectent l&#39;état nutritionnel et des résultats chirurgicaux. Étude des changements physiopathologiques se produisant dans le foie et autres organes est d&#39;importance. Diverses études ont été effectuées dans des modèles de rats cholestatiques. Nous avons utilisé un modèle cholestatique réversible chez le rat dans notre étude récente portant sur le rôle de la méthylprednisolone dans les lésions de reperfusion d&#39;ischémie. Diverses techniques de création d&#39;un modèle cholestatique réversible ont été décrits. Création d&#39;un modèle de rat cholestatique réversible peut être difficile compte tenu de la taille plus petite et unique anatomie hepatopancreatobiliary chez le rat. Cet article démontre la vidéo de création d&#39;un modèle cholestatique réversible. Ce modèle peut être utilisé dans diverses études, telles que la recherche sur les changements dans nutritionnelles, physiologiques, pathologiques, des modifications histologiques et immunologiques dans le tractus gastro-intestinal. Ce modèle peut également être utilisé pour voir les effets de la cholestase et diverses interventions thérapeutiques sur les chirurgies hépatiques majeures.

La cholestase est une condition clinique communément rencontrés par les deux chirurgiens et les gastroentérologues. Création d&#39;un modèle de rat cholestatique réversible peut être difficile compte tenu de la taille plus petite et unique anatomie hepatopancreatobiliary chez le rat. Cet article démontre la vidéo de création d&#39;un modèle cholestatique réversible.

Création du modèle de rat réversible cholestatique

La cholestase est une condition clinique couramment rencontrée tant par les chirurgiens que par les gastro-entérologues. La cholestase peut entraîner divers changements physiologiques et...

Création d'un modèle réversible de rat cholestatique. Bonjour à tous. Je suis interne en chirurgie générale à l'hôpital Providence et aux centres médicaux de Southfield, dans le Michigan.Aujourd'hui, je vais démontrer la création d'un modèle réversible de rat cholestatique. Le rat est anesthésié à l'isoflurane dans une chambre, puis par masque par la suite. Pendant la procédure, un tube en polyester ayant un diamètre extérieur de 0,9 millimètre et un diamètre intérieur de 0,6 millimètre est utilisé, une extrémité étant ouverte et l'autre scellée. Les instruments utilisés comprennent un kit standard de microchirurgie pour rat, des écarteurs ophtalmiques, des cotons-tiges et du nylon 8-0. La procédure est réalisée à l'aide d'un microscope opératoire.On peut également utiliser des boucles chirurgicales. Ici, on applique un champ opératoire stable. Cette procédure est réalisée en prenant toutes les précautions stériles.Des étapes opératoires consistent en une incision médiane de deux centimètres pratiquée à partir du sternum. Le tissu sous-cutané et la fascia sont ouverts à l’aide de ciseaux. Le péritoine est ensuite ouvert, exposant ainsi le foie.L'hémostase est assurée à l'aide d'un cautère portatif. Il s'agit du lobe médian et du lobe gauche du foie et de l'anatomie biliaire du rat. Voici un schéma de l'anatomie biliaire du rat.Le foie du rat est divisé en lobes médian droit, gauche et caudé. Voici le nez et l'estomac, et voici le canal cholédoque. Ici, vous observez qu'une partie importante du canal cholédoque n'est pas associée à la veine porte et à l'artère hépatique.C’est cette portion du canal biliaire qui est utilisée pour le crochetage et la création d’une cholestase. Les lobes hépatiques sont rétractés à l’aide d’un rétracteur à soie et un coton-tige est utilisé pour tirer le num vers le bas. Le canal biliaire est ensuite accroché à l’aide d’un instrument de chirurgie microchirurgicale, près duum.Il s'agit de la même étape de mise en place du crochet sur le canal cholédoque, qui est ici démontrée sur un modèle de rat différent. Encore une fois, il s'agit de la même étape de mise en place du crochet sur le canal cholédoque, enregistrée cette fois depuis l'extérieur du microscope opératoire. Pour la création de la cholestase, un fil de suture en polyglycolique est ensuite passé sous le canal cholédoque et ce dernier est mis en traction.Voici le canal biliaire sous tension. Il s'agit d'une vue agrandie. Le canal biliaire est ouvert ici.Le bord de la sonde en polyéthylène est ensuite introduit dans ce canal biliaire. Nous utilisons un instrument microchirurgical pour sonde d'alimentation afin de nous aider lors de cette procédure. Il faut veiller à ce que la sonde soit insérée délicatement.Une fenêtre est ensuite pratiquée dans le canal biliaire proximal. Un fil de suture en nylon 8 est ensuite passé dans cette fenêtre. Le fil de suture ATO est ensuite noué avec trois nœuds carrés pour maintenir le tube en place.Une deuxième fenêtre est créée sous le canal biliaire proximallement par rapport au premier point de suture. Un autre point de suture ATO est utilisé pour fixer le tube proximallement. Une fenêtre est ensuite réalisée dans la partie distale du canal biliaire et un point de suture ATO est passé à travers celle-ci.Cela sert initialement à ligaturer le canal cholédoque. Cette suture est ensuite enroulée autour du tube et nouée autour de celui-ci, fixant ainsi le tube de manière sécurisée. La suture est coupée ici, puis la suture de traction est retirée.Ici, nous effectuons un nouveau zoom arrière. Le tube est ensuite repoussé dans la cavité péritonéale et positionné confortablement. L'abdomen est ensuite lavé à l'aide de deux ml de sérum physiologique.Le liquide est ensuite évacué à l’aide d’une compresse de gaze 2x2. Un examen final est alors effectué pour confirmer la bonne position confortable du tube ainsi que l’hémostase avant la fermeture de l’abdomen. L’aponévrose est fermée par une suture continue en polyactide 5/0.La peau est ensuite fermée par des points d’attache dermiques interrompus. La cholestase est inversée en entraînant le cube de polyester dans l’odum. L'inversion de la cholestase est démontrée chez le rat dans le même contexte ici. La peau et la fascia sont coupées avec des ciseaux.Le foie est rétracté et l'on exerce une traction sur le duodénum. À l'aide de coton-tiges, nous repérons un emplacement sur le duodénum permettant un positionnement confortable du tube en polyester. Nous posons ensuite des sutures éclatées avec du fil 8/0 ou du nylon autour du site préalablement sélectionné pour la mise en place du tube.Nous nous assurons que des prises musculaires séreuses sont effectuées à chaque point de suture. Le tube en polyéthylène est ensuite retiré de la cavité péritonéale. Dans les cas où le tube a été laissé en place pendant une période plus longue, il peut y avoir une adhérence importante ou une fixation autour du tube, qu'il faut dégager délicatement.Le tube est ensuite coupé avec des ciseaux au-dessus d'un écouvillon afin d'imprégner ce dernier du drainage biliaire. Dans les cas où le tube a été laissé en place pendant une durée plus longue, on observe une quantité importante de bile qui s'écoule. Lorsque le tube est ouvert, le duramère est ensuite sectionné au centre du point de suture en chaînette à l'aide de ciseaux, en veillant à ce que toute l'épaisseur du duramère soit bien sectionnée.Le tube est ensuite inséré dans le conduit biliaire et nous nous assurons qu'il est bien positionné et orienté correctement. La suture de fixation est ensuite serrée à l'aide de trois nœuds carrés afin d'ancrer le tube dans le conduit. La plaie est ensuite irriguée pour éliminer la bile qui aurait pu s'écouler pendant l'intervention, puis l'ADOS ferme la plaie en vérifiant que le tube est bien positionné et qu'une bonne hémostase est obtenue avant la fermeture.Démonstration d'un drainage biliaire ici, uniquement à des fins de démonstration, nous retirons le tube du Jordan afin d'illustrer qu'il existe un écoulement libre de la bile par le tube. Application de ce modèle, application de ce modèle. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les modifications physiologiques, pathologiques et histologiques du système biliaire et du tube digestif associées à la cholestase. Ce modèle peut servir à étudier les effets de la cholestase sur la chirurgie hépatique et peut également être utilisé pour analyser les modifications de l'état nutritionnel liées à la cholestase.

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La perturbation de l’écoulement de la bile entraîne une lésion hépatique cholestatique inflammatoire sévère avec une séquence caractéristique d’altérations morphologiques dépendante du temps. Nous présentons ici un protocole de ligature chirurgicale du canal cholédoque chez la souris qui permet d’induire une forte réponse fibrotique après 21 à 28 jours.

Bile ligature du canal chez la souris: induction de inflammatoire lésions hépatiques et les fibrose par obstructive cholestase

Induction rapide hypertrophie du foie par une hépatectomie Staged associant la Partition de foie et de la ligature de la veine porte (ALPPS) a été proposé pour la résection de tumeurs hépatiques résécables borderline. Ce modèle peut élucider les mécanismes impliqués dans l’hypertrophie rapide et permet de tester des médicaments qui favorisent ou bloquent l’accélération de la régénération.

Modèle de rat de la Partition du foie associant et la ligature de la veine porte pour la procédure de mise en scène une hépatectomie (ALPPS)

Nous décrivons ici une méthode commune pour induire des lésions chroniques du foie chez les souris en se nourrissant d’un régime alimentaire (CDE) déficients en choline et additionné d’éthionine. Nous démontrons la surveillance de la santé, perfusion hépatique, d’isolement et de préservation. Une durée de six semaines peut informer d’atteinte hépatique, pathohistology, fibrose, inflammation et les réponses des cellules progénitrices du foie.

Le murin déficients en Choline, additionné d’éthionine (CDE) alimentation modèle d’atteinte hépatique chronique

Nous présentons ici la ligature partielle du cholédoque comme modèle chirurgical des lésions hépatiques et la régénération chez les rongeurs.

La ligature partielle biliaires chez la souris : un modèle contrôlé de la cholestase Obstructive localisée

Nous décrivons ici un protocole détaillé pour les mesures envahissantes des paramètres hémodynamiques, y compris la pression portale, débit sanguin splanchnique et hémodynamique systémique afin de caractériser le syndrome d’hypertension chez les rats.

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Le modèle animal aigu d'échec de foie développé dans l'étude actuelle présente une alternative faisable pour l'étude des thérapies potentielles. Le modèle actuel utilise l'effet combiné des lésions hépatiques physiques et induites par la drogue et offre une fenêtre de temps appropriée pour étudier le potentiel des nouvelles thérapies.

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Ce protocole décrit une méthode commune et faisable d’induire des lésions hépatiques aigues (ALI) par l’intermédiaire de l’exposition CC4 par un tube orogastricrique. L’exposition CC4 induit l’ALI par la formation d’espèces réactives d’oxygène pendant sa biotransformation dans le foie. Cette méthode est utilisée pour analyser la pathophysiologie d’ALI et examiner différentes stratégies hépatoprotectives.

Induire des lésions hépatiques aigues chez les rats via le tétrachlorure de carbone (CCl4) Exposition par un tube orogastricrique

Les modèles animaux pour la pancréatite aiguë sévère permettent l’étude des changements physiopathologiques au stade initial, facilitant l’observation de l’évolution des événements inflammatoires. Nous fournissons ici un protocole pour l’induction de la pancréatite biliaire aiguë sévère par perfusion rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal pancréatique de souris C57BL/6 anesthésiées.

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La pancréatite chronique (PC) est une maladie caractérisée par une inflammation et une fibrose du pancréas, souvent associée à des douleurs abdominales intraitables. Cet article se concentre sur le raffinement de la technique pour générer un modèle murin de CP par perfusion de voies biliaires avec de l’acide 2,4,6 -trinitrobenzène sulfonique (TNBS).

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Un modèle murin de pancréatite aiguë sévère est décrit ici. La procédure présentée ici est très rapide, simple et accessible, permettant ainsi potentiellement l’étude des mécanismes moléculaires et des différentes interventions thérapeutiques dans la pancréatite aiguë de manière pratique.

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Nous avons établi un modèle murin de fibrose hépatique chronique, qui fournit un modèle animal approprié pour l’étude mécaniste de la fibrose hépatique induite par le virus de l’atrésie biliaire (AB) et une plate-forme pour les futurs traitements de l’AB.

Un modèle murin de fibrose hépatique chronique pour l’étude de l’atrésie biliaire

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