Name: Un système de culture de cellules épithéliales de liris Pigment étudier la régénération Lens Newt (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Découvrez la culture de cellules épithéliales pigmentées de l'iris chez le triton pour étudier la régénération du cristallin. Cette méthode permet d'explorer les mécanismes de régénération en biologie cellulaire.

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Ce travail a été financé par une subvention du NIH Ey10540 PAT.

1. Culture cellulaire Iris <ol><li> Recueillir globes oculaires de 7 tritons (anesthésiés dans 0,1% éthyl 3-aminobenzoate d'acide méthane sulfonique préparée dans du PBS) et le lieu en calcium magnésium libre solution de Hanks (CMF). </li><li> Changer de gants et de travailler dans la hotte de culture de tissus. </li><li> Stériliser globes oculaires dans le Lugol-EtOH pendant 3 secondes. </li><li> Laver 2 fois au FCM. </li><li> Transfert aux yeux Hanks et commencer la dissection. </li><li> Disséquer l'iris-cornéen complexes et enlever rétine neurale. </li><li> Transfert complexes dans un nouveau plat de Hanks. </li><li> Utiliser # 15 scalpel, complexes séparés en deux moitiés dorsale et ventrale. </li><li> Enlever les fragments de l'iris (ventrale en premier) et placer dans un plat contenant 1 ml de L-15. </li><li> Ajouter 15% (150 ul) volume de dispase (7,5 unités / ml de concentration). </li><li> Incuber à 27 ° C pendant 2 heures (plat envelopper avec du parafilm). </li><li> Isoler les cellules du stroma IPE (solution de trypsine Placez à 27 ° C). </li><li> Recueillir les cellules IPE dans un tube de 1,5 ml. </li><li> Centrifuger à 1000 rpm à température ambiante (température ambiante) pendant 2 minutes, retirer le surnageant. </li><li> Laver avec 1 ml Hanks et centrifuger à 1000 rpm à température ambiante pendant 2 minutes, retirer le surnageant. </li><li> Ajouter 1 ml solution de trypsine; incuber pendant 2 heures à 27 ° C. </li><li> Centrifuger à 1000 rpm à température ambiante pendant 2 minutes, retirez la trypsine. </li><li> Ajouter 1 ml de L-15 de se laver, centrifugeuse à 1000 rpm pendant 2 minutes. </li><li> Ajouter 800 ul L-15, pipette lentement de haut en bas ~ 10 fois (plus de 12 fois réduit l'adhérence). </li><li> Assiette des cellules IPE sur une plaque 24 de collagène bien enrobées et incuber à 27 ° C pendant 2 semaines (habituellement, quatre dorsales et ventrales 4 puits sont obtenus à partir de 7 tritons). </li><li> A ce stade, les cellules sont adaptées pour la transfection de gènes ou d'un traitement avec des facteurs afin de déterminer leur rôle dans l'induction de la régénération ou à interférer avec l'objectif. </li></ol> 2. Agrégation des cellules Iris <ol><li> Pour les plaques contenant des cellules de l'iris ajouter 20 pi de solution dispase à 400 pl de milieu, remuer doucement. </li><li> Incuber les plaques à 27 ° C pour la nuit. </li><li> Pipet doucement de haut en bas pour déloger les cellules </li><li> Placer dans les cellules du tube Eppendorf et de spin 2 minutes à 1000 rpm à température ambiante. </li><li> Retirer et laver moyennes en ajoutant 1 ml de L-15 complète, spin 2 minutes à 1000 rpm à RT, éliminer le milieu. </li><li> Utilisez 2000-7000 cellules par agrégat. Ajouter 200 ul L-15 par agrégat dans chaque tube. </li><li> Fractionner les cellules (200 pi) dans des tubes Eppendorf de nouvelles. </li><li> Centrifuger à 1000 rpm pendant 2 min à température ambiante. </li><li> Incuber pendant 48 heures à 27 ° C. </li></ol> 3. L'implantation de cellules Aggregrated <ol><li> Faire une fente dans la cornée de l'œil de triton et retirez l'objectif. </li><li> Après retrait du cristallin, placer l'agrégat de cellules IPE juste en dessous du tissu cornéen sur la face ventrale de l'œil. </li><li> Les tritons sont conservés pendant un mois pour leur faire régénérer la lentille. </li></ol> 4. Intégration des yeux Newt <ol><li> Retirez les yeux Newt implanté à l'agrégat et le placer dans un tampon phosphate salin (PBS). </li><li> Fixer dans du paraformaldéhyde 4% à 4 ° C pendant au moins 4 heures ou jusqu'au lendemain. </li><li> Laver dans du PBS, 4 ° C pendant 30 minutes. </li><li> Traitez-le avec une solution saline 0,85%: 4 ° C, à 30 minutes. </li><li> Laver à Saline / éthanol (1:1): RT pendant 15 minutes. </li><li> Laver à l'éthanol 70%: RT, à 15 minutes. Répétez une fois. </li><li> Laver à l'éthanol 85% et 95% d'éthanol à température ambiante, 30 minutes chacune </li><li> Laver à l'éthanol à 100%: RT, à 30 minutes. Répétez une fois. </li><li> Conserver à 4 ° C ou de continuer. </li><li> Laver à 100% du xylène: RT, à 30 minutes. Répétez une fois. </li><li> Traitez-les avec du xylène / paraffine (1:1): 60 ° C, à 45 minutes. </li><li> Traiter avec de la paraffine à 100%: 60 ° C, à 20 minutes. Répétez ce deux fois plus. </li><li> Intégrer dans l'intégration des moules. </li></ol> 5. Sectionnement <ol><li> Préparer 15 sections um de l'œil embarqué utilisant un microtome. </li><li> Placez les sections oeil sur une lame de gélatine couché et le laisser sur le réchauffement de diapositives. </li></ol> 6. Coloration <ol><li> Placer les lames dans le xylène pendant 10 minutes. Répétez encore une fois. </li><li> Hydratez dans: 100%, 95%, 80%, 70%, 30% d'éthanol pendant 1 minute de chaque </li><li> Rincer à l'eau DI pendant une minute. </li><li> Laver dans du PBS pendant 15 minutes. </li><li> Laver dans du PBST (0,2% de Triton-X 100 dans du PBS) pendant 15 minutes. </li><li> Laver dans du PBS pendant 15 minutes. </li><li> Placer dans la solution de blocage (anticorps de chèvre 10% du secondaire) pendant une heure. </li><li> Placer dans l'anticorps primaire pour la nuit. </li><li> Lavez anticorps primaire dans du PBS pendant 15 minutes. </li><li> Laver dans du PBST pendant 15 minutes. </li><li> Laver dans du PBS pendant 15 minutes. </li><li> Placer dans anticorps secondaire pendant 2 heures dans l'obscurité (1:100 dilution en PBS). </li><li> Laver dans du PBS, PBST et PBS pendant 15 minutes chacun, puis monter. </li><li> Observez la glisse sous un microscope à fluorescence. </li></ol> 7. Les résultats représentatifs: Cette procédure de mise en culture Newt irn'est cellules a été utilisée pour étudier le potentiel de régénération de la dorsale et les cellules ventrales IPE. Par ailleurs, il est également possible d'étudier les gènes spécifiques qui contribuent à l'objectif de mécanisme de régénération dans l'oeil de triton. Lorsque les cellules ont été cultivées pendant 2 semaines (figure 1) ils peuvent être transfectées par des gènes d'examiner leur fonction dans la régénération de l'objectif. D'intérêt particulier sont les gènes qui pourraient induire l'iris ventral. Puisque les cellules ventrales iris ne peut pas transdifférencier à la lentille (figure 2) la fonction d'induction d'un gène candidat peut être étudiée. Dans le passé, en utilisant cette technique, nous avons montré que lorsque six-3 a été surexprimé dans la présence de l'induction de l'acide rétinoïque lentilles a été observée à partir de la ventrale de l'iris 6. Dans la figure 3, nous pouvons voir que l'ensemble de l'iris ventrale a donné lieu à une lentille entièrement développé et différenciées (tête de flèche), et non pas différente de celle de la lentille d'hôte de la dorsale de l'iris (la flèche). <img src="/files/ftp_upload/2713/2713fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. a) dorsale de l'iris des cellules épithéliales pigmentées cultivés in vitro pendant une période de 2 semaines. b) ventrale de l'iris des cellules épithéliales pigmentées cultivés in vitro pendant une période de 2 semaines. Notez que la pigmentation persiste à ce stade dans les cellules de l'iris à la fois dorsale et ventrale. <img src="/files/ftp_upload/2713/2713fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. La capacité de régénération des cellules cultivées de l'IPE. induction du cristallin a) à partir agrégat de cellules dorsales IPE (flèche). Induction du cristallin hôte de l'iris dorsale (flèche), di: dorsale de l'iris, vi: ventrale de l'iris, le: épithélium lentille LF: fibres optique. b) absence d'induction du cristallin agrégat de cellules ventrales IPE (flèche). Induction du cristallin hôte de l'iris dorsale (flèche). <img src="/files/ftp_upload/2713/2713fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. L'induction de l'objectif dans agrégées ventrale transfectées avec six-3 et traitée à l'acide rétinoïque. Induction du cristallin hôte de l'iris dorsale (flèche). L'induction de l'objectif dans agrégées ventrale (flèche).

<ol><li>Tsonis, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Regeneration in vertebrates.</a> Dev Biol. 221, 273-284 (2000).</li>
<li>Tsonis, P. A., Madhavan, M., Tancous, E. E., Del Rio-Tsonis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+newt%27s+eye+view+of+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A newt's eye view of lens regeneration.</a> Int. J. Dev. Biol. 48, 975-980 (2004).</li>
<li>Del Rio-Tsonis, K., Tsonis, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eye+regeneration+at+the+molecular+age%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Eye regeneration at the molecular age.</a> Dev. Dyn. , 226-2211 (2003).</li>
<li>Okamoto, M., Ito, M., Owaribe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Difference+between+dorsal+and+ventral+iris+in+lens+producing+potency+in+normal+lens+regeneration+is+maintained+after+dissociation+and+reaggregation+of+cells+from+the+adult+newt%2C+Cynops+pyrrhogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Develop+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Difference between dorsal and ventral iris in lens producing potency in normal lens regeneration is maintained after dissociation and reaggregation of cells from the adult newt, Cynops pyrrhogaster.</a> Develop Growth Differ. 40, 11-18 (1998).</li>
<li>Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+transfection+system+for+functional+gene+analysis+in+adult+amphibian+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Develop+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Highly efficient transfection system for functional gene analysis in adult amphibian lens regeneration.</a> Develop Growth Differ. 43, 361-370 (2001).</li>
<li>Grogg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+inhibition-driven+regulation+of+six-3+underlies+induction+of+newt+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">BMP inhibition-driven regulation of six-3 underlies induction of newt lens regeneration.</a> Nature. 438, 858-862 (2005).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miRNAs+in+Newt+Lens+Regeneration%3A+Specific+Control+of+Proliferation+and+Evidence+for+miRNA+Networking%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">miRNAs in Newt Lens Regeneration: Specific Control of Proliferation and Evidence for miRNA Networking.</a> PLoS One. 5, e12058-e12058 (2010).</li>
<li>Madhavan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Pax-6+in+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The role of Pax-6 in lens regeneration.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 14848-14853 (2006).</li>
<li>Maki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-type+linker+histone+B4+is+required+for+transdifferentiation+of+somatic+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Oocyte-type linker histone B4 is required for transdifferentiation of somatic cells in vivo.</a> FASEB J. 24, 3462-3467 (2010).</li>
</ol>

Ce protocole a établi un système in vitro pour étudier les mécanismes de régénération lentille tritons. Depuis les agrégats (soit dorsale ou ventrale suivre fidèlement leur comportement in vivo lors de la régénération de cette technique peut atténuer l&#39;énorme effort requis pour la transgénèse chez les tritons et peut être utilisé pour un gain de fonction ainsi que la perte de 7,8,9 expériences de fonction. Aussi , les agrégats ou les iris dans son ensemble peut être facilement traitée avec des facteurs de croissance et d&#39;examiner leurs effets tels que décrits dans le présent protocole. Par exemple le rôle de la voie BMP a été étudié en utilisant cette technique 6.

<table><tbody><tr><td>Solution de Lugol&amp;rsquo;s</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-6146</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-4034</td><td></td></tr><tr><td>Acide méthanesulfonique d'éthyl 3-aminobenzoate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-10521</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Tripsine 1:250</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td>27250018</td><td></td></tr><tr><td>L-15 (Leibovitz)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-4386</td><td></td></tr><tr><td>DNase 1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025-150KU</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de kanamycine</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td>100x, 15160</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone (solution d'amphotéricine B)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2942</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de 24 puits revêtue de collagène</td><td>BD Biosciences</td><td>354408</td><td></td></tr></tbody></table>

un système de culture de cellules épithéliales de l&#39;iris pigment étudier la régénération lens newt

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

Salamandres, comme le triton et l&#39;axolotl possède la capacité de régénérer la plupart de ses pièces de corps perdus tels que des branches, la queue avec la moelle épinière, des yeux, du cerveau, du cœur, la mâchoire 1. Plus précisément, les tritons sont uniques pour ses capacités de régénération de l&#39;objectif. Après retrait du cristallin, cellules IPE de la dorsale de l&#39;iris transdifférencier aux cellules du cristallin et finissent par former une nouvelle lentille en un mois environ 2,3. Cette propriété de la régénération n&#39;est jamais exposées par les cellules de l&#39;iris ventral. Le potentiel de régénération des cellules de l&#39;iris peut être étudiée en faisant des greffes de cellules cultivées in vitro de l&#39;IPE. Pour la culture, les cellules dorsales et ventrales de l&#39;iris sont d&#39;abord isolés de l&#39;œil et cultivées séparément pendant une période de 2 semaines (figure 1). Ces cellules cultivées sont reaggregated et implanté à l&#39;œil triton. Des études antérieures ont montré que la réagréger dorsale maintient sa capacité lentilles formant alors l&#39;agrégat ventrale ne forme pas un objectif, récapitulant, donc le procédé in vivo (figure 2) 4,5. Ce système de détermination de potentiel de régénération des cellules de l&#39;iris dorsale et ventrale est très utile pour étudier le rôle des gènes et des protéines impliquées dans la régénération de l&#39;objectif.

Dans le triton, l&#39;objectif se régénère toujours à partir de l&#39;iris par transdifférenciation dorsale de l&#39;iris des cellules épithéliales pigmentées (IPE). Nous décrivons ici une procédure de cellules en culture Newt dorsale et ventrale IPE et leur implantation à l&#39;oeil triton. Les cellules implantées sont ensuite étudiées par le sectionnement des tissus et immunohistochimie.

Un système de culture de cellules épithéliales de l&#39;iris Pigment étudier la régénération Lens Newt

Les salamandres, telles que le triton et l'axolotl, possèdent la capacité de régénérer nombre de leurs parties corporelles perdues, comme les membres, la queue avec la moelle épinière, l'œil, le cerveau...

L'objectif général de cette procédure est de cultiver des cellules de l'épithélium pigmenté de l'iris afin d'étudier la régénération du cristallin chez la triton. Cela est réalisé en anesthésiant d'abord un triton dans une solution anesthésiante, puis en prélevant les yeux.La deuxième étape de la procédure consiste à isoler les cellules épithéliales pigmentées de l’iris à partir du tissu oculaire en retirant d'abord le tissu rétinien, puis en découpant les fragments de l’iris cornéen en moitiés dorsale et ventrale. Les cellules de l’iris sont ensuite séparées du stroma et cultivées in vitro pendant deux semaines. Après deux semaines de Turing, les cellules EPI sont agrégées puis implantées dans un nouvel hôte qui a été lin optimiz.Après un mois de cicatrisation, l'histologie révèle le potentiel de régénération du cristallin par les cellules de l'épithélium pigmenté de l'iris (IPE) dorsales et ventrales. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle aux étapes de culture cellulaire et d'implantation, difficiles à apprendre car elles exigent une bonne centaine de compétences en microdissection et en chirurgie. Commencez par anesthésier au moins sept souris nues avec 0,1 % d'Ethel trois amino benzoate méthane sul acid, puis retirez chirurgicalement leurs yeux à l’aide de pinces et de ciseaux chirurgicaux en coupant la paupière ainsi que la conjonctive. Ensuite, sectionnez le nerf optique.Transférez maintenant rapidement les yeux disséqués sous une hotte et stérilisez-les dans de l'éthanol de Lugol pendant trois secondes. Lavez ensuite les yeux deux fois dans une solution de Hank sans calcium ni magnésium. Transférez-les dans du Hank frais et poursuivez la dissection.À l’aide d’un scalpel, faire une incision dans l’œil. Puis, utiliser des ciseaux pour découper tout autour de la marge cornéenne. Retirer le cristallin et sectionner le tissu rétinien restant ainsi que la sclérotique.Transférez les complexes irido-cornéens dans une boîte de Pétri contenant du Hanks frais à l’aide d’un scalpel n°15. Séparez les complexes en leurs moitiés dorsale et ventrale. Les iris dorsal et ventral sont identifiés par la présence de taches noires sur la sclère du côté dorsal, et par une incision en forme de V sur l’iris ventral.Séparez l’iris ventral de l’iris dorsal. Ramassez les fragments d’iris dans une boîte de 35 millimètres contenant un millilitre de solution L 15. Conservez les moitiés dorsale et ventrale dans des boîtes séparées.Ajoutez maintenant 150 microlitres de solution dispa dans les boîtes, puis incubez-les pendant deux heures à 27 degrés Celsius. Pour recueillir les cellules IPE à partir du stroma. À l’aide de pinces, détachez délicatement les cellules IPE de tous les fragments de tissu recueillis.Ensuite, transférez les cellules IPE dans un tube de 1,5 millilitre et centrifugez à 1000 RP M pendant deux minutes à température ambiante, puis jetez le surnageant. Resuspendez le culot dans un millilitre de solution de Hanks, puis répétez la centrifugation pour séparer les cellules. Éliminez la solution de Hanks et resuspendez le culot.Dans un millilitre d'une solution de trypsine au 1/250, incuber pendant deux heures à 27 degrés Celsius, puis laver les cellules par centrifugation et éliminer la trypsine. Ajouter un millilitre de solution L 15 et centrifuger à nouveau ; répéter une fois le lavage, puis remplacer par 800 microlitres de solution L 15 fraîche, et resuspendre délicatement les cellules en solution. Ensuite, ensemencer les cellules dans des plaques de 24 puits revêtues de collagène.Le rendement habituel à partir de sept Ns est de quatre puits de cellules dorsales et de quatre puits de cellules ventrales. Incuber la boîte pendant deux semaines à 27 degrés Celsius après deux semaines. On observe ici que l’IPE peut être transfecté par des gènes afin d’en étudier la fonction dans la régénération du cristallin.Cette culture de deux semaines de cellules IPE ventrales présente la même morphologie que les cellules dorsales. Notez que la pigmentation persiste à ce stade dans les cellules de l'iris dorsales et ventrales. Avant d'implanter les cellules IPE, elles doivent être agrégées en ajoutant 20 microlitres de dyse dans 400 microlitres de milieu de culture frais aux cellules, en agitant doucement la plaque et en laissant les cellules toute la nuit dans un incubateur à 27 degrés Celsius.Le lendemain, utiliser un pipettage doux pour détacher les cellules, puis les transférer dans des tubes de 1,5 millilitre. Laver ensuite les cellules par centrifugation des tubes et remplacement du surnageant par un millilitre de L 15. Répéter cette étape deux fois. Utiliser 10 microlitres de la suspension cellulaire pour calculer le nombre de cellules selon les méthodes standard.Une fois le calcul effectué, préparez de 3 000 à 5 000 cellules dans 200 microlitres de L-15 par agrégat. Faites maintenant centrifuger les cellules et incubez-les pendant 48 heures. À 27 degrés Celsius, les cellules peuvent désormais être implantées dans un animal receveur.Commencez par anesthésier un adulte nouveau dans la solution de repos jusqu'à ce qu'il cesse de bouger. Utilisez ensuite une lame de scalpel pour pratiquer une incision dans la cornée de l'œil. Puis, à l'aide de pinces, retirez le cristallin.Après avoir retiré le cristallin, placez l'agrégat de cellules IPE juste en dessous du tissu cornéen sur la face ventrale de l'œil. Replacez maintenant le triton dans un récipient séparé et laissez-le cicatriser. Pendant ce temps, manipulez le triton avec précaution afin d'éviter d'endommager le tissu en voie de guérison.Les cellules transplantées nécessitent un mois pour régénérer un nouveau cristallin. Une fois le mois écoulé, retirez les nouveaux yeux implantés avec les cellules agrégées et fixez le tissu. À l’aide d’un protocole de déshydratation standard, le tissu fixé peut être inclus dans des moules d’inclusion adaptés à la coupe de sections de 15 micromètres, puis découpé et coloré de manière appropriée.Après l'implantation d'un agrégat dans un œil nouvellement régénéré, l'agrégat provenant des cellules épithéliales de l'iris dorsales induit la formation d'un nouveau cristallin. L'induction du cristallin hôte à partir de l'iris dorsal est également observée dans l'œil contenant l'implant ventral. Aucune induction du cristallin n'est observée à partir de l'agrégat préparé à partir des cellules épithéliales de l'iris ventrales ; toutefois, lorsque le gène six three est surexprimé en présence d'acide rétinoïque, une induction du cristallin est observée à partir de l'agrégat ventral.En outre, l'induction du cristallin hôte à partir de l'iris dorsal de l'œil est observée après son développement. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la régénération du cristallin pour explorer le rôle de différents gènes dans une nouvelle perspective.

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