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Modèle murin d'occlusion artère cérébrale moyenne
Modèle murin d'occlusion artère cérébrale moyenne
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Medicine
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This content is Free Access.
JoVE Journal Medicine
Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Modèle murin d'occlusion artère cérébrale moyenne

Full Text
79,795 Views
09:43 min
February 13, 2011

DOI: 10.3791/2761-v

Terrance Chiang1, Robert O. Messing1, Wen-Hai Chou1,2

1Department of Neurology,Ernest Gallo Clinic and Research Center, University of California, San Francisco, 2Department of Biological Sciences,Kent State University

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This video demonstrates a method for producing a middle cerebral artery occlusion (MCAO) in adult mice using an intraluminal monofilament. It also illustrates how to evaluate the extent of cerebral infarction through 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Experimental Surgery
  • Stroke Models

Background

  • Middle cerebral artery occlusion is a common model for studying stroke.
  • TTC staining is a method used to assess brain infarction.
  • Understanding MCAO techniques is crucial for neuroscience research.
  • This method allows for the evaluation of therapeutic interventions in stroke.

Purpose of Study

  • To demonstrate the surgical technique for MCAO in mice.
  • To provide a protocol for assessing cerebral infarction.
  • To enhance reproducibility in stroke research.

Methods Used

  • Preparation of the suture for occlusion.
  • Surgical isolation of the external carotid artery (ECA).
  • Insertion of the suture to occlude the middle cerebral artery (MCA).
  • Evaluation of infarction using TTC staining post-surgery.

Main Results

  • The technique successfully occluded the MCA in adult mice.
  • TTC staining effectively highlighted areas of cerebral infarction.
  • The protocol can be replicated for further studies on stroke.
  • Detailed steps ensure clarity for researchers performing the procedure.

Conclusions

  • The MCAO model is a valuable tool for stroke research.
  • Proper technique and evaluation methods are essential for accurate results.
  • This video serves as a comprehensive guide for researchers.

Frequently Asked Questions

What is middle cerebral artery occlusion?
Middle cerebral artery occlusion (MCAO) is a surgical procedure used to induce stroke in animal models for research purposes.
How is cerebral infarction evaluated?
Cerebral infarction is evaluated using 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining, which differentiates viable from non-viable brain tissue.
What are the key steps in performing MCAO?
Key steps include preparing the suture, isolating the ECA, inserting the suture to occlude the MCA, and performing TTC staining post-surgery.
Why is this model important for research?
The MCAO model is important for studying the mechanisms of stroke and testing potential therapeutic interventions.
What precautions should be taken during surgery?
Precautions include ensuring proper anesthesia, careful handling of tissues, and maintaining sterile conditions to prevent infection.
How long should the mouse be monitored after surgery?
The mouse should be monitored closely during recovery and for at least 24 hours post-surgery to ensure proper healing and assess any complications.

Nous démontrons dans la vidéo un procédé pour produire une occlusion de l'artère cérébrale moyenne chez des souris adultes en utilisant un monofilament intraluminale. Nous montrons aussi comment évaluer l'étendue de l'infarctus cérébral par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) coloration.

Bonjour, je m’appelle Terrence Jam. Je m’appelle Hai Joe. Aujourd’hui, nous allons vous montrer comment réaliser un modèle murin d’occlusion de l’artère moyenne de l’artère moyenne.

Alors commençons. Cette expérience commence par la préparation de la suture. Commencez par couper la suture en morceaux de 20 millimètres.

Ensuite, arrondissez la pointe en amenant la suture vers un cautérisant. Ensuite, mesurez l’extrémité de la suture. Nous sommes maintenant prêts à commencer l’opération avec le masque placé sur le dos.

Faites une incision le long de la ligne médiane. Utilisez des forceps pour exposer l’ECA. L’artère carotide externe le long de l’ECA est constituée de nombreuses branches.

L’une de ces branches est la STA, l’artère thyroïdienne supérieure. Le STA doit être coagulé avec une pince bipolaire. Ensuite, la STA doit être coupée pour permettre à la ECA de mieux être isolée.

Ensuite, l’ECA est coagulé et sa taille est aussi éloignée que possible de l’ACC. À ce stade, vous voudrez peut-être isoler l’ECA pour un meilleur accès. Ensuite, attachez sans serrer deux sutures autour de l’ECAA à quelques millimètres l’une de l’autre.

Appliquez la pince à la ramification du CCA vers l’ECA et l’ICA. Procédez ensuite à la coupe de la pointe de la souche ECA. Ensuite, repositionnez la Cour des comptes pour l’aligner sur l’ICA.

Cela permet à la suture d’avoir une entrée continue de l’ECA à l’ICA. Mesurez la longueur totale de la suture avant l’insertion. Insérez la suture dans l’ouverture pratiquée en clipsant le moignon ECA.

Au fur et à mesure que la suture passe le nœud distal, fixez le nœud en le serrant. Ensuite, retirez la pince et insérez la suture plus loin dans l’ECA. Au fur et à mesure que la suture passe le nœud proximal, fixez le nœud en le serrant.

Après avoir fixé les deux nœuds, insérez soigneusement la suture le long de l’artère jusqu’à ce que neuf à 10 millimètres de suture soient passés. Le point de bifurcation, cela peut être fait en soustrayant la longueur de la suture jusqu’au point de bifurcation de la longueur totale de la suture. Au fur et à mesure que la suture atteint l’origine du MCA.

Le MCA est occlus. Au bout de 24 heures, les masses se sacrifient et le cerveau s’isole. Pour la coloration TTC, le cerveau isolé est placé dans un moule et tranché avec une lame de rasoir.

Ensuite, le cerveau est placé dans 2 %TTC pendant 20 minutes à température ambiante. Enfin, le cerveau est fixe, du jour au lendemain et neutre. Formine tamponnée.

La préparation des sutures est un processus délicat. Voici quelques conseils utiles. Positionnez la suture et le cautériseur de la même manière.

Ensuite, tout en gardant le cautériseur immobile, rapprochez lentement la suture. Ensuite, mesurez la suture pour vous assurer qu’elle est de la bonne taille. La taille de la suture que nous utilisons dans cette expérience est d’environ 0,21 à 0,22 millimètre.

Pour commencer l’opération, placez le masque sur son dos et induisez une anesthésie avec 30 % d’oxygène et 70 % d’azote. Faites une incision le long de la ligne médiane, puis appliquez des écarteurs pour ouvrir l’accès à la zone. Ça devrait ressembler à ça.

Séparez soigneusement le tissu avec la pince. Ensuite, exposez et isolez l’ECA avec la pince dans le processus d’isolement de l’ECA, le STA doit être coagulé et coupé. Cela permet d’isoler un morceau d’ECA plus long.

Ensuite, l’ECA doit être coagulé à l’aide d’une pince bipolaire Après la coagulation, l’ECA doit être coupé. Ensuite, isolez l’ECA et attachez deux sutures sans serrer autour de l’ECAA à quelques millimètres l’une de l’autre. Le résultat devrait ressembler à ceci.

Appliquez maintenant la pince à la bifurcation de CCA en ICA et ECA. Assurez-vous que la palourde obstrue complètement le flux sanguin vers l’ECA. Coupez ensuite l’extrémité de la souche ECA.

Mesurer la suture avant l’insertion après qu’une ouverture ait été faite sur l’ECA. Insérez la suture et l’ouverture au-delà du nœud distal. Une fois la suture passée le nœud distal, serrez le nœud.

Ensuite, retirez la pince. Après avoir vérifié que le nœud distal est bien fixé, insérez la suture plus loin le long de l’ECA au-delà du nœud proximal. Ensuite, resserrez le nœud proximal.

Maintenant, insérez soigneusement la suture le long de l’ECA dans l’ICA. Continuez à insérer la suture le long de l’ICA jusqu’à ce que neuf à 10 millimètres que la suture dépasse le point de bifurcation. Cela peut être fait en soustrayant la longueur de la suture jusqu’au point de bifurcation de la longueur totale de la suture.

Ensuite, coupez la suture de manière à ce qu’elle ne blesse pas les tissus environnants. Suturez ensuite l’incision et laissez la souris récupérer. Préparez-vous à la coloration TTC 24 heures après la chirurgie.

Commencez par sacrifier la souris atteinte de luxation cervicale. Ensuite, isolez le cerveau du crâne et placez-le dans un moule. Trancher ensuite avec une lame de rasoir, colorer le cerveau à 2 %TTC pendant 20 minutes à température ambiante.

Puis fixer pendant la nuit et tamponner à 10 % neutre pour le melin. Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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Médecine numéro 48 la neurologie des maladies des souris l'ischémie

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