Name: Une technique basée Impédance électrique en temps réel pour mesurer Invasion de monocouche de cellules endothéliales par les cellules cancéreuses (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Apprenez une technique d'impédance électrique en temps réel pour mesurer l'invasion de cellules cancéreuses à travers une monocouche d'endothéliales HUVEC. Cette méthode permet de quantifier les interactions cellulaires mimant les processus métastatiques in vivo.

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Ce travail a été généreusement financé par des fonds de la Fondation du cancer (Baltimore, MD), Brandon Lee Carrington Foundation (Silver Spring, MD), DOD (W81XWH-10-1-0137) et le NIH pour enfants (R01CA108641). Nous tenons à remercier le Dr Anton Wellstein et les membres de son laboratoire pour partager leur expérience et nous aider à optimiser les méthodes présentées.

1. Préparation <ol><li> Toutes les mesures doivent être effectuées dans des conditions stériles dans une hotte de culture de tissus. </li><li> La station de xCELLigence est placé dans un incubateur à 37 ° C en présence de 5% de CO 2. </li><li> Utilisation des cellules HUVEC de passage faible, de préférence pas plus de passage 6. Aussi, assurez-vous que les cellules ne sont plus que 75% de confluence au moment de la récolte. </li><li> Les cellules HUVEC sont cultivées dans des EGM-2 milieux reconstitués avec kit EGM-2 balles (Lonza Biosciences) contenant des facteurs de croissance, des suppléments et 5% de sérum de veau fœtal. </li><li> Toutes les traces de trypsine doivent être retirés de suspensions cellulaires par les cellules filature à 200xg, lave une fois avec PBS, et leur remise en suspension à des densités cellulaires indiquées. </li><li> Manteau xCELLigence E-plaque 16 avec 0,1% de gélatine pendant 1 heure à 37 ° C ou une nuit à 4 ° C. Laver la plaque avec du PBS et ajouter 100 ul EGM-2 reconstituée médias. Effectuer une lecture à blanc sur le système de xCELLigence pour mesurer fondimpédance en l'absence de cellules. </li></ol> 2. Génération HUVEC monocouche <ol><li> Récolter un flacon sous-confluentes de cellules HUVEC par la trypsine. Remettre les cellules en reconstituées EGM-2 médias à une densité finale de 2,5 x 10 5 cellules / ml. </li><li> Pour chaque puits d'un fond calibré E-plaque contenant 100 ul EGM-2 médias, ajouter 100 pi de la suspension de cellules HUVEC (2,5 x 10 4 cellules HUVEC). </li><li> Installer immédiatement E-Plate dans l'instrument de xCELLigence. </li><li> logiciel de xCELLigence de programme pour effectuer des lectures d'impédance à 10 minutes d'intervalle. </li><li> Laissez les cellules endothéliales se développent pour 18-21 heures jusqu'à ce qu'ils forment une monocouche, comme en témoigne l'aplatissement de l'indice de la cellule (figure 2). </li></ol> 3. Addition des cellules et la normalisation des données d'invasion. <ol><li> Une fois une monocouche HUVEC stable s'est formée, récolte les cellules tumorales par la trypsine et remettre en suspension à une finale tanièreslité de 1 x 10 5 cellules / ml dans les médias utilisés pour cultiver des cellules tumorales (comme RPMI ou médias DMEM contenant 10% de FBS) </li><li> lectures d'impédance de pause sur le logiciel de xCELLigence et supprimer E-Plate de la gare. </li><li> Retirer EGM-2 médias par aspiration. Ajouter 100 ul de la suspension de cellules tumorales contenant 1 x 10 4 cellules. En règle générale, un ratio 1:2,5 des cellules tumorales: cellules endothéliales ensemencées, qui fonctionne le mieux pour le dosage. Toutefois, le ratio peut être optimisé pour des lignées de cellules individuelles. </li><li> Placer le E-plaque sur le système de xCELLigence dans l'incubateur et continuer lectures d'impédance à intervalles de 10 minutes. </li><li> Invasion peut être suivie en temps réel au cours des prochaines 6-12 heures par une chute de l'indice de la cellule en raison de la rétraction des jonctions endothéliales et la pénétration de l'invasion des cellules tumorales. </li><li> Normaliser les résultats au moment de l'addition d'envahir les cellules tumorales. Le logiciel permet xCELLigence normalisation à n'importe quel point du temps et des résultatspeut être directement visualisé dans la fenêtre de logiciel. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs: Un exemple de HUVEC monocouche invasion par les cellules métastatiques et non métastatiques est illustré à la figure 3. K7M2 est une lignée de cellules d'ostéosarcome métastatique. Ces cellules expriment des niveaux élevés de l'Ezrin de protéines de liaison du cytosquelette, ce qui explique les propriétés invasives de cette lignée cellulaire 13,14. Lorsque les cellules HUVEC sont mis au défi avec des cellules K7M2, il ya une baisse de la résistance électrique dans les 6 heures. Cette baisse de résistance électrique représente l'invasion de la monocouche HUVEC par les cellules tumorales envahissantes. La lignée cellulaire K12, d'autre part, exprime des niveaux beaucoup plus faibles de Ezrin et est par conséquent moins métastatique 13. Contestation de la monocouche HUVEC avec K12 cellules entraîne une baisse moins forte de la résistance que les cellules sont incapables d'adhérer ou envahir par la monocouche HUVEC (Figure 3). <imgsrc files alt='"Figure'></imgsrc> Figure 1. Schéma de processus de flux de travail pour l'invasion des cellules endothéliales par les cellules tumorales. Les cellules HUVEC sont étalées sur E-plaques recouvertes de gélatine et le droit de former une monocouche confluente. Les cellules malignes se sont ajoutés une fois une monocouche a formé et invasion est surveillé en temps réel comme l'indice de la cellule change en raison de l'invasion de la monocouche endothéliale. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Formation de la monocouche HUVEC. Les variations de l'indice de la cellule que les cellules HUVEC s'attacher et se propagent sur des électrodes d'or recouvertes de gélatine. La formation d'une monocouche confluente est représentée par une stabilisation de l'indice de cellules après 18 heures. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Invasion des cellules HUVEC par K7M2 et K12 cellules d'ostéosarcome. Une forte diminution de cell-indice survient en quelques heures de la mise en place de cellules hautement métastatiques K7M2. Cellules K12, en revanche, sont moins métastatique et sont incapables de pénétrer la monocouche endothéliale aussi efficacement que les cellules K7M2. Ceci est représenté par une moins forte baisse de l'indice de la cellule lorsque la monocouche HUVEC est contestée par des cellules K12. Contrôle représente l'impédance de monocouche HUVEC en l'absence de cellules cancéreuses. Des expériences ont été réalisées en triple.

<ol><li>Klein, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer.+The+metastasis+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer. The metastasis cascade.</a> Science. 321, 1785-1787 (2008).</li>
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<li>Ren, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+actin-cytoskeleton+linker+protein+ezrin+is+regulated+during+osteosarcoma+metastasis+by+PKC%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The actin-cytoskeleton linker protein ezrin is regulated during osteosarcoma metastasis by PKC.</a> Oncogene. 28, 792-802 (2009).</li>
</ol>

Le coût de publication de ce manuscrit a été aimablement fourni par Roche Applied Science.

Le dosage de l&#39;invasion HUVEC en temps réel est une méthode simple, mais puissant pour la surveillance invasion. Il fournit des résultats en temps réel, ce qui est un avantage considérable sur les autres techniques traditionnelles qui s&#39;appuient sur l&#39;analyse du point final. Le dosage peut être modifié pour tester des médicaments, des anticorps, des ligands et des protéines que des inhibiteurs ou des stimulateurs de métastases. L&#39;effet de différents agents sur l&#39;endothélium / cellules cancéreuses diaphonie peut être évaluée aussi bien. Lors de l&#39;introduction des agents exogènes, tels que les facteurs de croissance et des drogues dans les milieux de culture, il est important de veiller à ce qu&#39;ils n&#39;affectent pas l&#39;intégrité de la monocouche HUVEC. Perturbation de la monocouche HUVEC peut être testée en introduisant l&#39;agent exogène en l&#39;absence de cellules envahissant, et d&#39;assurer qu&#39;il n&#39;ya pas de changement de l&#39;indice de la cellule. Ainsi, des contrôles appropriés doivent être inclus dans le cadre de la conception expérimentale. Différentes lignées cellulaires montrent des courbes différentes cellules d&#39;indice car ils forment une confmonocouche luent. La forme de la courbe, ainsi que la cellule d&#39;indice maximale atteinte, est un type de cellule spécifique. Les cellules HUVEC montrent un aplatissement de l&#39;indice de la cellule transitoire caractéristique 4-6 heures après l&#39;ensemencement, suivie d&#39;une autre stabilisation à un indice de la cellule supérieure après 16-18 heures. Par conséquent, il est important de laisser les cellules forment une monocouche confluente pendant au moins 18 heures avant l&#39;addition des cellules tumorales. Etant donné que l&#39;indice de cellules est dépendant de l&#39;environnement ionique sur l&#39;électrode / cellule en interphase, différents facteurs tels que la morphologie cellulaire et la qualité des adhérences cellule-cellule d&#39;influencer la cellule d&#39;indice, en plus de la zone de fond bien couvert. Ainsi, la diminution de l&#39;indice de la cellule, qui se produit lors de l&#39;invasion des cellules tumorales, est une fonction de plusieurs facteurs, qui comprennent la rétraction des jonctions endothéliales et l&#39;invasion des cellules tumorales ultérieure. L&#39;instrument xCELLigence est fabriqué dans trois configurations différentes: Analyseur de cellules en temps réel(RTCA) SP, RTCA MP et RTCA DP. L&#39;instrument SP RTCA détient un E-plaque de 96 puits alors que l&#39;instrument MP RTCA peut contenir jusqu&#39;à 96 puits E-plaques simultanément six. Cela permet de criblage à haut débit de médicaments et de composés. Les expériences présentées dans cet article sont effectuées en utilisant l&#39;instrument DP RTCA, qui peut contenir trois 16 et E-plaques. Chaque station de maintien E-plaque peut être utilisé indépendamment, ce qui permet à plusieurs utilisateurs d&#39;exécuter simultanément des expériences. L&#39;instrument RTCA DP peut également être utilisé pour étudier la migration en utilisant CIM-plaques. Ce sont des plaques de 16 puits avec des chambres supérieure et inférieure séparées par un téréphtalate de polyéthylène (PET) de la membrane avec une taille de pore médian de 8um. Les capteurs électroniques sont situés sur la face inférieure de la membrane poreuse de la chambre supérieure. La chambre inférieure sert de réservoir pour la chimio-attractive pour les cellules dans la chambre supérieure. Cependant, un avantage majeur de l&#39;essai d&#39;invasion HUVEC sur les CIM-plaques est que l&#39;invasion des cellules tumorales dans l&#39;ex-in&#39;est pas limité par la taille des pores, comme l&#39;invasion des cellules endothéliales dépend de la diaphonie entre les cellules tumorales et endothéliales. Le dosage de l&#39;invasion HUVEC peut également être effectuée sur ECIS instrument Z, fabriqué par Applied Biophysique (Troy, NY). L&#39;instrument ECIS Z utilise une technologie semblable à celle de l&#39;instrument de xCELLigence, avec des différences dans les configurations de modules et de l&#39;électrode. Nous avons réalisé avec succès des essais d&#39;invasion HUVEC en utilisant les tableaux de ECIS 8 puits. Il est important de noter que la superficie bien inférieure est plus grande dans les tableaux ECIS, qui exige un plus grand nombre de cellules endothéliales et tumorales d&#39;être plaqué: 2,5 x 10 10 cellules de 5 et 1 x 5 respectivement.

<table><tbody><tr><td>Station xCELLigence RTCA DP</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469759001</td><td></td></tr><tr><td>Unité de contrôle RTCA</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05454417001</td><td>Ordinateur portable avec logiciel RTCA préinstallé</td></tr><tr><td>Plaque E-Plate 16</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469830001</td><td></td></tr><tr><td>Cellules HUVEC</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-2517</td><td></td></tr><tr><td>Milieu EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>Kit complémentaire EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Gélatine 0,1 % dans H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O stérile</td><td>EMD Millipore</td><td>MCPROTO045</td><td></td></tr></tbody></table>

une technique basée impédance électrique en temps réel pour mesurer invasion de monocouche de cellules endothéliales par les cellules cancéreuses

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

La dissémination métastatique des cellules malignes nécessite une dégradation de la membrane basale, la fixation des cellules tumorales à l&#39;endothélium vasculaire, la rétraction des jonctions endothéliales et, enfin, l&#39;invasion et la migration des cellules tumorales dans la couche endothéliale à pénétrer dans le sang en tant que moyen de transport à des sites distants chez l&#39;hôte 1-3. Une fois dans le système circulatoire, les cellules cancéreuses adhèrent aux parois capillaires et s&#39;extravaser aux tissus environnants pour former des tumeurs métastatiques 4,5. Les différentes composantes de l&#39;interaction cellulaire des cellules endothéliales tumorales peuvent être reproduits in vitro en contestant une monocouche de cellules endothéliales de veine ombilicale humaine (HUVEC) avec des cellules cancéreuses. Les études réalisées avec la microscopie électronique et à contraste de phase suggèrent que la séquence dans in vitro des événements représentent fidèlement le processus métastatique in vivo 6. Ici, nous décrivons une technique basée électrique impédance qui surveille et quantifie en temps réel les invasionique des cellules endothéliales par les cellules tumorales malignes. Giaever et Keese décrit d&#39;abord une technique de mesure des variations de l&#39;impédance quand une population de cellules se développent à la surface des électrodes 7,8. L&#39;instrument de xCELLigence, fabriqué par Roche, utilise une technique similaire pour mesurer les changements d&#39;impédance électrique que les cellules se fixent et se répandent dans une boîte de culture recouvert d&#39;une matrice de microélectrodes d&#39;or qui couvre environ 80% de la surface au fond d&#39;un puits. Comme les cellules se fixent et se propagent à la surface de l&#39;électrode, elle conduit à une augmentation de l&#39;impédance électrique 9-12. L&#39;impédance est affiché en tant que paramètre appelé cellule d&#39;indice sans dimension, qui est directement proportionnelle à la surface totale de culture de tissu et qui est recouverte par les cellules. Ainsi, la cellule-index peut être utilisé pour contrôler l&#39;adhérence des cellules, d&#39;étalement, de la morphologie et de la densité des cellules. Le dosage de l&#39;invasion décrit dans cet article est basé sur des changementsl&#39;impédance électrique au niveau de l&#39;électrode / cellule en interphase, en tant que population de cellules malignes envahir par une monocouche HUVEC (Figure 1). La perturbation des jonctions endothéliales, la rétraction de monocouche endothéliale et le remplacement par des cellules tumorales conduit à de grandes variations d&#39;impédance. Ces modifications sont en corrélation directe avec la capacité invasive des cellules tumorales, à savoir, d&#39;une invasion par des cellules très agressifs conduisent à de grandes variations de l&#39;impédance de la cellule et vice versa. Cette technique permet un double avantage par rapport aux méthodes existantes de mesure invasion, tels que chambre de Boyden et analyses matrigel: 1) l&#39;interaction cellulaire des cellules tumorales endothéliales imite de plus près le procédé in vivo, et 2) les données sont obtenues en temps réel, temps et est plus facilement quantifiable, par opposition à l&#39;analyse des paramètres pour d&#39;autres méthodes.

Cet article décrit une<em&gt; In vitro</em&gt; Technique pour les cellules cancéreuses de surveillance d&#39;invasion par une monocouche de cellules endothéliales. Les données sont acquises en temps réel en fonction des variations d&#39;impédance sur la surface des électrodes en fond de puits.

Une technique basée Impédance électrique en temps réel pour mesurer Invasion de monocouche de cellules endothéliales par les cellules cancéreuses

La dissémination métastatique des cellules malignes nécessite la dégradation de la membrane basale, l'adhérence des cellules tumorales à l'endothélium vasculaire, la rétraction de...

Ce vidéo montre une méthode permettant de surveiller l'envahissement d'une monocouche de cellules endothéliales par des cellules cancéreuses, en utilisant une technique basée sur l'impédance électrique en temps réel. Tout d'abord, des cellules endothéliales de veine ombilicale humaine, appelées VE, sont mises en culture dans des plaques EPL à 16 puits revêtues d'électrodes d'or au fond de chaque puits. Pour former une monocouche confluente, des cellules cancéreuses sont ajoutées ; elles s'attachent aux cellules VE et envahissent la monocouche HVAC, perturbant ainsi les jonctions entre les cellules endothéliales. Des mesures d'impédance, qui dépendent de la surface totale du fond du puits recouverte par les cellules, sont ensuite enregistrées.L'ampleur de l'invasion peut ensuite être déterminée en fonction des changements d'impédance électrique. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que les tests de chambre à vide et les dosages METROGEL, est que les interactions entre les cellules endothéliales et les cellules tumorales imitent plus fidèlement le processus métastatique in vivo, et que les données sont obtenues en temps réel et sont plus facilement quantifiables, contrairement à l'analyse ponctuelle utilisée pour d'autres méthodes. Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur l'invasion des cellules cancéreuses.Il peut également être appliqué à d'autres systèmes, comme l'étude des interactions entre cellules dans le système immunitaire. De plus, la phase initiale de l'expérience, durant laquelle nous observons la croissance des cellules UX, peut être utilisée pour évaluer la prolifération cellulaire de n'importe quelle lignée cellulaire, sans étapes supplémentaires d'envahissement, ce qui démontre que la procédure sera utile sur le site. Rahim, étudiante diplômée de mon laboratoire. Toutes les étapes de ce protocole doivent être réalisées dans des conditions stériles, dans une hotte de culture tissulaire.Le système Xcel utilisé pour cette expérience est conservé en permanence dans un incubateur à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone, dédié exclusivement à cet instrument dès sa première utilisation. L'instrument doit rester dans l'incubateur pendant au moins 16 heures afin de s'équilibrer avec le nouvel environnement de température et d'humidité. Ensuite, préparez le Thence EPL 16 en le recouvrant de gélatine à 0,1 % pendant une heure à 37 degrés Celsius.Une fois la plaque enrobée, lavez-la une fois avec du PBS. Ajoutez ensuite 100 microlitres de milieu e gm deux reconstitué pour effectuer une mesure de blanc, afin de mesurer l'impédance de fond en l'absence de cellules.Placer l'EPL dans le système d'agent Excel sur l'ordinateur. Ouvrir le logiciel d'agent Excel en cliquant sur l'icône du logiciel RTCA sur le bureau dans la fenêtre du logiciel. Cliquer sur l'onglet disposition et sélectionner les puits contenant les échantillons.Pour programmer la fréquence d'acquisition de données en temps réel, cliquez sur l'onglet planification, puis sur l'icône ajouter une étape. Sweeps indique le nombre de mesures et intervals indique l'intervalle de temps entre les mesures. Ces paramètres sont automatiquement réglés respectivement sur un et 1,00 minute.Ceci programme le système pour effectuer une lecture de fond. Cliquez sur ajouter une étape et saisissez 300 dans la case balayages et 10 minutes dans la case intervalles. Ceci programmera l'appareil pour effectuer des mesures d'impédance pendant jusqu'à 50 heures.Pour commencer l'expérience, cliquez sur l'icône démarrer une étape. L'impédance de fond de chaque puits sera mesurée après la réalisation de la mesure de fond. La fenêtre affiche le message.Prêt pour l'étape suivante, veuillez cliquer. Prochaine étape à démarrer. À ce stade, les cellules peuvent être ajoutées et la formation d'une monocouche peut être surveillée comme décrit.Dans la section suivante, les cellules endothéliales de veine ombilicale humaine, ou VE utilisées ici, sont cultivées dans un milieu EGM deux reconstitué avec le complément EGM deux bullet kit contenant des suppléments de facteurs de croissance et 5 % de FBS. Les cellules doivent être maintenues dans un incubateur à 37 degrés Celsius en présence de 5 % de dioxyde de carbone. Le jour de l'expérience, vérifiez la confluence des HUB E au microscope. Les cellules doivent avoir un numéro de passage faible, de préférence pas plus de six et une confluence inférieure à 75 %, afin de produire une monocouche homogène. Récoltez les cellules par trypsine. Une fois que les cellules se sont détachées du flacon, éliminez toute trace de trypsine par centrifugation à 200 ×g. Après la centrifugation, lavez les cellules une fois avec du PBS.Ensuite, resuspendre les cellules et le milieu e GM deux reconstitué à une concentration de 2,5 × 10⁵ cellules par millilitre. Une fois les cellules resuspendues, retirer le EPL étalonné en fond du système EXOGEN et ajouter 100 microlitres de la suspension HX aux 100 microlitres de milieu E GM deux déjà présents dans la plaque. Placer immédiatement le EPL dans l'analyseur cellulaire du système Excel.Commencez à acquérir les mesures d'impédance en cliquant sur le bouton de démarrage dans la fenêtre du logiciel. Laissez les cellules endothéliales se développer. Le système continuera à effectuer des mesures d'impédance toutes les 10 minutes.Les UVE présentent un aplatissement transitoire caractéristique de l'indice cellulaire quatre à six heures après l'ensemencement, suivi d'une nouvelle stabilisation après 16 à 18 heures. Il est donc important de laisser les cellules former une monocouche confluente pendant au moins 18 heures. Une fois la monocouche formée, il est temps d'ajouter les cellules invasives en prévision du test d'invasion.Préparez les cellules tumorales envahissantes. Ici, des cellules d'ostéosarcome sont utilisées. Commencez par récolter les cellules à l'aide de trypsine.Éliminer toutes les traces de trypsine en centrifugeant les cellules à 200 G et en les lavant une fois avec du PPS. Après le lavage, resuspendre les cellules à une densité finale de un fois dix puissance cinq cellules par millilitre dans le milieu utilisé pour cultiver les cellules tumorales, comme le milieu RPMI ou le milieu DMEA contenant 10 % de FBS. Interrompre l'expérience en cliquant sur l'icône d'étape de pause dans la fenêtre du logiciel.Retirez l'EPL et aspirez le milieu EGM-2 du monocouche. Ajoutez 100 microlitres de suspension de cellules tumorales contenant 1 × 10⁴ cellules. Généralement, un ratio de 1 à 2,5 cellules tumorales pour une cellule endothéliale donne les meilleurs résultats pour le test.Cependant, le ratio peut être optimisé pour chaque lignée cellulaire. Remettez l'EPL dans le système Excel Agent dans l'incubateur. Cliquez sur l'étape continuer pour poursuivre la prise de mesures d'impédance à des intervalles de 10 minutes.Surveillez l'invasion en temps réel pendant les six à douze heures suivantes. Une diminution de l'indice cellulaire résulte du rétrécissement des jonctions endothéliales et de la pénétration par les cellules tumorales envahissantes. À la fin de l'expérience, utilisez le logiciel exergen pour normaliser les résultats par rapport au moment de l'ajout des cellules tumorales envahissantes.Le logiciel exergen permet la normalisation à n'importe quel point temporel où les VEX ont été cultivés sur le système exergen, comme illustré dans cette vidéo, et soit les cellules K7M2, soit les cellules K12 ont été ajoutées après la formation de la monocouche. Comme indiqué ici, une diminution importante de l'indice cellulaire se produit quelques heures après l'ajout des cellules K7M2. K7M2 est une lignée cellulaire d'ostéosarcome hautement métastatique.Ces cellules expriment des niveaux élevés de la protéine de liaison cytosquelettique ene, ce qui explique les propriétés invasives de la lignée cellulaire. Les cellules K 12, en revanche, sont moins métastatiques et incapables de pénétrer la monocouche endothéliale aussi efficacement que les cellules K seven M two. Ceci se traduit par une diminution moins marquée de l'indice cellulaire, comme indiqué ici.Le témoin illustré ici représente l'impédance de la monocouche uvéale. En l'absence de cellules cancéreuses, les expériences ont été réalisées en triplicata. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment mesurer l'envahissement en temps réel en générant une monocouche de cellules endothéliales et en soumettant cette monocouche à des cellules cancéreuses.Les premières étapes de l'expérience impliquant la formation d'une monocouche HU XL peuvent être utilisées pour évaluer la prolifération cellulaire par impédance. Deux.

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Cette vidéo décrit un test d’invasion utilisant un réseau à trois chambres basé sur l’impédance électrique. Cette technique mesure le potentiel invasif des cellules cancéreuses sous l’influence de facteurs solubles sécrétés par les cellules stromales résidentes dans les microenvironnements tumoraux.

Test d’impédance basé sur un réseau à trois chambres : une technique d’analyse en temps réel pour évaluer le potentiel invasif des cellules cancéreuses en mesurant l’impédance électrique

Source : Mudduluru, G., et. al. Mesure en temps réel de la migration et de l’invasion des cellules cancéreuses basée sur l’impédance. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo présente un test basé sur l’impédance pour mesurer l’invasion et la migration des cellules de glioblastome. Les cellules dégradent la matrice extracellulaire, se déplacent à travers des membranes microporeuses et adhèrent aux électrodes, générant ainsi de l’impédance. Cette analyse en temps réel reflète leur potentiel invasif pour...

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Ce protocole d'évaluations Cell-substrat électrique impédance de détection, un procédé pour enregistrer et analyser le spectre de cellules adhérentes d'impédance pour la quantification de la fixation cellulaire, la prolifération, la motilité et la réponse cellulaire aux stimuli pharmacologiques et toxiques. La détection de la perméabilité endothéliale et l'évaluation des contacts cellule-cellule et cellule-substrat sont mis en évidence.

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Le cancer est une maladie mortelle en raison de sa capacité à métastaser à différents organes. Déterminer la capacité des cellules cancéreuses à migrer et à envahir dans diverses conditions de traitement est crucial pour évaluer les stratégies thérapeutiques. Ce protocole présente une méthode pour évaluer les capacités métastatiques en temps réel d’une lignée de cellules cancéreuses de glioblastome.

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Nous décrivons une approche pour détecter et capturer des sous-populations cellulaires invasives en temps réel. La conception expérimentale utilise l’analyse cellulaire en temps réel en surveillant les changements dans l’impédance électrique des cellules. Le cancer invasif, les cellules immunitaires, endothéliales ou stromales dans les tissus complexes peuvent être capturés et l’impact des co-cultures peut être évalué.

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De nombreux gènes régulés à la hausse stimulent la migration et l’invasion des cellules tumorales, ce qui entraîne un mauvais pronostic. Il est essentiel de déterminer quels gènes régulent la migration et l’invasion des cellules tumorales. Ce protocole présente une méthode permettant d’étudier en temps réel les effets de l’augmentation de l’expression d’un gène sur la migration et l’invasion des cellules tumorales.

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Un test pour mesurer quantitativement Transforming Growth Factor (TGF)-β-induite invasion dans des gels de collagène en 3 dimensions est décrite. Ce test prend avantage de la série MCF10A de lignées cellulaires, qui représentent les différentes étapes du développement du cancer du sein. Cette méthode peut être adoptée pour être utilisé avec d'autres lignées cellulaires et pourraient être utilisées pour étudier d'autres activateurs ou des inhibiteurs potentiels de l'invasion.

Assay Sphéroïde pour mesurer le TGF-β induit Invasion

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Une technique basée Impédance électrique en temps réel pour mesurer Invasion de monocouche de cellules endothéliales par les cellules cancéreuses (Vidéo) | JoVE Journal

Une technique basée Impédance électrique en temps réel pour mesurer Invasion de monocouche de cellules endothéliales par les cellules cancéreuses

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