Name: La détection de plaques séniles dans le modèle dAlzheimer La maladie de la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Apprenez la détection des plaques séniles dans le modèle de souris Alzheimer par immunohistochimie 4G8 et thioflavine S. Ces méthodes permettent une visualisation précise des dépôts de protéine bêta-amyloïde.

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Ce travail a été soutenu par les Instituts canadiens de recherche en santé du Canada (IRSC), la famille Townsend, et Jack Brown et la famille d&#39;Alzheimer Research Foundation (WAS). WS est le titulaire de la Chaire de recherche du Canada sur la maladie d&#39;Alzheimer. PTTL est soutenu par les sciences naturelles et en conseil de recherche en génie et la Fondation Michael Smith pour des bourses de recherche en santé.

1. Fixation des cerveaux de souris et de cryosectioning <ol><li> Les souris transgéniques sont sacrifiés à l'aide de gaz de dioxyde de carbone, suivie par la décapitation et le cerveau extrait. </li><li> Le cerveau est disséqué longitudinalement au centre. La moitié du cerveau seront surgelés sur glace sèche pour l'analyse biochimique. L'autre sera submergé dans du paraformaldéhyde 4% (PFA) pour au moins 48 heures à 4 ° C. </li><li> Après fixation au PFA 4% pendant au moins 48 heures, le cerveau hémi est transféré directement dans la solution de saccharose à 30% et placés à 4 ° C. Au point, le cerveau hémi doit être flottant dans la solution de saccharose. Quand le cerveau hémi coulé au fond, nécessitant habituellement environ 48 heures, il est prêt à être incorporé dans PTOM pour cryosectioning. </li><li> Avant cryosectioning, monter une fine couche de PTOM sur le bouton et laisser congeler à -20 ° C. Retirez le cervelet du reste du cerveau hémi et placer sur la couche de gelée octobre Recouvrir immédiatement le cerveau avec des hémi PTOM et permettent une lente congeler à -20 ° C. Une fois l'enrobage PTOM Le cerveau a tourné opaque, il est prêt à être sectionné. </li><li> Définissez l'épaisseur de chaque section à 30 um. Recueillir chaque tranche dans un récipient avec D'Olomos solution. </li></ol> 2. Procédure d'immunohistochimie pour plaques séniles (gratuit sections flottantes) <ol><li> Traiter chaque section dans l'acide formique à 88% pendant 15 minutes. Après traitement à l'acide formique, la section sera temporairement tournera opaque et peut apparaître à se ratatiner. </li><li> Retirez chaque section dans une plaque et laver avec Tx-PBS (0,3% de Triton X-100 dans du PBS) pendant 5 min x 3 avec agitation douce. </li><li> Peroxyde bloc endogène bloquant 0,5% H 2 O 2 en Tx-PBS, RT 30 min en remuant doucement. </li><li> Lavez section avec Tx-PBS pendant 10 min x 3 avec agitation douce. </li><li> La section de bloc avec 5% non gras du lait écrémé dissous dans Tx-PBS à température ambiante pendant 1 heure en agitant doucement. </li><li> Incuber sections dans l'anticorps primaire (biotinylé 4G8, 1:500-1:2000, Sceau) dilué dans Tx-PBS contenant 5% de lait à 4 ° C pendant une nuit sous agitation douce. </li><li> Lavez section avec Tx-PBS pendant 10 min x 3 avec agitation douce. </li><li> Préparer le protocole du fabricant ABC solution suivante (Elite ABC, Vector Laboratories,). Incuber sections dans le mélange de ABC pendant 30 min en remuant doucement. </li><li> Lavez section avec Tx-PBS pendant 10 min x 3 avec agitation douce. </li><li> Préparer 3,3 '-diaminobenzidine tétrachlorhydrate (DAB) (Vector Laboratories) le protocole du fabricant. Incuber le mélange de sections DAB pendant 5-10 min. À ce stade, vous pourrez observer une couleur brunâtre se développer sur chaque section. </li><li> Lavez section avec Tx-PBS pendant 10 min x 3 avec agitation douce. </li><li> Coupes de cerveau flottant sont montées sur des lames recouvertes de gélatine, pour aider à l'adhérence des tissus. Les articles sont ensuite séchés à l'air suivie par compensation avec une série de xylène et monté dans Entellen. </li><li> Les plaques sont visualisés en microscopie optique à un grossissement de 40X et sont quantifiés en évaluant le nombre de plaques signifie par tranche pour chaque souris. </li></ol> 3. Thioflavine S coloration procédure de détection de plaques séniles <ol><li> Le sacrifice de la souris et la procédure d'extraction du cerveau sont, comme indiqué dans les sections 1.1 à 1.5. </li><li> Mont 4 à 5 coupes de cerveau hémi sur une lame de verre et laisser sécher à l'air complètement avant la coloration. </li><li> Laver les lames à l'éthanol 70% pendant 1 minute. </li><li> Laver les lames avec de l'éthanol 80% pendant 1 minute. </li><li> Incuber les lames dans la solution filtrée (filtre de 0,2 um) thioflavine S (1% dans 80% d'éthanol) pendant 15 minutes. (Solution thioflavine S doit être filtrée avant chaque utilisation). Remarque: protéger la thioflavine S de la lumière et à protéger les lames colorées de la lumière. </li><li> Laver les lames avec de l'éthanol 80% pendant 1 minute. </li><li> Laver les lames avec de l'éthanol 1 minute à 70%. </li><li> Laver à l'eau distillée deux fois. </li><li> Mont diapositives en milieu aqueux de montage et permettent lames sécher dans l'obscurité pendant au moins 2 heures, suivie par la lamelle d'étanchéité avec du vernis à ongles transparent. Les sections colorées doivent être stockés dans l'obscurité à 4 ° C. </li><li> La fluorescence verte plaques colorées pourrait être visualisées avec microscropy fluorescentes. Analyser des diapositives dans une semaine à cause de la coloration va s'estomper avec le temps. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs Dans notre étude récente sur l'efficacité du médicament anti-épileptique et l'acide stabilisateur de l'humeur valproïque (VPA) à inhiber la formation de plaques séniles, nous avons utilisé l'immunomarquage ci-dessus décrites et thioflavine S coloration des procédures pour identifier les plaques séniles chez la souris modèle AD (3). La figure 1 représente une caractéristique de 9 mois APP23 souris transgénique, teinté d'anti-Aß utilisant 4G8 biotinylé et détectée par la méthode ABC. Plaques séniles sont clairement marquées avec l'anticorps et sont indiqués par des flèches blanches. Utilisant une coloration thioflavine S, nous avons détecté dépôt de plaque neuritique 2 mois APP23xPS TRAnsgenic souris (figure 2). Thioflavine S liée plaques séniles contenant Aßi apparaît sous microscopie à fluorescence verte (indiquées par des flèches blanches). Nous avons montré que le traitement APV, la formation de plaques séniles est significativement réduite (3). Dans une autre étude, nous avons étudié l'hypoxie lien moléculaire sous-jacente et la pathogenèse AD. Encore une fois, en utilisant à la fois coloration immunohistochimique 4G8 anti-Aß et coloration thioflavine S, nous avons constaté que l'hypoxie a facilité la formation de plaques séniles contenant Aß (4). <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. L'analyse immunohistochimique de formation de plaques séniles chez des souris transgéniques après JC. APP23 souris à l'âge de 9 mois ont été sacrifiés et ont été disséqués, fixe, et sectionné. Plaques séniles dans le hippocampe ont été détectés en utilisant un anticorps anti-4G8 Aßi et ont été développés en utilisant les méthodes ABC et DAB. Les plaques ont été visualisées par microscopie optique en 40X. Les flèches blanches au point de plaques séniles Aß. <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Coloration thioflavine S de plaques séniles chez les souris AD modélisés. APP23xPS45 souris doublement transgéniques à 8 semaines ont été sacrifiés et ont été disséqués, fixe, et sectionné. Fléaux neuritique dans l'hippocampe sont ont été confirmés en utilisant coloration fluorescente thioflavine S et visualisées par microscopie à un grossissement de 40X. Les flèches blanches indiquent les plaques séniles thioflavine S tachés.

<ol><li>Glenner, G. G., Wong, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+initial+report+of+the+purification+and+characterization+of+a+novel+cerebrovascular+amyloid+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein.</a> Biochem Biophys Res Commun. 120, 885-890 (1984).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H., Zhou, W., Wang, K., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 18727-18732 (2006).</li>
</ol>

Toutes les expériences ont été menées en conformité avec l&#39;Université de la Colombie Soins des animaux-Britannique et le comité de l&#39;utilisation et les lignes directrices des IRSC.

L&#39;immunohistochimie utilisant l&#39;anticorps biotinylé étiquetés taches 4G8 plaques séniles dans la MA modélisé souris avec une spécificité. Le résultat coloration permet la quantification et la comparaison de la charge de la plaque entre les différents groupes de traitement. Il ya plusieurs étapes cruciales qui pourraient affecter le résultat. Parce que les cerveaux ne sont pas hémi perfusé avant l&#39;extraction du crâne, les soins devraient être utilisés pendant le processus d&#39;extraction afin de prévenir les dommages au cerveau hémi. Par ailleurs, puisque le cerveau est passivement hémi perfusé, nous vous recommandons d&#39;incubation de 4% PFA pour au moins 48 heures à 4 ° C avant de plonger dans la solution de saccharose à 30%. Alternativement, la perfusion transcardial pourrait être fait avant l&#39;extraction du cerveau. Si le cerveau est fixé correctement, il doit avoir une texture caoutchouteuse. Dans le cas où le cerveau n&#39;est pas fixée correctement, les sections se déchirer dans la solution D&#39;Olomos ou pendant les procédures de coloration. L&#39;anticorps monoclonal 4G8 est réactif aux résidus d&#39;acides aminés 17-24 de Aß et reconnu l&#39;épitope dans la séquence de base (VFFAE). Depuis 4G8 proviennent d&#39;espèces de souris, elle tend à donner une coloration de fond plus élevé. Ainsi, nous avons choisi d&#39;incuber les sections à la dilution indiquée par des considérations de parvenir à un vrai signal, tout en minimisant la coloration de fond. En plus d&#39;immunomarquage pour la détection des plaques séniles en utilisant l&#39;anticorps 4G8, une méthode de coloration thioflavine S est aussi utilisé pour identifier les plaques. Thioflavine S est un mélange de colorant homogène qui résulte de la méthylation de déhydrothiotoluidine avec de l&#39;acide sulfonique. Thioflavine S non sélective lie le contenu des feuillets bêta de protéines, comme celles en oligomères amyloïdes. Lors de la liaison, thioflavine subit un décalage bleue caractéristique de son spectre d&#39;émission. Inversement contraignante thioflavine S pour les formes monomériques ne sera pas susciter un décalage vers le bleu et ne pouvaient pas être détectés avec microscope à fluorescence. Coloration thioflavine S offre une alternative rapide à l&#39;écran de l&#39;amyloïde comme l&#39;intensité de fluorescence permet une bonne visualisation de petites quantités de dépôts amyloïdes. Cependant, un inconvénient de coloration thioflavine S est le manque de spécificité. Beaucoup de composants d&#39;autres tissus, y compris contenant des feuillets bêta étendue, comme fibrinoids, hyalines, la kératine, etc, ont une affinité plutôt pour ce colorant.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif et de l&#39;équipement </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PVP40-100G </td></tr><tr><td> Saccharose </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-3 </td></tr><tr><td> L&#39;éthylène glycol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 324 558-2L </td></tr><tr><td> Tissue-Tek octobre Compound </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> 88% d&#39;acide formique </td><td> Fisher Scientific </td><td> A118P-500 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> ICN Biomedicals </td><td> 807426 </td></tr><tr><td> H2O2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H-1009 </td></tr><tr><td> Biotine 4G8 Anticorps </td><td> Cedarlane </td><td> SIG-39240-500 </td></tr><tr><td> Elite ABC kit </td><td> Vecteur </td><td> PK-6100 </td></tr><tr><td> Imm PACT DAB </td><td> Vecteur </td><td> SK-4105 </td></tr><tr><td> Xylène </td><td> Fisher Scientific </td><td> X4-4 </td></tr><tr><td> Entellan </td><td> EM Science </td><td> 65037-71 </td></tr><tr><td> * Superfrost Plus Lames de microscope </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Cryostat </td><td> Leica </td><td> CM-3050-S </td></tr><tr><td> MX35 Premier microtome lame </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3052835 </td></tr><tr><td> Thioflavine S </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1892-25G </td></tr></tbody></table>

la détection de plaques séniles dans le modèle d&#39;alzheimer la maladie de la souris

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

La maladie d&#39;Alzheimer (MA) est le trouble neurodégénérative la plus fréquente conduisant à la démence. Formation de plaques séniles est l&#39;une des caractéristiques pathologiques de la maladie d&#39;Alzheimer. Le composant central de plaques séniles est une petite protéine appelée protéine filamenteuse β-amyloïde (Aß) 1, qui est dérivé du clivage protéolytique séquentiel de la protéine précurseur bêta-amyloïde (APP) par β-sécrétase et γ-sécrétase. L&#39;hypothèse amyloïde implique que Aγ contenant des plaques que le mécanisme sous-jacent dans la pathologie de la MA toxiques 2. L&#39;analyse post-mortem de la présence de plaques séniles confirme le diagnostic de la MA. Pour approfondir notre compréhension de la neurobiologie Aγ dans la pathogenèse de AD, différentes souches de souris exprimant AD liés à des mutations dans les gènes APP humaine ont été générés. Selon la gravité de la maladie, ces souris se développera plaques séniles à des âges différents. Ces souris sont des outils précieux pour étudier le développement pathogenèse et de médicaments qui pourraient affecter la voie de traitement APP et la formation des plaques séniles. Dans ce protocole, nous employons une méthode immunohistochimique pour la détection spécifique de plaques séniles chez la souris modèle AD. Nous allons discuter spécifiquement de la préparation d&#39;extraire le cerveau et demi, la fixation de paraformaldéhyde, cryosectioning, et deux méthodes pour détecter les plaques névrotique chez des souris transgéniques AD: détection immunohistochimique utilisant la méthode ABC et DAB et détection par fluorescence en utilisant la méthode de coloration thiofalvin S.

Une des caractéristiques pathologiques de la MA est la formation de plaques amyloïdes β protéines neuritique positif. Dans ce protocole, nous décrivons deux méthodes pour détecter les plaques séniles dans le modèle de souris transgéniques AD: détection immunohistochimique utilisant la méthode ABC et DAB et détection par fluorescence en utilisant la méthode de coloration thioflavine S.

La détection de plaques séniles dans le modèle d&#39;Alzheimer La maladie de la souris

La maladie d'Alzheimer (MA) est le trouble neurodégénératif le plus fréquent conduisant à la démence. La formation de plaques neuritiques constitue l'une des signatures pathologiques...

L'objectif général de cette procédure est de préparer des cerveaux de souris modèles d'AD pour la détection des plaques réticielles à l'aide d'une immunomarquage par l'anticorps 4G8 et d'une coloration par thioflavine S. Cette préparation consiste d'abord à extraire le cerveau de la souris du crâne et à effectuer une perfusion passive dans du PFA à 4 %, suivie d'une immersion dans une solution de saccharose à 30 %, puis d'une section cryogénique du cerveau dans le plan longitudinal à une épaisseur de 30 micromètres. Ensuite, les plaques réticielles sont marquées à l'aide de l'anticorps 4G8 et visualisées par la méthode DAB.En outre, colorer les plaques réticiques par la coloration au thioflavine S et les visualiser à l'aide d'une microscopie en fluorescence. En fin de compte, les résultats obtenus peuvent montrer le dépôt de plaques réticiques dans les tissus cérébraux grâce à une détection par anticorps et à une coloration au colorant thioflavine S. Le principal avantage de ces techniques par rapport aux méthodes existantes est que la coloration 4G huit et la thioflavine S sont hautement sélectives pour les plaques réticiques contenant des protéines bêta.Bien que cette méthode soit décrite ici pour détecter les plaques bêta chez des souris transgéniques modèles de la maladie d'Alzheimer, elle peut également être utilisée pour détecter les plaques bêta dans le cerveau humain atteint de la maladie d'Alzheimer. Sacrifier les souris transgéniques à l’aide de gaz de dioxyde de carbone, puis les décapiter, extraire le cerveau et le disséquer longitudinalement au centre. Congeler rapidement par immersion dans de la glace sèche une moitié du cerveau pour une analyse biochimique, et plonger l’autre moitié dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant au moins 48 heures à quatre degrés Celsius.Transférez l'hémicerveau dans une solution de saccharose à 30 % à quatre degrés Celsius. Initialement, l'hémicerveau flottera dans la solution de saccharose, mais après 24 à 48 heures, il coulera au fond. Avant la coupe en cryostat, déposez une fine couche de OCT sur le bouton et laissez-la geler à moins 20 degrés Celsius. Retirez le cervelet du reste de l'hémicerveau.Placer le reste sur la couche d’OCT congelée, le recouvrir immédiatement d’OCT et laisser congeler lentement à moins 20 degrés Celsius. Régler le cryostat sur une épaisseur de coupe de 30 micromètres et recueillir chaque section dans un récipient contenant la solution Domo. Traiter chaque section libre avec de l’acide formique à 88 % pendant 15 minutes.Les sections semblent se ratatiner. Transférez ensuite chaque section sur une plaque et lavez trois fois avec du XPBS Triton pendant cinq minutes en agitant doucement. Atténuez l'activité endogène avec du peroxyde d'hydrogène 0,5 % dans du XPBS Triton pendant 30 minutes à température ambiante en agitant doucement.Ensuite, laver les sections trois fois avec du XPBS-Triton pendant 10 minutes sous agitation douce, puis bloquer les sections avec 5 % de lait écrémé sans matières grasses dissous dans du XPBS-Triton pendant une heure à température ambiante sous agitation douce. Poursuivre l'incubation des sections dans l'anticorps primaire dilué dans du XPBS-Triton contenant 5 % de lait à quatre degrés Celsius toute la nuit sous agitation douce. Laver les échantillons trois fois avec du PBS-Triton pendant 10 minutes.Préparez maintenant une solution B, C selon le protocole du fabricant et incubez les sections dans le mélange A B, C pendant 30 minutes sous agitation douce, suivies de trois lavages avec du PBS Triton X-100 pendant 10 minutes. Incubez les sections dans un mélange DAB fraîchement préparé pendant cinq à 10 minutes, dès qu'une coloration brunâtre apparaît sur chaque section, puis rincez trois fois avec du PBS Triton X-100 pendant 10 minutes sous agitation douce. Montez les sections cérébrales en flottaison sur des lames recouvertes de gélatine, laissez-les sécher à l'air, dégraissez à l'aide d'une série de traitements au xylène, puis montez-les dans du lin.Visualisez les plaques en microscopie optique à un grossissement de 40 x et quantifiez le nombre moyen de plaques par coupe pour chaque souris. Prélèvez le tissu cérébral des souris comme indiqué précédemment. Montez quatre à cinq sections hémicérébrales sur une lame de verre et laissez-les sécher à l'air. Déshydratez complètement les échantillons dans de l'éthanol à 70 % pendant une minute, puis dans de l'éthanol à 80 % pendant une minute. Incubez ensuite les lames dans une solution de THEOF Flavin S filtrée à 0,1 % pendant 15 minutes.En prenant soin de protéger la solution de Theof Flavin S et les lames colorées de la lumière, laver les lames avec de l'éthanol à 80 % pendant une minute, puis avec de l'éthanol à 70 % pendant une minute, et enfin deux fois avec de l'eau distillée. Monter ensuite les lames dans un milieu de montage aqueux et les faire sécher à l'air à l'abri de la lumière pendant au moins deux heures, puis sceller la lame couvre-objet avec du vernis incolore. Conserver les coupes colorées à l'abri de la lumière à quatre degrés Celsius.Enfin, visualisez les plaques marquées en vert fluorescent au microscope à fluorescence dans un délai d'une semaine. Dans notre étude récente sur l'efficacité du médicament antiépileptique et stabilisateur de l'humeur, l'acide valproïque, pour inhiber la formation de plaques réticulaires, nous utilisons la coloration immuno ci-dessus décrite ainsi que la procédure de coloration par les flavines pour identifier les plaques réticulaires chez des souris modèles de la maladie d'Alzheimer. Une souris transgénique APP23 typique âgée de neuf mois est colorée avec l'anticorps anti-Aβ en utilisant le 4G8 BIOTINYLÉ et détectée par la méthode ABC.Les plaques réticiques neuro sont clairement marquées par l'anticorps et sont indiquées par les flèches blanches. Ici, la coloration par le flavin S détecte le dépôt de plaques réticiques chez des souris transgéniques APP 23×PS âgées de deux mois. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en trois jours si elle est effectuée correctement. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de bien fixer le cerveau dans du PFA à 4 % et de s'assurer que le cerveau s'enfonce complètement au fond de la solution de saccharose à 30 %.Après cette procédure, d'autres méthodes telles que l'immunomarquage dirigé contre la protéine tau peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires comme l'hyperphosphorylation de la protéine tau et la dégénérescence neuronale.

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Modèles de souris transgéniques (Tg) de AD offrent une excellente occasion d'examiner comment et pourquoi les niveaux de Aß ou de tau dans le LCR changements que la maladie progresse chez les patients humains. Ici, nous démontrons une technique raffinée cisterna magna perforation pour l'échantillonnage CSF de série de la souris.

Une technique de recueil de série du liquide céphalorachidien de la grande citerne de souris

Source : Bisht, K., et. al. Microscopie corrélative à la lumière et à l’électronique pour étudier les interactions microgliales avec les plaques β-amyloïdes. J. Vis. exp. (2016) Cette vidéo montre la visualisation et la cartographie des plaques amyloïdes marquées au Methoxy-X04 dans le cerveau de souris atteintes de la maladie d’Alzheimer coupes par fluorescence et microscopie à fond clair, permettant une corrélation précise des plaques avec les structures anatomiques pour l’étude de la...

Visualisation et cartographie de plaques amyloïdes marquées au méthoxy-X04 dans une coupe de cerveau de souris atteinte de la maladie d’Alzheimer

Source : Arango-Lievano, M. et. al., Imagerie longitudinale in vivo de la cerebrovasculature : pertinence pour les maladies du SNC. J. Vis. Exp. (2016)Cette vidéo montre l’imagerie in vivo à deux photons pour visualiser des plaques amyloïdes marquées par fluorescence et un système vasculaire cérébral. La fluorescence bleue marque les plaques, tandis que la fluorescence verte met en évidence les vaisseaux sanguins cérébraux. Une carte 3D de la région d’intérêt et une imagerie en mosaïque à haute...

Imagerie in vivo de vaisseaux cérébraux et de plaques amyloïdes dans un modèle murin de la maladie d’Alzheimer

Ici, nous présentons un protocole pour la perfusion cérébrale stéréotaxique directe de bêta-amyloïde. Cette méthodologie fournit un modèle murin vivo alternatif pour aborder les effets à court terme de la bêta-amyloïde sur les neurones cérébraux.

Infusion stéréotaxique des oligomères bêta-amyloïde dans les Hippocampus souris

Le amyloïde-β (Aß) -injected modèle animal permet à l'administration d'une quantité et d'espèces de fragments Aß défini et réduit les différences individuelles au sein de chaque groupe d'étude. Ce protocole décrit l'injection intracérébroventriculaire (ICV) de Aß sans instrument stéréotaxique, ce qui permet la production d'anomalies du comportement de type Alzheimer chez les souris normales.

Injection intracérébroventriculaire de Peptides amyloïde-ß chez les souris normales à Provoquer Pleinement Déficits cognitifs de type Alzheimer

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En utilisant biocapteurs à base d&#39;enzymes pour mesurer Tonic et Phasic Glutamate dans les modèles murins d&#39;Alzheimer

On décrit ici une approche de dépistage comportementale qui peut être utilisée pour cribler des composés qui présentent une efficacité in vivo sur les comportements moteurs cognitifs et fonctionnels dans les modèles de souris transgéniques de la β-amyloïdose et de la tauopathie. Ces méthodes sont optimisées pour filtrer les composés pour l'activité dans des tâches de mémoire à court terme et de travail.

Évaluation de l&#39;alternance spontanée, reconnaissance récente d&#39;objets et assemblage des membres dans les modèles de souris transgéniques de la neuropathologie amyloïde-β et tau

Le présent protocole décrit et compare la procédure permettant d’effectuer une analyse complète de région ou de sous-région d’intérêt de sections cérébrales de souris sagittales afin de quantifier la charge bêta-amyloïde dans le modèle murin transgénique APP/PS1 de la maladie d’Alzheimer.

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Apprenez la détection des plaques séniles dans le modèle de souris Alzheimer par immunohistochimie 4G8 et thioflavine S. Ces méthodes permettent une visualisation précise des dépôts de protéine bêta-amyloïde.

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